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1.
为比较猪卵母细胞在GV期与MⅡ期的冷冻保存效果,试验在这两个成熟阶段对其进行玻璃化冷冻,GV期卵母细胞解冻后培养至成熟,MⅡ期卵母细胞解冻后恢复2 h,然后采用免疫荧光标记、Western blotting和链霉蛋白酶溶解方法分别检测它们的皮质颗粒分布、CD9蛋白表达水平和透明带消化时间上的差异。结果表明,GV期卵母细胞在解冻后2 h的存活率显著低于MⅡ期卵母细胞（P<0.05）,但极体排出率与对照卵母细胞无明显差异（P>0.05）;在冷冻MⅡ期卵母细胞中,皮质颗粒的皮质区分布比例和CD9的蛋白表达水平显著下降（P<0.05）,但冷冻GV期卵母细胞经体外成熟后则无明显变化（P>0.05）;冷冻GV期与MⅡ期卵母细胞均不会影响透明带的消化时间（P>0.05）。由此可见,猪卵母细胞在GV期的冷冻存活率虽然较MⅡ期低,但其体外成熟后极体排出率、皮质颗粒分布和CD9蛋白表达水平均未受到冷冻的影响。 相似文献
2.
试验以屠宰场云岭黑山羊卵巢卵母细胞为材料,研究其玻璃化冷冻的效果。试验中选用20% EG+20% DMSO为冷冻液、冷冻环为载体,以20 s、40 s玻璃化时间冷冻GV和MⅡ期的卵母细胞。结果表明,GV期卵母细胞的形态正常率、成熟率和卵裂率都很低,且解冻成熟培养后冷冻组的成熟率和卵裂率极显著低于对照组(P<0.01)。而MⅡ期卵母细胞冷冻效果较好,毒性试验组和冷冻组形态正常率分别为91.1%和83.3%,明显高于GV期;孤雌激活后毒性组卵裂率与对照组无显著性差异(P>0.05),冷冻组的卵裂率显著低于对照组(P<0.05)。用20 s、40 s玻璃化时间冷冻的卵母细胞解冻后GV和MⅡ期各组均无显著差异。根据试验结果得出在冷冻保存中最好冷冻MⅡ期的卵母细胞,以便提高后期的卵裂率和囊胚率;卵母细胞玻璃化时间在40 s内均不影响卵母细胞的活力和发育潜力。 相似文献
3.
水牛卵母细胞玻璃化冷冻保存 总被引：1，自引：0，他引：1
以水牛MII期的卵母细胞为材料,利用玻璃化冷冻液EDS33(16.5%EG+16.5%DMSO+sucrose)对水牛MII期的卵母细胞进行两步法(玻璃毛细管(GMP)和拉细的开口塑料细管(OPS))玻璃化冷冻保存,即卵母细胞首先放入预平衡液(7.5%EG+7.5%DMSO+sucrose)中平衡3 min,再移入玻璃化冷冻液中30 s后装管直接投入液氮.解冻是在蔗糖浓度逐渐降低的解冻液中进行的.解冻后存活的卵母细胞孤雌激活,通过囊胚发育率作为评定卵母细胞冷冻效果的指标.结果发现,GMP和OPS法冷冻保存的水牛卵母细胞解冻后的存活率(分别为96.80%和97.41%)与对照组卵母细胞的存活率(100%)3者之间差异均不显著(P>0.05).GMP法和OPS法冷冻的水牛卵母细胞激活后的胚胎分裂率和囊胚发育率2者均明显低于对照组(分别为30.58%和28.32% vs50.94%,10.81%和9.38% vs 29.63%,P<0.05),而这2种方法冷冻的水牛卵母细胞激活后的分裂率和囊胚发育率差异均不显著(P>0.05).这表明GMP和OPS玻璃化冷冻方法可以用于水牛卵母细胞的冷冻,并且玻璃化冷冻的卵母细胞能继续分裂并发育到囊胚. 相似文献
4.
