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用提纯的SpltNPV、AcNPV病毒粒子分别为免疫抗原获得抗血清,以此抗血清为抗体,提纯的SpltNPV、AcNPV多角体裂解所得粗提纯病毒粒子为检测抗原,初步建立两种病毒的琼脂免疫双扩散法和ELISA间接检测方法.琼脂免疫双扩散结果表明：所得抗血清能识别粗提抗原,但不能与细胞培养的病毒粒子反应.两种病毒I-ELISA检测灵敏度分别达11.23、11.67 ng. 相似文献
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将提纯的草莓伪温和黄边病毒（ＳｔｒａｗｂｅｒｒｙｐｓｅｕｄｏｍｉｌｄｙｅｌｌｏｗｅｄｇｅｖｉｒｕｓＳＰＭＹＥＶ）作抗原免疫家兔，获得效价较高的抗血清，经ＳＤＳ－对流免疫电泳测其效价为１：１２８．四点疫吸附固定法检测ＳＰＭＹＥＶ效果甚理想，可检测到微量病素，提纯病毒浓度低至０．０５μｇ／ｍｌ仍有效果．酶联免疫吸附测定法检出灵敏度也相当高，当病毒浓度为０．１μｇ／ｍｌ时及病叶汁液稀释至１０２４倍时，仍呈阳性反应．免疫电镜技术检视，ＳＰＭＹＥＶ抗血清能清晰地”捕获”同源病毒，并且有装饰作用，抗血清以稀释为１：５００时“捕获”病毒粒子最多． 相似文献
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4.
用43种国际标准抗血清检查了45头延边黄牛的血型,以此43头牛血液作为标准红细胞抗原,分析、分离了同种免疫(lssoimunization)的多价血清(Polyvolentserum)。采用免疫吸附法(lmmunoadsorptionTest)从7头牛的免疫血清中分离、制备 Z′、I_1、T_1、C_2、G_2、A′X、J、U′等8种牛红细胞血型抗体。用相互吸附法(Interact adsorptionTest)验证了上述抗体的特异性,并同相应的国际标准抗血清的溶血反应模式进行了比较。其结果,对45种样本的反应模式,与国际标准抗血清完全一致。 相似文献
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应用马铃薯病毒X、Y(PVX及PVY)标准抗原和抗体,结合电子显微镜制样方法,对马铃薯脱毒组培苗进行免疫电镜检测研究.适宜工作条件室温20～25℃,抗体孵育10min、抗原吸附5min.在组培苗中检测到3种病毒粒体:PVX、PVY及类似烟草脆裂病毒(TRV)的短样杆状粒体. 相似文献
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SPA 固相免疫电镜技术是用葡萄球菌 A 蛋白包被载网后结合抗血清,或用抗血清致敏的金黄色葡萄球菌作为载体吸附病毒的免疫电镜检测方法。它具有灵敏度高,分辩率好,特异性强等优点。葡萄球菌 A 蛋白(Staphylococcal Protein A 简称 SPA)是大多数金黄色葡葡球菌细胞壁上的一种蛋白质成分,具有与人和多种哺乳动物 IgG 的 Fc段相结合,而 Fab 段仍能保持抗原抗体反应的特点。目前 SPA 已广泛用于传染病诊断及免疫学的研究。Shukla 等人首先将 SPA 应用于免疫电镜,检测了甘蔗花叶病毒和烟草花叶病毒。Nicolaieff 等人又将其应用于轮状病毒的电镜检测。1980年 Katz 相似文献
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从小西葫芦黄化花叶病毒(ZYMV)免疫的母鸡蛋卵黄和兔抗血清中分别提取免疫球蛋白IgY和IgG,用多种血清学方法进行检测。结果表明,免疫鸡和兔25d后,鸡蛋卵黄IgY和兔抗血清的效价分别达到1/64和1/512。在琼脂扩散试验中,当抗体稀释28倍时,与抗原反应无明显沉淀线。在胶乳凝集试验中,抗体稀释210倍时,与抗原反应无明显凝集物。ELISA法以辣根过氧化酶标记抗体IgY和IgG,用双抗夹心法成功地检测出了ZYMV,当抗体稀释106倍时,与抗原反应仍呈阳性。免疫电镜方法检测ZYMV,较一般血清学方法可多捕捉50倍的病毒颗粒。 相似文献
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在陕西杨陵地区栽培的千金子花叶毒林上分离到一种病毒,经汁液磨擦接种三生烟及心叶烟产生环斑症状。其TIP为60℃,DEP为10~(-2)～10~(-3),L则为4～5天。能通过种子传播但不能通过蚜虫传播。该病毒与TRSV抗血清有明显的沉淀反应。在电镜下观察到直径30nm的球状粒子。该病毒被鉴定为TRSV。 相似文献
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侵染观赏百合的黄瓜花叶病毒血清学检测方法研究 总被引：3，自引：1，他引：2
采用摩擦接种和PEG沉淀法对侵染观赏百合的黄瓜花叶病毒(CMV)进行了提纯,提纯病毒具有典型的核蛋白吸收峰曲线,D260 nm/D280 nm=1.236;利用提纯的CMV免疫大白兔制备抗血清,经微量沉淀法测定,其效价为1∶1024;用硫酸铵沉淀法提纯IgG,制备了辣根过氧化物酶标抗体,利用自制抗血清对DAS-ELISA、间接-ELISA和DIBA-ELISA检测侵染观赏百合的CMV灵敏度和检测范围进行了比较试验,结果表明DAS-ELISA检测的灵敏度较高,是间接-ELISA和DIBA-ELISA灵敏度的4倍;间接-ELISA和DIBA-ELISA的检测范围比DSA-ELISA宽.对21个观赏百合样品的CMV检测结果表明,DIBA-ELISA的检出率为66.67%,间接-ELISA的检出率为38.09%,二者的检出率分别比DAS-ELISA的检出率(23.81%)提高了42.86%和14.28%. 相似文献
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<正> 1988～1990年用10种抗血清对270～700份葡萄标样用 ELISA 的间接法和双抗体夹心法检测出南芥菜花叶病毒(ArMV)、葡萄卷叶病毒(GLRV)、葡萄扇叶病毒(G-FV)、番茄黑环病毒(TBRV)、烟草环斑 相似文献
11.
