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[目的]优化水牛卵泡液蛋白质差异表达样品制备程序,为相对和绝对定量同位素标签(iTRAQ)技术在蛋白质差异表达分析中的应用奠定基础.[方法]在蛋白质样品溶液酶解过程中,选择两种不同沉淀剂沉淀蛋白质,分别比较蛋白质酶解、iTRAQ标记反应和多肽色谱分离的效果;在纳升液相色谱(nano-LC)分离样品前用快速分离小柱进行处理,鉴定色谱分离效果,以确定蛋白质样品预处理的优化程序.[结果]相对于丙酮,使用含0.1％乙酸的丙酮—乙醇混合液(1∶1)作为沉淀剂可获得较好的蛋白质沉淀效果,蛋白沉淀为白色,蛋白质浓度为5.76μg/μL.相对于蛋白质溶液在还原烷基化后直接使用胰蛋白酶酶解,在酶解前沉淀蛋白质溶液可使蛋白样品的酶解效率更高,获得的肽段峰更丰富、峰值更高;可使多肽和iTRAQ试剂间产生有效的标记反应,母离子具有较高的碎裂效率,获得的二级碎片峰更丰富,iTRAQ试剂的特征报告离子116 m/z较117 m/z的谱图强,辨识度高;获得的多肽nano-LC分离色谱峰更丰富,峰值和分辨率更高.相对于直接进行LC分离,在nano-LC分离前用快速分离小柱对多肽溶液进行杂质处理,也可获得丰富的多肽nano-LC色谱峰,且峰值和分辨率较高.[结论]在iTRAQ试剂标记、蛋白质液相分离和差异分析前,使用适宜的沉淀剂处理蛋白质溶液,并以快速分离小柱除去多肽混合液小分子杂质,可使质谱获得更准确的鉴定结果. 相似文献
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[目的]优化水牛卵泡液蛋白质差异表达样品制备程序,为相对和绝对定量同位素标签(iTRAQ)技术在蛋白质差异表达分析中的应用奠定基础.[方法]在蛋白质样品溶液酶解过程中,选择两种不同沉淀剂沉淀蛋白质,分别比较蛋白质酶解、iTRAQ标记反应和多肽色谱分离的效果;在纳升液相色谱(nano-LC)分离样品前用快速分离小柱进行处理,鉴定色谱分离效果,以确定蛋白质样品预处理的优化程序.[结果]相对于丙酮,使用含0.1%乙酸的丙酮—乙醇混合液(1∶1)作为沉淀剂可获得较好的蛋白质沉淀效果,蛋白沉淀为白色,蛋白质浓度为5.76μg/μL.相对于蛋白质溶液在还原烷基化后直接使用胰蛋白酶酶解,在酶解前沉淀蛋白质溶液可使蛋白样品的酶解效率更高,获得的肽段峰更丰富、峰值更高;可使多肽和iTRAQ试剂间产生有效的标记反应,母离子具有较高的碎裂效率,获得的二级碎片峰更丰富,iTRAQ试剂的特征报告离子116 m/z较117 m/z的谱图强,辨识度高;获得的多肽nano-LC分离色谱峰更丰富,峰值和分辨率更高.相对于直接进行LC分离,在nano-LC分离前用快速分离小柱对多肽溶液进行杂质处理,也可获得丰富的多肽nano-LC色谱峰,且峰值和分辨率较高.[结论]在iTRAQ试剂标记、蛋白质液相分离和差异分析前,使用适宜的沉淀剂处理蛋白质溶液,并以快速分离小柱除去多肽混合液小分子杂质,可使质谱获得更准确的鉴定结果. 相似文献
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对红褐林蚁的多肽蛋白质进行了分离和制备,并对其免疫活性、镇痛及抗感染作用进行了研究.红褐林蚁水提物经SephadexG-50凝胶过滤层析分离得到组分Ⅰ和组分Ⅱ,经紫外检测均为蛋白质;每个组分经反相高效液相色谱分离和制备,组分Ⅰ得到a,b,c3个组分,其中组分a含量最高;组分Ⅱ得到d,e,f3个组分,其中组分e含量最高.淋巴细胞转化试验结果显示：组分a和组分e能抑制淋巴细胞增殖,表明其具有免疫活性;热板法所致小鼠痛阈值的变化和二甲苯诱发小鼠耳肿胀试验显示：红褐林蚁多肽试剂具有镇痛和抗感染作用. 相似文献
