猪圆环病毒2型SD/2008株的分离鉴定及培养特性     

刘祥义  王秀平  陈春花  宋勤叶  焦建达  冯秀  蒋丽釵  王昆 《中国兽医学报》2010,30(7)

应用PK15细胞从山东省某猪场分离到1株病毒,通过免疫过氧化物酶单层试验和全基因组序列分析,证明该分离株为猪圆环病毒2型(PCV-2,命名为SD/2008株),基因组全长1767bp,为PCV-2b基因型;感染PK15细胞后96h病毒含量最高,培养液含病毒基因组1.72×108copies/μL,连续培养120h不出现细胞病变;连传5代,病毒滴度稳定,维持在106TCID50/0.1mL左右;传代PK15细胞时同步接种病毒后18h,用300mmol/L的D-氨基葡萄糖处理细胞,病毒滴度可以提高5.62倍。  相似文献   

猪细小病毒在PK15细胞中增殖规律的研究   总被引：4，自引：1，他引：3  

倪娇  赵建增 《中国兽药杂志》2009,43(1):21-24

猪细小病毒毒株在不同细胞系上的生长情况不尽相同,如不能掌握其规律,将难以生产出优质的疫苗。对PPV（长春株）在PK15和ST细胞上生长情况进行了研究,在PK15细胞系中重点比较了不同的病毒接种方法、病毒接种量和病毒收获时间等因素对病毒产量的影响。研究结果显示：本毒株在PK15和ST两种细胞系上的病变特征不同,但生长规模相似。在PK15细胞上按2％接种量、分步接种、80h时收获病毒,最终得到的病毒滴度（TCID50）最高。提示这是一种比较好的生产方案。然而,进一步的大规模培养试验是有必要的。  相似文献   

猪细小病毒CG-05株在ST细胞上的增殖规律研究     

唐满华 《中国兽药杂志》2013,47(1):14-16

通过将猪细小病毒CG-05株同步接种于ST细胞,测定不同时间收获的病毒液的TCID50和HA,研究了CG-05株病毒在ST细胞上的增殖规律。病毒接种后镜检观察接毒细胞,在接种病毒后24 h,即可在细胞较少的区域看到非常轻微的病变。测定病毒TCID50,检测到接毒后培养17h病毒已经明显增殖;当培养到40h左右,其TCID50即接近高峰,达到10-7.2/0.1mL以上,并进入平台期;继续培养,TCID50最高可达到10-8.5/0.1mL,且直到122 h也不见明显降低。病毒HA价也出现同样的平台期,但比TCID50的平台期出现得晚,到50 h才进入平台期。结果表明,用ST细胞培养CG-05株病毒,接种病毒培养56～96 h后,如病变达到80%以上,且细胞脱落已形成20%以上空斑,此时收获病毒可获得高效价的病毒液。该研究可为制备高效价的PPV病毒抗原提供数据资料。  相似文献   

PPV培养细胞的选择及在ST细胞中的增值规律     

唐满华  陈瑞爱  何玲  李春红  梁桂益  廖翠银  陈振波  同戈 《中国动物保健》2013,(11):19-23

猪细小病毒毒株在不同细胞系上的生长情况不尽相同,如不能掌握其规律,将难以生产出优质的疫苗.本研究对PPV（M2株）在PK15和ST细胞上生长情况进行了研究,得出ST细胞更适合其生长。之后将PPVM2毒株同步接种于ST细胞,用测定HA和TCID50的方法研究了其在ST细胞上增殖的基本规律。病毒在接种后24h可在细胞较稀的区域看到非常轻微的病变,病毒TCID50测定结果也表明,接毒后17h,病毒已经明显增殖。当病毒培养到约40h,其TCID50即接近高峰,并进入平台期,病毒的TCID50已达到10^7.5／0．hmL以上。继续培养,最高可达到10^8.5／0．1mL以上,且直到122h,也不见明显降低。病毒培养40-122h,不管是用Gibco血清还是用Hyclone血清培养病毒,其差异都非常小,变异系数都在5％以内。病毒HA价也出现同样的平台期,但HA价的平台期出现比TCID50的平台期出现更晚。  相似文献   

