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1.
将PRRSV Hn-1/06株阳性血清（中和效价为1∶2）做2～8倍倍比稀释后,分别与等体积含100TCID50/100μL的PRRSV Hn-1/06株病毒液混合,制备感染性免疫复合物。取纯化的猪IgG和兔抗猪IgG制备非感染性免疫复合物。用鼠抗FcγRⅡB阳性血清封闭猪肺泡巨噬细胞（PAM细胞）表面的FcγRⅡB,然后分别将感染性免疫复合物和非感染性免疫复合物与PRRSV的混合物感染封闭后的PAM细胞,培养48h后收获样品,采用荧光定量RT-PCR检测收获样品中PRRSV的含量。结果表明,选择性封闭PAM细胞的FcγRⅡB能增强PRRSV的抗体依赖性增强作用。 相似文献
2.
为了研究蓝耳病不同毒株疫苗在ADE效应下的表现,将疫苗血清复合物(用105.0TCID50的HP-PRRSV田间分离株ZJ-2014,与不同弱毒疫苗CH-1R、R98、TJM-F92的免疫血清在不同的稀释梯度下混合作用24 h,获得血清复合物)接种于PAM细胞,进行蓝耳病病毒增殖试验,检测病毒RNA拷贝数。以兔抗猪FcγRIIb血清进行封闭构建对照组,而后接种PAM细胞。通过比较封闭前后PRRS病毒增殖数量的差异,确定不同疫苗血清兔抗猪FcγRIIb多抗对ADE的阻断作用。试验结果表明:TJM-F92株疫苗的血清抗原复合物对ADE效应的阻断效果最为明显,提示在未来蓝耳病疫苗研制及临床应用中,TJMF92株可以成为优选毒株。 相似文献
3.
对在生物反应器中用微载体连续灌注培养Marc-145细胞生产猪繁殖与呼吸综合征病毒的制备技术进行了研究.在14 L体积的生物反应器中,加入含10 g/L微载体的细胞培养基DMEM,接种Marc-145细胞至细胞浓度为1×105/mL,培养4d后细胞可生长至5～7×106/mL,然后以感染复数(MOI)为0.01接种PRRSV PC株病毒,接毒后36 h开始收获,连续收获3d左右,收获的病毒滴度范围在106.0～ 1073TCID50/mL之间,将收获的病毒液加入适量的保护剂,经冷冻干燥制备成疫苗,无菌、支原体等项目的检验均合格,3批疫苗的免疫保护率均为5/5.实验表明,用生物反应器微载体灌注培养Marc-145细胞制备PRRS疫苗工艺可行. 相似文献
4.
本试验通过研究免疫复合物影响猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在巨噬细胞内增殖的因素,来进一步探讨免疫复合物经FcγR介导的PRRSV感染机制.本研究将含200 TCID50 PRRSV病毒液与等体积的终浓度为1.30 mg· mL-1的猪IgG-兔抗猪IgG复合物分别先后和同时接种于PAM细胞,分别于12、24、36、48 h收集细胞液,同时设PRRSV感染对照组、免疫复合物对照组和健康细胞对照组,利用建立的相对荧光定量PCR和绝对荧光定量PCR方法分别检测巨噬细胞中IFN-α、IL-10和TNF-α的mRNA转录水平及PRRSV的RNA水平,并进行定量分析,同时采用ELISA方法检测健康细胞中IFN-α的蛋白水平.结果显示,在感染后12～36 h期间,免疫复合物能够抑制PRRSV诱导的IFN-α的mRNA水平,TNF-α mRNA水平在感染后12 h被促进,而在24～36 h期间被抑制.在感染后48 h,免疫复合物能促进IFN-α和TNF-α的mRNA水平,而在12～48 h期间均能抑制IL-10的mRNA水平,此外,免疫复合物在感染12、24和36 h时间段内均能明显促进病毒的增殖,但在48 h后不显著.健康细胞中IFN-α的蛋白水平在培养12～48 h之内呈“降-升-降”的趋势.结果表明,IFN-α蛋白的表达与其mRNA的转录不同步.在PRRSV感染初期,免疫复合物能抑制PRRSV诱导的抗病毒因子的mRNA水平,病毒的复制被促进,而在感染后期,抗病毒因子达到一定的浓度后发挥抗病毒作用,在一定程度上抑制病毒的复制.而TNF-α的转录规律不明显,表明免疫复合物可能同时与激活型和抑制型FcγR结合来共同调节PRRSV诱导的细胞因子的转录. 相似文献
5.