从安徽蚕豆上分离到一个种传病毒分离物Bd,仅能侵染蚕豆和豌豆,稀释终点(DEP)为10~(-4),致死温度(TIP)80～85℃(10分钟),体外存活期(LIV)6天(20～25℃室温);可经汁液和种子传播,但苜蓿蚜(Aphis medicaginis Koch)不能传毒。用四氯化碳——PEG(MW.6000)法,结合蔗糖垫差速离心,可获高度纯化的病毒制备物。病毒粒子等轴对称,直径约25nm,部分粒子被染料渗透而中空。用纯化的Bd分离物制备的抗血清表现高度的专一性,在琼脂双扩散试验中,Bd分离物与其抗血清只形成一条沉淀带;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)成功地检出了该分离物,并获得较高的灵敏度。据此,作者初步认为Bd分离物类似于Quantz等报道的蚕豆真花叶病毒(Broad Bean True Mosaic Virus)。本文是蚕豆真花叶病毒在我国的第一次报道。 相似文献
12.
《南京农业大学学报》2018,(6)
[目的]本试验旨在制备特异性鼠抗猪瘟病毒(CSFV)非结构蛋白NS3和NS5B的多克隆抗体。[方法]根据CSFV NS5B基因序列设计1对特异性引物,以CSFV石门株为模板PCR扩增NS5B基因,同时根据大肠杆菌对密码子的偏嗜性优化了NS3密码子,并将NS3和NS5B基因分别克隆至原核表达载体p Cold I,转化至大肠杆菌Rossetta 2(R2),经0. 1mmol·L-1IPTG诱导后进行融合蛋白的表达和纯化,常规免疫BALB/c小鼠制备抗血清。应用Western blot和间接免疫荧光技术鉴定了多克隆抗体的特异性。[结果]Western blot结果显示,该抗血清不仅能识别原核和真核表达的NS3和NS5B蛋白,也能识别细胞中感染的CSFV并产生特异性条带;间接免疫荧光检测结果表明,2种抗血清除均能与胞浆中的CSFV粒子发生反应外,也能识别宿主细胞中真核表达的NS3和NS5B蛋白。[结论]本试验成功表达了NS3和NS5B,且用其制备的抗血清具有生物学功能,为深入探究猪瘟病毒致病机制奠定了基础。 相似文献
13.
采用PEG二次沉淀和蔗糖硫酸铯密度梯度离心,得到提纯的3种麦类土传花叶病毒(小麦黄花叶病毒、大麦黄花叶病毒、中国小麦花叶病毒)。透射电镜观察分别可见线状、直杆状病毒粒子,测定浓度分别达5.44、8.08、4.09 mg/m L。提纯病毒免疫新西兰大白兔制备抗血清,得到的3株抗血清经酶联免疫吸附法测定效价分别达1∶12 800、1∶25 600、1∶6 400。应用样品和多抗稀释的方阵试验,建立3种多抗的双抗夹心酶联免疫吸附法(TAS-ELISA),并对采自江苏省、安徽省、河南省、山东省的麦子病样进行检测,结果显示,阳性检出率较高,说明这3种病毒仍是我国麦子流行的主要病毒。 相似文献
14.
王全凯 《吉林农业大学学报》1988,(4)
本试验应用水貂阿留申病毒“辽金ADV81—02”病毒株对对流免疫电泳阴性、临床表现健康的艾虎进行了实验感染。结果表明,在感染阿留申病毒的艾虎及复归水貂脏器(肝、脾、淋巴结)中均能提取出阿留申病毒抗原,并在免疫电镜下发现了典型的阿留申病毒颗粒。超薄切片电镜观察表明,病毒粒子主要分布在感染艾虎的肝、胂、淋巴结、肾和小肠。 相似文献
15.
