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猪脑心肌炎病毒RT—LAMP检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
针对猪脑心炎病毒（Encephalomyocarditis virus,EMCV）3D基因保守序列的6个特异性部位设计了2对引物,利用BstDNA聚合酶,63℃恒温保持50min即可完成反转录与扩增反应,产物中加入SYBR GreenI染料,在紫外光下可直接观察判定扩增结果,试验成功建立了猪EMCV的RT-LAMP检测方法。结果表明：该方法灵敏度比RT-PCR高100倍,具有良好的重复性和稳定性,而且对其他病毒均无扩增结果,可作为猪EMCV的快速诊断方法。 相似文献
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在对某猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断、病理诊断、抗体快速金标检测、回归动物实验和细胞病变观察的基础上,参考GenBank上PRRSVLV和VR-2332毒株核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,以提取来自贵州某猪场猪繁殖与呼吸综合征疑似病料（包括血液、肝、肺、肾、淋巴结、心、脾组织）的总RNA为模版,应用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法,经94℃预变性2min;94℃变性45s,60℃退火1min,72℃延伸1min进行35个循环;72℃再延伸10min进行扩增。扩增产物经回收纯化后,应用pMD18-T载体进行克隆后测序。测序结果表明,所扩增DNA片段大小为716bp,该核苷酸序列与湖南发现的PRRSV序列同源性为100％。本实验结果说明临床诊断及实验检测方法作为猪繁殖与呼吸综合征的诊断方法是可靠的,可为猪繁殖与呼吸综合征诊断提供参考依据。 相似文献
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A型塞尼卡病毒（Senecavirus A,SVA）也称为塞尼卡谷病毒（Seneca Valley virus,SVV）,属于小RNA病毒科塞尼卡病毒属成员。SVA主要引起猪的水泡性疾病,与口蹄疫、水泡性口炎、猪水泡病等临床症状相似,可导致新生仔猪急性死亡,严重影响养猪业发展。自2015年广东省发生SVA感染以来,中国多省份陆续有该病发生的报道。当前,中国因猪群缺乏针对SVA的免疫屏障,加之该病传染性较强,存在大范围暴发的潜在风险。如何有效防控SVA感染是迫切需要解决的问题。目前已开发出多种SVA诊断方法用于进行实验室及现场条件下早期的鉴别诊断。SVA的分离鉴定、原位杂交和免疫组化可用于检测病原体的存在及其与组织内形态学变化关系;血清学诊断方法包括基于不同结构蛋白的间接ELISA方法、竞争ELISA方法、均相光激化学发光免疫技术和病毒中和试验,用免疫学方法检测抗体有助于了解SVA感染进程,是临床诊断的主要手段;病毒核酸检测方法主要有PCR技术、等温扩增技术、基因组测序等分子生物学技术,在病毒感染的早期快速检测及检测新发病毒中具有重要作用。目前仍无商品化疫苗预防SVA感染,但科研人员已研发出了灭活疫苗、弱毒疫苗、核酸疫苗和亚单位疫苗等多种具有潜力的候选疫苗。笔者系统总结了SVA检测方法及疫苗研发的最新进展,以期为SVA感染的防控提供参考依据。 相似文献
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正法比奥·万努奇介绍说能引起猪临床产生水泡症状的疾病主要有五种:口蹄疫、猪水泡病、水泡性口炎病毒、猪水疱性皮疹、塞尼卡谷病毒(塞尼卡病毒A)。当然,还有一些非感染因素会导致水泡,如化学烧伤、热灼伤等,但是只是少数的情况。单用肉眼从临床症状上无法区别五种疾病,只有在水泡出现时检测才是敏感的,但是水泡存在的时间很短,结痂后再检测敏感性会降低。随后他具体介绍了能引起猪水泡症状 相似文献
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通过逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR），设计特异性引物检测猪粪便中猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因片段。结果发现，所检测的8份猪粪便样本中有6份扩增出了目的条带，判定为阳性。 相似文献
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猪水疱疹病是由猪水疱病毒引起的，发生在猪身上的高度传染性疫病。该病在临床上易与猪口蹄疫、水疱病和水泡性口炎混淆。在大量研究分析中，人们发现该病毒与海洋生物的感染也有着密切联系，这对今后海洋资源的利用有潜在威胁。对猪水疱疹病诊断技术的探索，为科学预防该病提供了重要依据，同时也为海洋资源的进一步开发提供了参考。 相似文献
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猪支原体肺炎LAMP-LFD快速检测方法的建立及初步应用 总被引：1，自引：0，他引：1