《中国兽医学报》2015,(7):1112-1118
采用新的试验方法制备出纯度较高的抗猪Sn的鼠纯化IgG,并证实此种抗体可以阻碍PRRSV感染PAM,为研究猪Sn各结构域的作用提供参考,为进一步研究PRRSV侵入宿主的作用机制奠定基础。本试验分8个片段克隆猪Sn胞外区功能结构域(第2~17结构域),并分别构建重组表达质粒,转化到BL21进行诱导表达。通过优化蛋白表达条件,制备其重组蛋白,将8种重组蛋白混匀后制成混合抗原(SnE)免疫小鼠以制备其多克隆抗体血清,用间接ELISA的方法检测高免血清的效价,分离并收集血清。采用硫酸铵盐析与DE-52离子交换层析相结合的方法提取并纯化血清,得到纯度较高的鼠抗猪SnE抗体。无菌灌冲猪肺脏收集原代PAM至24孔培养板中,培养6h后,用抗Sn150(第1结构域)、SnE和Sn150+SnE等抗原的鼠纯化IgG以及鼠阴性IgG和PBS分别处理PAM,1h后用200CID50PRRSV感染PAM,分别在感染24、48h后用已建立的PRRSV实时荧光定量PCR方法检测感染细胞的病毒拷贝数。结果显示,PRRSV感染24h和48h时后,鼠抗猪Sn150抗体组的PRRSV mRNA拷贝数与阴性IgG组相比较均差异较小(P0.05);而鼠抗猪SnE抗体和Sn150+SnE混合抗体组的PRRSV mRNA拷贝数均显著低于对应的阴性IgG组,且鼠抗猪SnE抗体组24h和48h时PRRSV mRNA拷贝数分别是阴性IgG组的0.75倍(P0.001)和0.74倍(P0.001),Sn150+SnE混合抗体组24h和48h时的PRRSV mRNA拷贝数分别是阴性IgG的0.83倍(P0.01)和0.76倍(P0.001)。结果表明,鼠抗猪SnE抗体和Sn150+SnE混合抗体封闭后PRRSV感染PAM的能力降低,且效果显著,提示PRRSV的吸附和内吞作用可能与pSn整个胞外区都有密切的关系。 相似文献
6.
采用转瓶生产技术，在MARC-145细胞中增殖PRRSV克隆20株，经过条件的优化选择，得到TCID50≥10^-7.55／mL的高滴度PRRSV溶液，为生产疫苗打下基础；所生产的PRRSV弱毒活疫苗对猪安全无致病性，能刺激猪产生特异性抗体应答，接种后第14天可检测出特异性中和抗体。疫苗内的PRRSV滴度在冻干前后变化不大，冻干疫苗在4～8℃保存有效期为6个月，-20℃保存有效期达18个月，表明生产的PRRSV弱毒活疫苗对猪安全且能刺激猪产生体液免疫应答，可用于PRRS的预防接种。 相似文献
7.
将猪细小病毒(PPV)接种于F81和PK15细胞,研究不同的培养基、pH值、血清含量、细胞密度对病毒在细胞里增殖的影响,细胞毒液冻融3次后测半数组织细胞感染量(TCID50)。试验结果表明,接毒24 h后F81和PK15细胞都有病变产生,在细胞病变达到75%以上时收获细胞毒液,发现PPV在F81细胞和PK15细胞中均能增殖且病毒滴度比较高。测得F81细胞接种PPV最高滴度为108.71TCID50/mL;PK15细胞接种PPV最高滴度为108.73TCID50/mL。 相似文献
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将35头40日龄猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪圆环病毒(Porcine circovirus type 2,PCV2)抗原及抗体均为阴性的健康仔猪,随机分成7组,每组5头,命名为XJ1~XJ7组。XJ1~XJ6组分别免疫PRRSV基因工程双标记疫苗rHN4-△25+NP49株,接种剂量分别为102TCID50/头、103TCID50/头、104TCID50/头、105TCID50/头、106TCID50/头和107TCID50/头,XJ7组为对照组,按1mL/头剂量接种DMEM。各试验组在免疫后28 d,用3×104.0TCID50/头剂量感染HP-PRRSV HuN4第5代强毒,疫苗免疫和攻毒后观察和检测各组试验猪的免疫效果。结果表明:攻毒前XJ2-XJ6组PRRSV ELISA抗体在免疫后14 d全部转为阳性,XJ1组在免疫后21 d转为阳性,但维持在较低水平;XJ2-XJ6组针对标记基因NP49的特异性抗体在免疫后28 d转阳性。攻毒后对照组全部发病,且死亡2头,XJ1有4头发病,XJ2-XJ6组无发病和死亡,本研究结果表明PRRSV基因工程双标记疫苗rHN4-△25+NP49株对仔猪提供免疫保护的最小免疫剂量为103TCID50/头。 相似文献
9.