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通过高效凝胶过滤层析和反相高效液相色谱先后对大米渣蛋白酶解后的多肽溶液进行分离纯化,分别得到组分2和组分RF9;再经反相高效液相色谱-质谱联用对组分RF9进行分析鉴定得到抗氧化肽氨基酸序列L-Q-P-Y(Leu-Gln-Pro-Tyr),分子质量为520.277u。合成的抗氧化肽片段L-Q-P-Y质量浓度为1 mg/mL时,对DPPH自由基清除率达到85.84%。 相似文献
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[目的]制备含有碳碳双键结构的MAP激酶十三肽。[方法]以化学合成的2种磷酸化MAP激酶保守区段（十三肽）为原料,采用生物化学方法制备含有碳碳双键的十三肽;并确定合适的条件,使用反相液相色谱对这2种多肽进行分离、纯化。[结果]制备得到2种含有碳碳双键的MAP激酶多肽各20 mg。[结论]使用反相HPLC方法分离和制备丝氨酸去磷酸化的这2种多肽是可行的。 相似文献
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高效液相色谱(HPLC)分离和检测蛋白质 总被引：1，自引：0，他引：1
对近年来利用高效液相色谱(HPLC)分离检测蛋白质的研究作了综述.比较详细地介绍了用于蛋白质分析的各种HPLC模式、检测器、以及联用技术的发展情况,肯定了高效液相色谱在蛋白质分离检测中的重要作用. 相似文献
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植物乳杆菌发酵产生的抑菌物质经乙醇浸提、SephadexG-15层析、氨基酸组成分析、反相液相色谱分离及鉴定，发现该植物乳杆菌产生的抑菌物质为一类分子量较小（小于1000Da)，且比较接近，极性不同的多肽。 相似文献
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植物乳杆菌发酵产生的抑菌物质经乙醇浸提、SephadexG-15层析、氨基酸组成分析、反相液相色谱分离及鉴定，发现该植物乳杆菌产生的抑菌物质为一类分子量较小（小于1000Da)，且比较接近，极性不同的多肽。 相似文献
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小麦叶片蛋白质组的2D-LC分离及Nano LC-MS/MS分析 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】二维液相色谱（2D-LC）与双向电泳（2-DE）技术具有互补性,本文旨在探讨利用2D-LC和纳升级液相色谱串联质谱（Nano LC-MS/MS）技术分离鉴定小麦叶片蛋白质组的新方法。【方法】小麦叶片蛋白经提取、脱盐后,进行第一维阴离子交换分离;收集洗脱组分进行SDS-PAGE分析,并对非高丰度蛋白组分进行第二维反相液相色谱分离;随机选择含较低吸收峰的部分组分经胰蛋白酶水解后进行Nano LC-MS/MS 分析;将串联质谱数据通过MASCOT搜索NCBInr和EST数据库,并对二级质谱获得的蛋白序列进行MS BLAST分析。【结果】经第一维阴离子交换色谱分离,收集得到15个组分,其中第15组分包含小麦叶片丰度最高的蛋白——1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（RuBisCO）;其余14个组分经反相液相色谱分离,共收集1 551个组分,获得1 867个色谱峰;随机对其中6个含较低吸收峰的收集组分酶解和Nano LC-MS/MS 检测,9种蛋白得到鉴定。【结论】结果初步表明,利用2D-LC和Nano LC-MS/MS技术可有效地分离和鉴定小麦叶片蛋白质组,为更深入全面地研究小麦叶片蛋白质组奠定基础。 相似文献
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反相高效液相色谱定量分析多肽中的氨基酸组成 总被引：8，自引：0，他引：8