昆明香石竹斑驳病毒鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
从表现为叶斑驳、花碎色症状的香石竹病株上获得一病毒分离物,经电镜负染观察,该病毒为直径是28～33 nm的球状粒子,病毒提取液经紫外光测定呈典型核蛋白吸收曲线,OD260/OD280=1.70;血清学反应与CarMV抗血清出现明显的沉淀线。由此,可基本认为该病毒分离物为香石竹斑驳病毒(Carnation mottle virus, CarMV)。 相似文献
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烟草花叶病毒（TMV）斑点免疫诊断试剂盒的研制 总被引：1，自引：0，他引：1
以烟草花叶病毒 (TMV)及其抗体为材料 ,以硝酸纤维素膜 (NCM)为载体 ,根据斑点免疫吸附法 (DIBA)的原理 ,在国内首次研制出斑点免疫诊断试剂盒。研究表明 :以健康汁液预先吸附抗血清以及用 1%H2 O2 处理点样后的NCM ,能有效地排除斑点免疫吸附中非特异性干扰 ;用氯仿处理研磨后的样品和适当提高样品的稀释度能有效去除样品中叶绿素和其它色素的干扰 ,提高灵敏度。制备出的试剂盒具有体积小、重量轻、便于携带等优点 ,适于在广大科研单位及口岸检疫中应用 相似文献
17.
罗氏沼虾肌肉白浊病(Whitish muscle diseases of Macrobrachium rosenbergii)是近年来流行于罗氏沼虾苗种阶段的严重疾病,该病病原已确定为罗氏沼虾诺达病毒(Macrobrachium rosenbergii Nodavirus,MrNV).作者在病毒超离提纯的基础上,制备了罗氏沼虾诺达病毒兔抗血清,并应用抗罗氏沼虾诺达病毒单克隆抗体2B5,建立了三抗体夹心酶联免疫检测方法(TAS-ELISA).TAS-ELISA最适反应条件为:兔抗体以1μg/mL包板,小鼠单抗2B5的工作浓度为1:50000,该法检测MrNV的灵敏度达0.98ng,对WSSV、TSV及其他细菌感染死亡的罗氏沼虾苗没有非特异性反应.通过对2000-2002年病虾及疑似病虾的病毒检测,表明TAS-ELISA法比间接ELISA法和核酸电泳法有更高的阳性检出率和符合率;此外还摸索了降低孵育温度和缩短孵育时间对病毒检测的影响,表明各步孵育温度和时间分别为25℃和20 min对于白浊症状的病苗检测无明显影响,使得本法更加适合于生产实践. 相似文献
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轮状病毒(RV)是引起婴幼儿和多种幼龄动物腹泻的主要病原之一。RV病的诊断主要依赖于粪便中病毒粒子或抗原成分的检出。通常的方法有电镜或免疫电镜、ELISA及核酸SDS-PAGE等,这些方法有的比较繁琐,需要昂贵的设备,有的需要较长的时间,不能适应临床快速诊断的要求。为此,我们建立了一种快速双抗体夹心ELISA技术,能在40分钟内检出粪便中的轮状病毒,获得较为满意的结果。 材料与方法 相似文献
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通过田间调查、血清学技术、电镜技术、RT-PCR技术对侵染云南食用百合的主要病毒进行调查和研究,结果表明,食用百合病毒病的症状类型多为花叶,斑驳或者无症等类型. 病毒种类主要是黄瓜花叶病毒(CMV),百合无症病毒(LSV)和百合斑驳病毒(LMoV). 其中通过ELISA检测,CMV的检出率达到53.3%,LSV的检出率达到46.7%;通过RT-PCR检测,CMV的检出率达到60%,LSV的检出率达到50%,LMoV的检出率达到30%. 相似文献
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应用纯化兔出血症病毒(RHDV)接种豚鼠,4d后剖杀,分离组织,通过电镜观察、血凝试验(HA)、RT-PCR等方法检测病毒在体内分布情况;应用纯化RHDV间隔2周接种豚鼠,3次免疫后10 d,分离外周血淋巴细胞进行IFN-γ、IL-2、IL-4、WST检测.结果表明:电镜观察未见病毒粒子;HA检测结果为肝脏HA效价最高,肺脏效价最低;RT-PCR方法未检测到RHDV目的基因;WST检测发现免疫组刺激指数高于对照;免疫组IFN-γ、IL-2检测结果高于对照,IL-4检测结果低于对照.RHDV在豚鼠部分组织具有血凝性,电镜未见病毒粒子,能使豚鼠产生细胞免疫反应,本研究为筛选鉴定“通用型”T细胞表位奠定基础. 相似文献