犬瘟热病毒在不同组织细胞上增殖特性的研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

魏凤  管宇  王金良  祖立闯  沈志强 《动物医学进展》2010,31(2):83-86

将犬瘟热病毒(CDV)分别接种于长满单层的鸡胚成纤维细胞(CEF)、非洲绿猴肾细胞系(Ve-ro)、犬肾细胞系(MDCK),观察其病变时间、病变特征,并对其进行RT-PCR鉴定和TCID50测定。结果表明,CDV在这3种细胞上均能增殖,并产生明显的细胞病变(CPE),但在Vero细胞上产生病变的时间短,病变明显,且TCID50最高;RT-PCR检测CDV在不同细胞上的病毒培养液,均能扩增出337bp的片段;CDV在Vero细胞上的增殖滴度明显高于在CEF、MDCK细胞上的增殖滴度。表明本试验所选用的3种细胞中,Vero细胞最适宜培养CDV,所获得的CDV的毒价最高,病变最明显。  相似文献   

猪2型圆环病毒Cap蛋白在伪狂犬病病毒中的表达     

宋云峰  肖少波  曹胜波  张松林  陈焕春  金梅林 《中国兽医学报》2007,27(2):155-158

用EcoR Ⅰ酶切伪狂犬病病毒疫苗株Tk-/gE-/LacZ 基因组,与含有猪2型圆环病毒(PCV2)ORF2基因的重组转移载体pIEORF2共转染IBRS-2细胞.收集病变细胞,经空斑纯化和PCR鉴定,获得了新的重组病毒Tk-/gE-/ORF2 .用Southern blot杂交证明该重组病毒构建正确,用间接免疫荧光法和Western blot证日月该重组病毒可表达PCV2的主要免疫原性蛋白Cap蛋白.重组病毒在IBRS-2细胞上连续传15代后,遗传稳定.该重组病毒在IBRS-2细胞上增殖滴度为10-7.1 TCID50/0.1mL,在鸡胚成纤维细胞上增殖滴度为10-4.8 TCID50/0.1mL,在Marc-145细胞上增殖滴度为10-6.8 TCID50/0.1mL.  相似文献   

PK-15细胞微载体悬浮培养及PCV2增殖工艺研究     

《中国兽医杂志》2019,(4)

研究表明,PCV2仅在PK15等少数哺乳动物细胞上增殖,但由于PCV2毒力弱,且不产生细胞病变,获得高滴度病毒难度较大~([1])。因此,PCV2的培养滴度高低已成为制约现有疫苗质量的关键瓶颈之一。为建立在生物反应器内微载体逐级放大培养PK-15细胞和增殖PCV2技术,本研究以德国Sartorius14 L生物反应器微载体悬浮培养PK-15细胞,对PK-15细胞初始接种密度、搅拌转速、微载体浓度、PCV2接毒时间、接毒剂量、收毒时间等工艺参数进行了摸索和优化~([2-3])。结果表明:3 g/L的微载体和60 r/min的搅拌转速下,采用0.5×10~6cells/mL的初始接种密度操作工艺可获得最佳PK-15细胞生长效能。细胞生长后6 h接毒,采用感染复数(MOI)为0.5的接毒比例,细胞接毒后在微载体上生长96 h可获得最高的PCV2增殖滴度10~(8.5)TCID_(50)/mL,利用该工艺,经过消化转移将PK-15细胞从14 L反应器放大至42 L反应器,微载体上细胞贴附均匀、生长旺盛,42 L反应器中培养72 h细胞密度可达39.0×10~5 cells/mL,病毒滴度10~(8.3)TCID_(50)/mL,应用生物反应器培养PCV2滴度较常规转瓶培养工艺提高了近10倍。进一步表明PCV2悬浮培养放大与接毒工艺稳定,为下一步实现工业级规模化生产奠定基础。  相似文献   