采用异硫氰酸苯酯柱前衍生、反相高效液相色谱、外标法定量的方法分析多肽中18种氨基酸组成。对常用2种衍生化方法进行比较，结果表明其中一种，衍生步骤简单，但有3种氨基酸不能检出；另一种衍生步骤繁琐，但18种氨基酸都能检出，并且分离效果很好。 相似文献
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本文探索了利用超声波细胞破碎仪提取柑橘果肉中水溶性蛋白质的方法,并对流动相及波长等色谱条件进行优化,建立了反相高效液相色谱分离柑橘果肉水溶性蛋白质的技术。优化后的色谱条件为:流动相A为0.05%三氟乙酸甲醇溶液,B为0.05%三氟乙酸水溶液,A液100%～72%,梯度洗脱45 min,再用A液平衡10min,流速为1.0 mL/min,进样量为20μL,检测波长为270 nm。从7个柑橘品种的果肉中共分离出20个不同的蛋白质峰,图谱中各品种的特有蛋白质反映了不同品种不同表型性状的重要信息。 相似文献
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冷却肉中乳酸含量的反相高效液相色谱分析 总被引：4，自引：0，他引：4
为测定冷却肉中乳酸含量,建立了冷却肉中乳酸提取及反相高效液相色谱的测定方法.冷却猪肉用1 mol·L-1高氯酸水溶液匀浆去除蛋白质及脂肪后,5 000 g离心,并过0.25 μm纤维素膜,然后以高效液相色谱反相柱分离,通过紫外检测器检测.检测结果显示,该测定方法回收率为95.5%～102.3%,相对标准偏差为3.2%～5.7%,日内测定变异系数(CV)为1.09%,日间测定CV为1.28%.该方法应用于冷却猪肉乳酸含量测定获得较好的效果. 相似文献
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利用反相高效液相色谱/二极管阵列检测器/电喷雾质谱联用技术研究类球红细菌红色素,分离鉴定出一种组分,属于类胡萝卜素。采用C30色谱柱,在甲醇-乙腈-MTBE(3 1 1,V/V/V)为流动相,流速为1 mL·min-1,检测波长为475 nm的色谱条件下,类球红细菌红色素中有11个色谱峰在55 min内得到显著分离。借助反相高效液相色谱-电子喷雾离子源质谱联用(RP-HPLC-ESI-MS/MS)法初步确鉴定出这11个色谱峰中一种主要组分,为Philosamiaxanthin,其相对分子质量为566.5。 相似文献
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采用超滤、大孔树脂、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５柱层析、ＤＥＡＥ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ分步抽提和反相高效液相色谱分离,从红参须根中分得３种红参须根多肽（ＲＧＨＰ）,分别是ＲＧＨＰ－ⅡＢ１（４８肽）ＲＧＨＰ－ⅡＢ３（２９肽）,ＲＧＨＰ－ⅡＢ４（３０肽）。 相似文献
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[目的]建立有效的植物内源激素提取方法,并探讨利用反相高效液相色谱法同时测定骆驼刺根状茎分株处3种植物内源激素的色谱分析条件。[方法]采用反相高效液相色谱法,对骆驼刺分株处根状茎中植物内源激素赤霉素(GA3)、玉米素(ZR)和生长素吲哚-3-乙酸(IAA)进行了分离和含量测定。[结果]GA3、ZR和IAA的平均回收率为98.3%,90.3%和101.3%,说明该方法符合定量分析要求,且误差小。分离骆驼刺根状茎植物内源激素的高效液相色谱条件为:以流动相甲醇:0.75%乙酸为45∶55、流速0.7 ml/min、检测波长254 nm和柱温为25℃。[结论]该研究初步建立了分离骆驼刺根状茎植物内源激素的高效液相色谱条件。 相似文献