旨在采用环介导等温扩增（LAMP）和横向流动试纸条（LFD）相结合的方法，建立一种快速、特异，过程可视化的猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp）检测方法。针对猪肺炎支原体（Mhp）P36基因设计5套特异性引物和1条异硫氰酸荧光素（FITC）标记的探针，进行LAMP扩增反应。将生物素标记的LAMP产物与FITC标记的探针进行特异性杂交，并使用横向流动试纸条完成扩增产物的检测。经优化，LAMP最佳反应条件为65℃，反应15 min，从基因组DNA提取到LFD结果判断只需40 min左右，比常规PCR技术缩短近2 h。LAMP-LFD可特异性地检出猪肺炎支原体（Mhp），对猪鼻支原体（Mhr）及猪圆环病毒（PCV）等常见猪病病原的检测结果为阴性。灵敏性试验表明，LAMP-LFD对Mhp的检测灵敏度为1×100个拷贝DNA，是普通PCR的1 000倍。利用本方法可从采集的88份临床疑似病料样品中检测到64份阳性，国标PCR方法可检测到56份阳性，符合率可达90.9%。综上，本研究建立的LAMP-LFD方法可特异、准确地应用于Mhp的检测，而且灵敏度高、操作简单、仪器设备依赖性低、检测成本低、耗时短，适合基层实验室、应急检测或现场监测等使用，具有较高的推广价值，有望发展成为Mhp快速检测的有效手段。 相似文献
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塞尼卡谷病毒病(Seneca Valley virus,SVV)又称猪原发性水疱病、猪原发性疱疹病、也称塞尼卡病毒A,是由小RNA病毒科塞尼卡病毒属中的塞尼卡谷病毒引起的猪的一种病毒性传染病。该病引起的临床症状主要有口、鼻吻、蹄冠部等部位出现水疱性病变以及新生仔猪的突然死亡。这与猪的口蹄疫、水疱病、水疱疹以及水疱性口炎的临床症状相似甚至难以区分。本文从该病的流行病学、临床症状、病理变化、诊断方法以及防控措施等方面进行综述,为临床有效控制该病的发生提供参考。 相似文献
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摘 要: 猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪繁殖和呼吸道接触性传染病。临床特征为母猪流产、死胎和木乃伊胎增多,仔猪出现呼吸道症状和断奶前死亡率增高以及免疫抑制,严重危害种公猪和繁殖母猪及其仔猪。本文参考 GenBank上PRRSV LV和VR-2332毒株核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,以提取来自贵州某猪场猪繁殖与呼吸综合征疑似病料（包括血液、肝、肺、肾、淋巴结、心、脾组织）的总RNA为模版,应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,经94℃ 预变性2 min;94℃变性45s,60℃退火 1min,72℃延伸1min进行35个循环;72℃ 再延伸10min进行扩增。扩增产物经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,结果表明所扩增的目的DNA条带大小约750bp,与预期大小相似。扩增产物经回收纯化后,应用pMD18－T 载体进行克隆后测序。测序结果表明,所扩增DNA片段大小为739bp,该核苷酸序列与湖南发现的PRRSV序列同源性为100%。本实验说明临床诊断及实验RT-PCR检测方法作为猪繁殖与呼吸综合征的诊断方法是快速有效的,可为猪繁殖与呼吸综合征诊断提供参考依据。 相似文献
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对3个中国广东的鸽Ⅰ型副粘病毒分离株（P4，P5和P7）基因组RNA以反转录－聚合酶链反应法（RT－PCR）扩增了F基因75％的基因区域（343－1673nt），其中毒株P4和P7准确扩增出预期大小明亮的DNA片段，而P5扩增出片段很淡，用该RT－PCR产物作模板以相同引物再作PCR，结果可以扩增出大小与预期一致的明亮条带，此方法可以快速检测鸽Ⅰ型副粘病毒（PPMV－1）。 相似文献
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为了建立一种针对猪水泡病毒(SVDV)的反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),用于减少猪水泡病与口蹄疫因临床症状相似而造成的误诊,试验针对SVDV VP1基因序列设计4个LAMP引物,其中外侧引物用于SVDV PCR检测,并利用RT-LAMP和RT-PCR方法进行敏感性试验、特异性试验以及临床样品检测。结果表明:针对SVDV的RT-LAMP检测方法的敏感性是RT-PCR的10倍; RT-LAMP方法的特异性良好,与口蹄疫病毒无交叉反应;两种方法对临床样品检测的符合率为100%。说明试验建立的RT-LAMP方法具有敏感性高、特异性强、快速等特点,适合实验室和临床对SVDV的快速诊断。 相似文献