表达猪细小病毒VP2蛋白的猪伪狂犬病病毒rPRV-VP2株的生物学特性     

《中国兽医学报》2017,(1):11-17

探索重组PPV VP2基因的猪伪狂犬病病毒rPRV-VP2株作为弱毒疫苗候选株的潜在价值,对其在多种细胞上的增殖特性、病毒滴度、最适培养细胞中的遗传稳定性、一步生长曲线、转录和翻译水平等生物学特性进行研究,并初步探索对小鼠安全性。结果显示:重组病毒rPRV-VP2株在VERO、ST、PK-15和IPEC细胞上的TCID50分别为104.375/0.1mL、106.5/0.1mL、103.75/0.1mL、105.625/0.1mL。重组毒与亲本毒PRV HB-98株在ST细胞中的毒力(106.125 TCID50/0.1mL)和细胞病变相当,重组病毒保持了PRV病毒的通性。连续传毒20代后的绿色荧光观察、RTPCR、Western blot试验结果均表明重组病毒中的VP2基因得到了有效表达,且遗传稳定性良好。安全性试验结果显示:重组毒对小鼠安全。本试验为后期对PPV VP2基因重组猪伪狂犬病毒rPRV-VP2株的开发利用奠定了基础。  相似文献   

不同接毒方法对猪圆环病毒2型增殖的影响     

陈玉文 《福建畜牧兽医》2017,39(4)

本试验对比了不同的接毒方法,观察猪圆环病毒2型的繁殖情况.试验分为同步接毒(A组、B组)和异步接毒(C组、D组):同步接毒A组为在消化分装好的细胞悬液中同步接入5%(V/V)的PCV2种毒,B组为在消化分装好的细胞悬液中同步接入3%(V/V)的PCV2种毒,24 h后再接种2%种毒;异步接毒C组为在生长良好、 培养24 h的单层细胞中接种5%(V/V)的PCV2种毒,D组为在生长良好、培养48 h的PK15单层细胞中接种5%(V/V)的PCV2种毒.四组均在接种后培养72 h收获,进行病毒含量检测.试验结果显示:A组的病毒含量为107.0~7.25TCID50/mL,B组病毒含量为106.75~7.0TCID50/mL,C组的病毒含量为106.4~6.5TCID50/mL,D组的病毒含量为106.25~6.5TCID50/mL.试验结果表明,采用同步接毒法的病毒含量明显高于异步接毒法,在细胞悬液中同步一次性接入5%种毒,病毒的增殖量最高.  相似文献   

猪圆环病毒2型高敏感性细胞的克隆     

彭伍平 《中国兽药杂志》2010,44(4):37-39

利用有限稀释法从现有PK15细胞系中克隆出一株对猪圆环病毒2型具有高敏感性的细胞克隆株PKK,初步研究了该克隆株对猪圆环病毒2型增殖的特性及稳定性。间接免疫荧光实验结果表明将该克隆株连续传代50代后对猪圆环病毒2型感染性不变,病毒滴度最高可达10^7.0TCID50/mL.这一研究结果将有利于进一步研究猪圆环病毒2型体外复制、体外诊断及开发高效价的PCV2全病毒灭活疫苗。  相似文献   

猪圆环病毒2型PK15细胞系高敏感性细胞的克隆     

彭伍平  王延辉  胡东波  张方彪  姚亚丽  习向锋  陶家权  乔荣岑  孙进忠 《中国兽药杂志》2010,44(4)

利用有限稀释法从现有PK15细胞系中克隆出一株对猪圆环病毒2型具有高敏感性的细胞克隆株PKK,初步研究了该克隆株对猪圆环病毒2型增殖的特性及稳定性。间接免疫荧光实验结果表明将该克隆株连续传代50代后对猪圆环病毒2型感染性不变,病毒滴度最高可达107.0TCID50/mL。这一研究结果将有利于进一步研究猪圆环病毒2型体外复制、体外诊断及开发高效价的PCV2全病毒灭活疫苗。  相似文献   