为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)活疫苗(HuN4-F112株)诱导的特异性IFN-γ+T细胞反应与其保护作用的相关性,本研究将25头45日龄PRRSV阴性健康仔猪随机均分为5组,第1～3组分别于0 d、7 d、14 d免疫HuN4-F112疫苗(1头份/头,106.0TCID50),第4组为攻毒对照组,第1～4组于21 d用PRRSV强毒株HuN4-F5攻毒(3 mL/头,104.0TCID50),第5组为空白对照组。疫苗免疫后1周～2周产生部分保护,3周产生完全保护,第1～4组保护率分别为5/5、2/5、2/5和0/5。中和抗体检测显示免疫组免疫后7 d和14 d所有猪只均未检测到中和抗体,免疫后第21 d第1组4头猪检测到低效价(≤1∶8)的中和抗体。疫苗免疫后血清中IFN-γ含量略有升高,但变化不大,整体都处于较低的水平。采用酶联免疫斑点技术(ELISpot)检测PRRSV特异性IFN-γ+T细胞反应。免疫组免疫后7 d、14 d、21 d百万外周血单个核细胞中IFN-γ+T细胞频数分别为0±0、0±2、5±8,组间和组内统计分析显示差异不显著。结果表明在HuN4-F112株疫苗早期保护中,IFN-γ参与的特异性细胞免疫反应较弱,在早期免疫阶段难以发挥主要作用。本研究为了解PRRSV疫苗免疫保护机制提供参考,同时,也提示需要采用更多的指标和方法来评价该疫苗诱导的免疫反应。 相似文献
10.
《中国兽医学报》2020,(6)
为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5和M蛋白滴鼻免疫小鼠后产生的特异性抗体的中和活性,研究以原核表达的重组蛋白GP5和M为抗原分别与霍乱毒素B亚基(CTB)佐剂按10∶1的比例混合制备成CTB黏膜佐剂疫苗,滴鼻免疫小鼠,于首次免疫后0,7,14,21,28,35,42 d收集唾液和血清样品,利用间接ELISA方法分别检测免疫小鼠唾液中特异性抗体IgA,结果均于28 d时S/N值达到最高,ELISA效价均为1∶2;血清中特异性抗体IgG分别于21,28 d时S/N值达到最高,ELISA效价均为1∶800。通过本实验室建立的基于PAM细胞中和试验方法分别检测唾液中特异性抗体IgA和血清中特异性抗体IgG中和滴度均1∶2,结果表明PRRSV GP5和M蛋白滴鼻免疫小鼠后产生的特异性抗体未达到免疫保护作用的中和抗体水平。 相似文献
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国内生态恢复研究进展 总被引：10，自引：1，他引：9
本文介绍了生态恢复的研究进展,从生态恢复的定义、退化生态系统的指标等方面进行阐述,重点对国内在恢复生态学方面的进展做了介绍。对当前的人工草地、草地农业的研究情况做了一些概述。 相似文献
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Gesek M Szarek J Babińska I Wojtacka J Sobczak-Filipiak M Felsmann MZ 《Polish journal of veterinary sciences》2008,11(2):193-197
This paper presents the main trends in the activity of European veterinary pathologists in the context of their oral presentations (plenary lectures and short presentations) and posters provided during annual meetings of the European Society of Veterinary Pathology (ESVP), in the decade 1997-2006. It was found that the issue that was most often brought up in the meetings was organ pathology (566 presentations). Infectious and parasitical diseases were only slightly less frequent (548 presentations). Oncology was another common issue (404 presentations). During this decade, 52 plenary lectures were presented, 765 oral presentations and 1 072 posters. Altogether, 1 889 presentations were made, which is between 127 and 238 per year. Research by Polish scientists accounted for 3.16% of all presentations. Additionally, the subject matter discussed at the annual meetings is analysed, and the trends in the development of veterinary diagnostic pathology and broad pathology education are indicated. It is shown that veterinary pathology enhances knowledge in the field of veterinary medicine by fulfilling a cognitive and diagnostic role. 相似文献
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Evidence for the non-involvement of the uterus in the lifespan of the corpus luteum in the cyclic dog 总被引：1，自引：0，他引：1
Progesterone levels in peripheral blood of dogs were analysed during the cycle in which hysterectomy (n = 5) or sham surgery (n = 3) was performed as well as during the cycle of dogs (n = 5) hysterectomized at least one year prior to this study; the data were compared with the findings in control dogs (n = 3). The averages of the duration of the luteal period observed in the three experimental groups were not significantly different from those of control dogs. Immediately after surgery, the progesterone level decreased from 25 to 50% of the presurgical level, but returned to presurgical level in about four days. Prolactin levels were elevated for about 30 h after surgery. Nevertheless, the averages of the mean prolactin levels for each animal during the luteal period of the experimental groups were not significantly different from those of control dogs. It is concluded that in the dog, the uterus is not involved in the lifespan of the cyclic corpus luteum. 相似文献
