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噬菌体展示肽库技术是将外源蛋白质或多肽的基因表达产物与噬菌体衣壳蛋白融合,并在其表面展示,进而通过筛选表达有特异肽或蛋白质的噬菌体,得到大量富集,从而获得目的多肽或蛋白质,在DNA序列分析后应用于实践中。本文叙述了噬菌体展示肽库技术的基本原理、主要构建途径、筛选方法及应用现状和展望。 相似文献
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噬菌体展示肽库技术是将外源蛋白质或多肽的基因表达产物与噬菌体衣壳蛋白融合,并在其表面展示,进而通过筛选表达有特异肽或蛋白质的噬菌体,得到大量富集,从而获得目的多肽或蛋白质,在DNA序列分析后应用于实践中。本文叙述了噬菌体展示肽库技术的基本原理、主要构建途径、筛选方法及应用现状和展望。 相似文献
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为构建猪链球菌(Streptococcus suis)蛋白表面展示系统,本研究通过序列分析,确定猪链球菌的LPxTG蛋白及其信号肽(SP)和胞壁锚定基序(CWA),通过PCR扩增Peno-SP、GFP、CWA的DNA片段并融合,构建强启动子Peno控制表达编码SP-GFP-CWA融合蛋白的DNA片段,将该重组DNA片段连接pSET2载体,获得蛋白表面展示质粒,转化猪链球菌,构建得到以GFP为报告蛋白的猪链球菌蛋白表面展示系统。结果显示,利用猪链球菌的10个LPxTG蛋白及其SP和CWA序列,构建了10个含有Peno-SP-GFP-CWA融合片段的重组pSET2表面蛋白展示质粒pSsPSD1至pSsPSD10,分别转化猪链球菌05ZYH33,PCR鉴定显示其中7个转化猪链球菌。采用western blot初步检测其展示蛋白,结果显示,7个转化阳性菌株均能有效表达GFP蛋白,以成熟GFP条带为指标,均表现出了一定的外源GFP表面展示水平,分别命名为SsPSD1、SsPSD2、SsPSD4、SsPSD7-SsPSD10,其中SsPSD1、SsPSD4、SsPSD8和SsPSD9表面展示水平相对较好,在猪链球菌表面展示外源蛋白方面具有很好的潜力。本研究首次尝试建立猪链球菌蛋白表面展示系统,为猪链球菌表面递呈外源蛋白或抗原提供了新的策略。 相似文献
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噬菌体展示技术在动物病毒研究中的应用 总被引：1，自引：0，他引：1
噬菌体展示技术是20世纪80年代逐步建立并发展起来的一项分子生物学新技术。它以噬菌体或噬粒为载体,使外源肽或蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面进行融合表达,进而通过亲和富集法筛选表达有特异肽或蛋白质的噬菌体。利用噬菌体表面展示技术可以构建抗体库、随机肤库、蛋白质突变体库和cDNA文库,从而广泛用于抗原表位、抗体、配体、细胞内信号转导以及药物筛选等研究,具有广阔的应用前景。本文跟踪了目前噬菌体展示技术在动物病毒检测领域的最新研究进展和发展前景。 相似文献
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噬菌体展示技术(Phage display technology)是以噬菌体或噬菌粒为载体,使外源肽或蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面进行融合表达,进而通过亲和富集法筛选表达有特异肽或蛋白质的噬菌体,此技术现已被广泛应用于生命科学的许多领域。本文主要介绍了噬菌体展示技术的原理,并就噬菌体表面展示系统的不同类别的表达载体分别做了描述,同时阐述了该展示技术在抗原表位研究中的应用。 相似文献
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核酸疫苗是继灭活疫苗、减毒疫苗和基因工程重组蛋白疫苗之后的第三代疫苗.它是指直接将编码有外源蛋白质基因和表达调控序列的DNA或RNA作为疫苗免疫动物,外源的DNA或RNA进入机体的细胞以后,利用宿主的转录和翻译系统,合成外源蛋白质作为抗原,刺激机体产生特异性的免疫应答反应.它作为一种新兴的免疫技术,能够在大多数动物模型中对感染疾病激发有效的保护性免疫反应（特别是细胞免疫）,是自20世纪90年代以来的研究热点,开辟了疫苗学的最新领域. 相似文献
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T4噬菌体展示技术是一种将外源蛋白与噬菌体表面特定蛋白质融合并展示于其表面,从而获得特定功能蛋白质的基因工程技术。本文主要介绍T4噬菌体展示技术的原理、展示方式和应用。 相似文献