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本研究的目的是确定在试验感染猪肌肉中多长时间能检测出猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和评估猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）通过摄食经定量反转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）鉴定为PRRS阳性的猪肉的传播风险。试验采集135头试验猪（试验组人工接种PRRSV,89头;阴性对照组46头）的血清、淋巴组织和肌肉（背最长肌）。接种后第28天~第202天,试验组中13头猪（14.6%）的肌肉样本出现qRT-PCR阳性,在其中4头猪的血清样本和3头猪的淋巴组织样本中分离到了PRRSV。另外,通过生物鉴定在该13头试验猪中6头的淋巴组织匀浆中检测到了该病毒。通过给13头3周龄的PRRSV阴性猪饲喂定量PT-PCR检测阳性的猪肉并利用定量PT-PCR检测监控该试验猪的PRRS感染情况,研究了PRRS的传播性。定量PT-PCR检测结果显示,食用PRRS阳性猪肉的试验猪没有感染PRRS。以上资料结果表明,定量PT-PCR在猪肉中检测到了非传染的PRRSV,通过食用PRRSV感染猪肉PRRSV没有极大的传播性。 相似文献
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本研究目的是确定在试验感染猪肌肉中多长时间能检测出猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和评估猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）通过摄食经定量反转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）鉴定为PRRS阳性的猪肉的传播风险。试验采集135头试验猪（试验组人工接种PRRSV,89头;阴性对照组46头）的血清、淋巴组织和肌肉（背最长肌）。接种后第28天～第202天,试验组中13头猪（14.6%）的肌肉样本出现qRT-PCR阳性,在其中4头猪的血清样本和3头猪的淋巴组织样本中分离到了PRRSV。另外,通过生物鉴定在该13头试验猪中6头的淋巴组织匀浆中检测到了该病毒。通过给13头3周龄的PRRSV阴性猪饲喂定量PT-PCR检测阳性的猪肉并利用定量PT-PCR检测监控该试验猪的PRRS感染情况,研究了PRRS的传播性。定量PT-PCR检测结果显示,食用PRRS阳性猪肉的试验猪没有感染PRRS。以上资料表明,定量PT-PCR在猪肉中检测到了非传染的PRRSV,通过食用PRRSV感染猪肉PRRSV没有极大的传播性。 相似文献
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为建立塞尼卡谷病毒(SVV)重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(RPA-LFD)检测方法,本研究针对SVV 3D基因设计了引物和探针,通过反应条件优化、特异性、灵敏性和重复性试验,建立了SVV RPA-LFD检测方法。特异性试验结果显示,该方法与口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸道综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、圆环病毒、伪狂犬病毒无交叉反应;在40℃、20 min内可检测的最低浓度为56拷贝/μL质粒标准品;通过3次重复试验检测,LFD检测线灰度值变异系数范围在4.49%~9.73%。利用该方法对120份国内临床样品进行检测,结果均为阴性。本研究首次建立了检测SVV的等温、快速RPA-LFD方法,读取结果不依赖任何仪器设备,为猪群感染SVV的现场快速诊断、流行病学研究和根除方案的制定提供帮助。 相似文献
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为建立直接检测可疑病料中胸膜肺炎放线杆菌（APP）的PCR诊断方法，对用以扩增apxⅣA毒力基因3’端长约442bp的核苷酸片段的引物、模板、Taq DNA聚合酶、dNTPs的最适剂量及退火温度进行了优化筛选，并进行了特异性及重复性试验；以筛选出的优化条件，对临床可疑病料进行了PCR检测。结果，在25μL体系中，以5pmol／μL引物、0．25μL Taq DNA聚合酶、2mmol／L dNTPs、56℃退火温度对APP标准菌株apxⅣA毒力基因的扩增效果最好，重复性和稳定性高；而对类症菌株的扩增结果则为阴性，表明其特异性强。对分离到APP的病料PCR阳性率为100％（5／5）；未分离到APP的纤维渗出性病料中，新鲜与陈旧病料PCR阳性率分别为70．59％（12／17）、50．00％（4／8），而非纤维渗出性病料的PCR结果均为阴性（0／45、0／9）。结果表明，建立的PCR方法特异、快速、稳定、敏感，优于细菌学方法，它可作为APP可疑病料的理想诊断方法。 相似文献
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《动物医学进展》2021,42(7)
猪轮状病毒(PoRV)是导致哺乳仔猪和断奶仔猪腹泻的主要原因之一。该疫病的暴发流行,给养猪业造成巨大的经济损失。因此,快速可靠检测PoRV的方法,有利于及时诊断和防控该病。目前,用于检测猪轮状病毒的方法很多,论文对于近年来检测PoRV的方法进行了论述,包括病毒分离培养鉴定、病毒电镜形态检查、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫层析试纸条检测技术、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)和逆转录-环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)、原位杂交技术(ISH)、纳米孔测序等,并分别介绍了不同检测方法在应用中的优缺点,为有效诊断及防控PoRV感染提供技术指导。 相似文献