采用OPS管和GMP管对GV期的牛的卵母细胞进行玻璃化冷冻.在不同的前处理液中平衡5 min,然后在冷冻液(EFS30,EFS40,EDFS30或EDFS40)中平衡30 s,进行OPS法和GMP法玻璃化冷冻保存.结果显示,OPS法用EFS40液和EDFS40液冷冻后形态正常卵率为69.6%和76.1%,2组差异显著(P<0.05),成熟率最高达19.2%和33.3%,2组差异显著(P<0.05);GMP法用EFS40液和EDFS40液冷冻后形态正常卵率最高达75.6%和80.8%,2组差异显著(P<0.05),成熟率最高达15.6%和34.9%,2组差异显著(P<0.05).而采用EDFS40液,OPS法和GMP法对GV期卵母细胞体外发育的影响差异均不显著,但GMP法的冷冻效率较高.表明采用EDFS40液GMP法对GV期卵母细胞的冷冻效率优于OPS法. 相似文献
5.
二甲基亚砜(DMSO)、丙二醇(PROH)、乙二醇(EG)和甘油(GL)4种冷冻保护剂程序化冷冻牛GV期卵母细胞的结果表明,EG和PROH的保护效果比GL和DMSO好。4种不同冷冻方法冷冻保存牛GV期卵母细胞,比较解冻后卵母细胞的体外成熟率、受精后卵裂率。结果表明,在程序化冷冻法与细管玻璃化法(Straw)之间的差异不显著(P>0.05),在开放式拉管法(OPS)与毛细玻管法(GMP)之间的差异不显著(P>0.05);但OPS和GMP与程序化冷冻法和Straw之间的差异极显著(P<0.01)。玻璃化冷冻效果优于程序化冷冻。说明GMP和OPS玻璃化冷冻优于Straw玻璃化冷冻。说明可以采用GMP方法冷冻保存牛GV期卵母细胞。 相似文献
6.
为了探究羟基磷灰石(HA)纳米颗粒对牛GV期卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响，试验以牛卵巢中GV期卵母细胞作为试验材料，将不同粒径的HA纳米颗粒添加到玻璃化冷冻液中，进行超声分散检测。首先，以卵母细胞存活率和成熟率为指标，将0、0.01%、0.05%、0.1%HA纳米颗粒分别添加到玻璃化冷冻液Ⅰ(VSⅠ)和玻璃化冷冻液Ⅱ(VSⅡ)中，不经冷冻直接进行毒性测试；然后，以形态正常率、成熟率、卵裂率和囊胚率为指标测定卵母细胞玻璃化冷冻后的发育能力；最后检测含有0.05%HA纳米颗粒的VSⅡ对冷冻后卵母细胞活性氧水平和线粒体膜电位水平的影响。结果表明：不同浓度HA纳米颗粒对牛GV期卵母细胞均无明显毒性；VSⅡ+0.05%HA纳米颗粒组卵母细胞冷冻后的形态正常率、成熟率、卵裂率、囊胚率显著高于VSⅠ+0.05%HA纳米颗粒组(P<0.05);VSⅡ+0.05%HA纳米颗粒组卵母细胞的活性氧水平显著低于VSⅡ组(P<0.05);VSⅡ+0.05%HA纳米颗粒组卵母细胞的线粒体膜电位水平显著高于VSⅡ组(P<0.05)。说明在VSⅡ中加入0.05%HA纳米颗粒能显著降低牛GV期卵母细胞... 相似文献
7.
试验旨在探讨不同发育时期卵泡上四跨膜蛋白CD9的表达,以及体外成熟和超低温冷冻对绵羊卵母细胞CD9的影响。采用免疫组织化学技术检测CD9蛋白在卵泡上的表达部位,实时荧光定量PCR技术检测CD9 mRNA的表达量,Western blotting技术检测CD9蛋白的含量。免疫组织化学结果发现,在绵羊原始卵泡上就开始检测到CD9荧光信号,且随着卵泡的成熟荧光信号逐渐增强,成熟卵泡时荧光信号达到最强;实时荧光定量PCR检测新鲜MⅡ期卵母细胞中CD9 mRNA的表达量显著增高（P<0.05）,冷冻GV期卵母细胞CD9 mRNA的表达量最少;Western blotting检测得出新鲜MⅡ期卵母细胞中CD9蛋白表达最多,冷冻GV期卵母细胞上表达最少,与实时荧光定量PCR结果一致。卵母细胞的冷冻保存要比胚胎保存应用前景广泛,而四跨膜蛋白CD9在精卵融合中更有着重要的作用,以上结果均显示,冷冻保存降低卵母细胞四跨膜蛋白CD9含量,而CD9的损伤是受精率下降的重要原因之一。 相似文献
8.