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DNA疫苗的研究进展 总被引：2，自引：0，他引：2
DNA疫苗主要是由保护性抗原基因和质粒载体两部分组成。(一)编码抗原蛋白的基因可以是单个基因，也可以是具有协同保护功能的一组基因，也可以是编码抗原决定簇的一段核苷酸序列。如果对病原体基因组了解得较为清楚，就可以选择病原体表面糖蛋白编码基因，被表达的蛋白质可以在寄主体内正确地糖基化，从而诱导免疫反应。对于易发生变异的病毒，则可以选择各亚型共有的核心蛋白基因中的保守DNA序列作为编码抗原的序列，从而避免易变病毒产生免疫逃避现象。 相似文献
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家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus, BmNPV)是一种具有较强传染性的病毒，在感染的极晚期超高水平表达一种约29 kD的碱溶性多角体蛋白。但该蛋白为病毒复制的非必需蛋白，因此，利用该基因可以被删除或被外源基因替换而不影响病毒的复制的原理构建重组病毒，可以实现外源基因的高水平表达。然而，目前虽已经有较多文献研究多角体蛋白高水平表达的分子机制，但迄今对于多角体蛋白基因编码区的结合蛋白尚不明确。本研究通过DNA pull-down联合质谱技术对结合在多角体蛋白编码区的蛋白质进行鉴定，共鉴定到78个宿主来源的蛋白和49个病毒自身编码的蛋白。对这些蛋白进行GO注释，结果表明这些蛋白除了具有共同的核酸结合功能外，还有其他不同的生物学功能，共同在多角体蛋白的超高水平表达过程中发挥作用。进一步从上述蛋白中筛选出了最值得深入研究的9个宿主蛋白和10个病毒蛋白。对这些蛋白进行深入研究，将为深入揭示多角体蛋白超高水平表达的分子机制提供新的线索。 相似文献
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《蚕业科学》2015,(4)
GP64是Ⅰ型杆状病毒的主要囊膜糖蛋白,利用基因重组技术在gp64中插入外源蛋白基因,二者在病毒表面融合表达活性肽或蛋白质,可以免去纯化表达产物的繁琐。L-天冬酰胺酶Ⅱ(ASP)是一种临床上广泛使用的蛋白类抗肿瘤药物,利用家蚕杆状病毒(BmNPV)GP64展示系统表面展示ASP,探讨以表面展示有ASP蛋白的出芽型病毒粒子(BV)生产抗肿瘤药物的可行性。构建重组转移载体pFast Bacdual-gp64sp-asp-gp64ctd,并转化E.coli DH10BacTM,通过蓝白斑筛选获得重组杆粒DNA,将重组杆粒DNA通过脂质体转染至Bm N细胞,获得了重组病毒。重组病毒大量感染Bm N细胞后72 h,收集感染病毒的细胞培养液超速离心纯化BV。采用奈氏试剂法检测接种重组病毒的Bm N细胞内表达融合ASP的酶活力为1 788.4U/mg;Western blot检测纯化后的BV中含融合ASP蛋白,然而BV中的ASP检测不出酶活性。试验结果提示,构建的杆状病毒GP64展示系统可以将ASP转到BV上,但产物的活性保持有待进一步研究。 相似文献
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<正>基因打靶技术是20世纪80年代发展起来的一项分子生物学技术,它利用基因转移的方法,将外源DNA序列导入靶细胞,通过外源DNA序列与靶细胞内染色体上同源DNA序列间的重组,将外源DNA定点载入靶细胞基因组上某一特定的位点,或 相似文献
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噬菌体展示技术是新近发展起来的将外源肽或蛋白与特定噬菌体衣壳蛋白融合,并展示于噬菌体表面的一项新技术。示系统主要包括丝状噬菌体展示系统、入噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统及T7噬菌体展示系统等。该技术在抗血吸虫疫苗研究上的应用主要集中在模拟血吸虫抗原位点和直接作为疫苗载体方面,而在分析血吸虫保护性抗原位点、发现新的功能蛋白或抗原基因方面的应用研究还有待加强。本文就噬菌体展示拉术及其在抗血吸虫疫苗研制中的应用进行了简要概述,为抗血吸虫疫苗的研究提供。 相似文献
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通过基因工程手段 ,不但有可能揭示有机体几乎所有蛋白质的结构和功能 ,而且也可以工业化大规模地生产外源重组蛋白。然而 ,在大多数情况下 ,细菌不能大量地合成外源蛋白 ,同时 ,由于某些蛋白在生物体内是以多聚体的形式存在 ,特别是某些潜在的药用蛋白质 ,通过重组 DNA的手段无法满足其生物活性的要求。在这种情况下 ,通过重组动物细胞可以获得具有生物活性的蛋白质 相似文献