PRRSV NVDC-JXA1株在Marc-145细胞上增殖条件的优化   总被引：1，自引：0，他引：1  

朱文革  贺云霞  周振成  邵庆红  龚玉梅  张培君 《动物医学进展》2010,31(6):66-69

为了在Marc-145细胞上获得更高滴度的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NVDC-JXA1株,优化了细胞培养条件、病毒接种剂量、病毒吸附时间、收毒时间和病毒冻融次数等条件。结果表明Marc-145细胞在MEM培养基、新生牛血清含量80 mL/L,细胞接种密度150 000个/mL,pH7.0条件下生长状态最好;PRRSV NVDC-JXA1株的最佳接种剂量为400 TCID50/mL,病毒吸附时间为30 min,收毒时间为接种后72 h,在-20℃冻融3次,PRRSV NVDC-JXA1株增殖效果最好。该结果为NVDC-JXA1株PRRSV疫苗的生产提供了依据。  相似文献   

细胞密度对猪圆环病毒增殖与检测准确度的影响     

《中国动物保健》2016,(6)

为了提高猪圆环病毒毒液生产批次间滴度的稳定性,提高培养毒液病毒滴度检验和成品疫苗效力检验的准确度,本实验对PK15细胞接种密度进行了研究。结果显示:病毒培养阶段,细胞最佳接种密度为2~2.5×10~5/m L,毒液滴度和疫苗效力检验时,最佳细胞接种密度为1.5~2×10~5/m L。  相似文献   

杨凌某羊场羊口疮病毒的分离鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

张瑜  高晶晖  张立强  高洋  贾云晓  陈德坤 《动物医学进展》2015,(1):61-65

为获得杨凌地区羊口疮病毒野毒株,在某羊场采集具有典型羊口疮症状的病羊口唇部结痂并研磨,无菌过滤后取500μL接种于犊牛睾丸原代细胞。盲传4代,测定细胞病变的第5代病毒的滴度,用羊口疮病毒B2L和F1L基因的特异性引物进行PCR检测。结果显示,第5代病毒能够致犊牛睾丸原代细胞出现细胞病变(CPE),病毒滴度为107.66 TCID50/mL;扩增出了羊口疮病毒B2L和F1L基因的片段,其大小分别为540bp和437bp,与用于设计引物的参考毒株序列的相似度分别为96.57%和96.43%,可确定为羊口疮病毒的相应基因片段,获得了羊口疮病毒分离株。  相似文献   

猪血凝性脑脊髓炎病毒在PK-15细胞中的增殖特性     

潘伟  宋晗星  赵传博  丁宁  陆慧君  贺文琦  高丰 《兽医大学学报》2012,(9):1409-1412

利用光学显微镜观察、间接免疫荧光（IFA）、Real-time PCR和病毒感染滴度（TCID50）等测定方法,分别从病毒抗原分布、病毒基因组复制水平以及病毒感染滴度变化等方面对猪血凝性脑脊髓炎病毒（HEV-67N）在猪肾上皮传代细胞系（PK-15细胞）上的增殖特性进行了研究。使用HEV-67N株感染24孔细胞培养板内的PK-15细胞,接种剂量为400个TCID50（104.37）/孔,间接免疫荧光检测结果显示,在感染后8h即可检测到被荧光抗体标记的感染细胞,且随着感染时间的延长,出现荧光的细胞数量逐渐增多,至感染后32h,几乎所有的细胞均出现有荧光。Real-time PCR检测结果显示,病毒基因组RNA的复制在感染后32～48h呈快速上升趋势,其基因组拷贝数在感染后48h达到最高值,之后增殖速度减慢,至感染后56h细胞出现CPE。TCID50的测定结果显示,HEV感染滴度的变化趋势与基因组RNA含量的变化相一致,在感染后32～48h增殖速度最快,之后逐渐减缓,至72h病毒感染滴度达到最高。  相似文献   

犬瘟热病毒在MA-104、Marc-145、Vero3种细胞内增殖效果的比较     

王朝蕾  崔卓宇  吕永钢  胡江锋  焦铁军  樊军喜  王根红  崔瑞宁 《畜牧与饲料科学》2012,33(10):7-8

试验比较了MA-104、Marc-145、Vero 3种猴肾细胞增殖犬瘟热病毒的敏感性,按常规方法将犬瘟热病毒(CDV-XN112株)分别接种于MA-104、Marc-145、Vero 3种细胞,通过观察细胞病变,确定收毒时间,比较病毒滴度。结果表明,犬瘟热病毒可在MA-104、Marc-145、Vero 3种细胞内增殖,并出现典型细胞病变,效价均达到104.5TCID50/0.1mL以上,而Vero细胞增殖犬瘟热病毒更为经济高效,是增殖该病毒的理想细胞。  相似文献   