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P H Kass D R Strombeck T B Farver A A Ardans 《American journal of veterinary research》1985,46(11):2336-2339
To find possible associations between antinuclear antibody (ANA) pattern, ANA titer, and certain clinical changes and clinical laboratory test results in dogs, the veterinary medical records of 111 ANA-positive and 126 ANA-negative dogs were examined. Variables could not be found that had significant associations with ANA pattern (unlike the results in persons), because of the predominance of 2 patterns. A log-linear model for ANA titer adequately fit the observed frequency and included 2-way interactions between titer and polyarthritis, titer and hematologic disorders, and polyarthritis and lymphadenopathy. 相似文献
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In a 4-year period nine dogs have been met in which there was incomplete growth of the radius. The condition was unilateral in eight dogs and bilateral in one. Two were littermates. The defect is due to premature cessation of growth of the distal growth plate of the radius but the cause of this is not precisely known. It is recognized by characteristic radiographic changes in radius length, elbow joint space and premature closure of the distal growth plate of the radius. A method of surgical treatment has been devised and has proved beneficial in five dogs. Zusammenfassung. In einer Vierjahresperiode wurden neun Hunde beobachtet, bei denen ein unvollständiges Wachstum des Radius vorlag. Bei acht Hunden war der Zustand nur auf einer Seite zu finden, bei einem Hund auf beiden Seiten. Zwei der Hunde gehörten zum gleichen Wurf. Der Mangel ist auf verfrühte Wachstumseinstellung der distalen Wachstumsplatte des Radius zurückzuführen, jedoch ist die Ursache davon nicht genau bekannt. Er wird an charakteristischen radiographischen Veränderungen der Radiuslänge, des Ellbogengelenkzwischenraums und vorzeitigem Abschluss der distalen Wachstumsplatte des Radius erkannt. Es wurde eine chirurgische Behandlungsmethode entwickelt, die sich bei fünf Hunden als nutzlich erwies. Résumé. Au cows d'une période de 4 ans on a observé 9 cas de croissance incomplète du radius chez des chiens; l'anomalie était unilatérale dans 8 cas et bilatérale dans un cas; deux chiens appartenaient à la même portée. L'anomalie est due à l'arrêt prématuré de croissance de la plaque de croissance distale du radius, mais la cause n'en est pas encore connue d'une manière précise. Le diagnostic se fait par les signes radiologiques caractéristiques, modifications de la longueur du radius, de l'articulation du coude et soudure prématurée de la plaque de croissance du radius. On a élaboré une méthode de traitement chirurgical, qui s'est montrée favorable chez 5 chiens. 相似文献
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