①用EFS30、EFS40、EDFS30、EDFS40四种玻璃化冷冻液对MⅡ期水牛卵母细胞进行毒性试验,结果表明:试验组卵母细胞形态正常率与对照组均无显著性差异(P>0.05);对卵母细胞孤雌激活后EDFS30、EDFS40组的卵裂率与对照组(75.28%)及EFS30、EFS40组差异显著(P<0.05);利用4种冷冻保护剂采用OPS法冷冻保存MⅡ期水牛卵母细胞,其中以EDFS40作为冷冻液时,卵母细胞冷冻解冻后孤雌激活卵裂率最高,达31.60%;以EDFS40作为冷冻液,比较了GMP法和OPS法的冷冻效果,结果表明GMP法冷冻效果好于OPS法。②采用不同预处理时间和平衡时间使用细管法常规冷冻G V期卵母细胞,结果表明预处理5 min、平衡15min组的形态正常率和极体排出率相对较高,分别为72.73%、27.27%。 相似文献
9.
本实验旨在探讨玻璃化冷冻保存对猪MⅡ期卵母细胞皮质颗粒分布和孤雌激活后早期胚胎发育能力的影响。实验将卵母细胞随机分为对照组、毒性实验组和冷冻组。采用EFS40和EDFS40两种玻璃化冷冻液处理,卵母细胞经恢复后对其进行染色,观察皮质颗粒的分布;并对另一部分卵母细胞实施孤雌激活,观察早期胚胎的发育。结果表明:毒性实验组和冷冻组卵母细胞皮质颗粒部分释放、完全释放的比例无显著差异,但均显著高于对照组(P<0.05)。不同毒性处理组和不同冷冻组间对皮质颗粒的分布无显著差异。与毒性实验组相比,冷冻处理组显著降低皮质颗粒在皮质区分布的比例(P<0.05)。EFS40毒性实验组孤雌激活后的存活率、卵裂率、囊胚发育率均显著高于EDFS40毒性实验组(86.6%vs.75.0%)、(61.8%vs.40.7%)、(30.2%vs.23.5%)(P<0.05)。EFS40冷冻组存活率显著高于EDFS40冷冻组,但均显著低于对照组。结果显示,抗冻保护剂处理和玻璃化冷冻均导致猪卵母细胞皮质颗粒释放,与EDFS40相比采用EFS40较适合猪MⅡ期卵母细胞冷冻保存。 相似文献
10.
为探索封闭式拉长细管(closed pulled straw,CPS)冷冻牛卵母细胞的效果,将牛卵母细胞分别采用细管、开放式拉长细管(open pulledstraw,OPS)和CPS 3种方法进行冷冻,解冻后进行体外成熟、体外受精和胚胎体外培养。采用CPS法分别对GV期和成熟(MII期)牛卵母细胞进行冷冻保存,解冻后将卵母细胞培养至成熟,进行体外受精和胚胎体外培养。结果显示:OPS组和CPS组卵母细胞的正常形态率分别为83.1%和77.8%,成熟率分别为66.9%和64.4%,卵裂率分别为45.8%和43.4%,囊胚率分别为6.6%和6.0%,组间上述指标差异均不显著(P>0.05);但OPS和CPS组上述4项指标均显著高于细管冷冻组(P<0.05)。解冻后GV期和MII期卵母细胞卵裂率分别为44.5%和57.3%,囊胚率分别为6.8%和17.9%,组间卵裂率和囊胚率差异均显著(P<0.05)。结果表明:CPS法既具有OPS法快速降温的优点,同时,还能避免卵母细胞和液氮直接接触,降低卵母细胞通过液氮被污染的风险。因此,CPS冷冻法可以用于牛卵母细胞的冷冻。 相似文献