伪狂犬病病毒Ra株对不同细胞增殖特性及致病性研究     

余文兰  张晓战  黄红亮  刘碧涛  任常宝  唐兆新 《中国畜牧兽医》2013,40(11):164-168

本研究以伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)Ra株体外感染不同的细胞系为模型,研究PRV Ra株最适细胞系。试验采用ST细胞、PK-15细胞、Vero细胞、F81细胞、DF1细胞、MDCK细胞和CEF细胞7种细胞作为该毒株的接种对象,观察毒株在这几种细胞上病变特点、细胞病变时间及病毒增殖规律等并进行比较。观察结果发现,受试的各种细胞在PRV感染期间均能表现明显的细胞病变,但不同细胞在病变时间上存在较大差异,其中PK-15和ST细胞在感染后24 h内出现明显细胞病变,时间最早。TCID₅₀测定病毒增殖力结果表明,ST细胞在病毒增殖传代中毒力保持最好,与原毒株毒力相当,为10^6.9 TCID₅₀/0.1 mL。本试验结果表明,ST细胞是较适合于PRV Ra株体外研究的细胞系。  相似文献   

一株MDBK细胞的低血清悬浮驯化研究     

王磊  杨承槐  刘莹 《中国兽药杂志》2021,55(4):60-65

研究选取一株背景清晰、纯净的MDBK贴壁细胞,通过直接驯化和逐级降低血清相结合的办法,获得了一株可以在低血清培养基中全悬浮培养的MDBK细胞。该细胞在含0.5%胎牛血清的培养基中悬浮培养48 h后的细胞密度稳定在5.0×10⁶/mL以上,培养72 h后细胞密度最高可达1.16×10⁷/mL,且细胞形态良好,活力在93%以上,具有良好的传代稳定性。应用筛选获得的悬浮培养MDBK细胞株分别接种伪狂犬病毒和传染性牛鼻气管炎病毒后,检测病毒敏感性。细胞在24 h均发生了皱缩,72 h大部分死亡。悬浮培养的MDBK细胞对传染性牛鼻气管炎病毒的滴度在24 h达到最大值107.6TCID50/mL,对伪狂犬病毒的滴度在48 h达到最大值107.6 TCID50/mL,说明虽然细胞的培养方式发生了改变,但并没有影响上述两种病毒在该细胞上的增殖特性。对MDBK细胞的全悬浮驯化研究可为相关病毒类疫苗规模化生产及工艺的升级改进提供细胞学基础资料。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(CH-1R株)工厂化生产培养条件的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

赖志  黄锡琴  龚建培  钮雪根  高俊锋  杨汉春 《中国预防兽医学报》2010,32(8)

为提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)活疫苗CH-1R株的产量和疫苗的质量,本实验探索了PRRSV活疫苗CH-1R株在MARC-145细胞中大规模生产培养的最佳条件。将CH-1R株分别在3L和10L转瓶培养的MARC-145细胞中进行增殖试验,分析CH-1R株在不同接种病毒量和不同接种病毒时间的TCID50变化规律。结果表明,在3L和10L转瓶中,病毒的TCID50最高可达到107.0TCID50/mL以上。CH-1R株通过转瓶在MARC-145细胞中大规模增殖,为PRRSVCH-1R株的工厂化生产奠定了基础。  相似文献   

猪伪狂犬病病毒在不同细胞上的增殖研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

李小静  唐满华 《吉林畜牧兽医》2015,36(6)

为摸索最适合猪伪狂犬病病毒增殖的传代细胞,分别将猪伪狂犬病病毒按同一接种剂量接种PK-15、ST、Vero、CEF细胞,接毒后定时观察细胞病变情况,并进行TCID50测定,选择一种最合适的传代细胞用于猪伪狂犬病病毒的增殖。  相似文献