H5N1亚型禽流感病毒鸡胚分离株蚀斑克隆及生物学特性比较     

杨素  黄青云  瘳明  任涛  沙才华  廖秀云 《中国畜牧兽医》2007,34(11):54-60

建立了H5N1亚型禽流感病毒（AIV）蚀斑克隆方法，用不加中性红的营养琼脂为覆盖层，在倒置显微镜下挑斑，对3株H5N1亚型AIV鸡胚分离毒株进行了蚀斑克隆纯化，从同一鸡胚分离毒株中纯化得到了蚀斑大小和形态均存在显著差异的毒株，共获得13株蚀斑克隆纯化株。研究结果表明，当小牛血清浓度为2%时，加入终浓度50 μg/ml的胰酶可明显促进和刺激蚀斑的形成，蚀斑的直径和PFU/ml均有显著的增加。通过TCID₅₀、EID₅₀和LD₅₀测定发现，来自同一鸡胚分离株的不同蚀斑克隆纯化株中，蚀斑大、毒力强的克隆毒株占优势，而且蚀斑较大的，其毒力也较强。对得到的13株蚀斑克隆毒株的全基因组各片段序列分析表明，蚀斑克隆纯化株在HA蛋白裂解位点附近的氨基酸序列均符合高致病性通报性禽流感病毒的分子特征。  相似文献   

AsiaⅠ型口蹄疫病毒灭活疫苗毒株不同宿主系传代中VP1基因的遗传变异研究     

朱晶晶  盛卓君  符子华  易忠  魏玉荣  黄炯  马文革  胡俊  朱刚  徐亚萍 《中国畜牧兽医》2008,35(12):65-70

口蹄疫病毒结构蛋白VP1参与构成病毒粒子的主要中和抗原位点,是4种结构蛋白中最易发生变异的。在病毒传代过程中,对VP1基因进行遗传变异分析是口蹄疫疫苗研制中不可或缺的环节。为此,作者扩增了经不同宿主系（乳鼠、BHK₂₁细胞）连传不同代次的AsiaⅠ型毒株的VP1基因,并对其进行遗传变异分析,毒株间核苷酸同源性为99.4%~99.8%,推导氨基酸序列同源性为98.6%~100%;制苗毒株经过不同宿主系有限传代后,与传代前的原毒(MF1)相比,VP1基因未发生大的变异,主要抗原位点较稳定,说明以此种方式获得的制苗毒株制备的灭活疫苗是稳定的,适用于该毒株流行区域内相关家畜的免疫预防。  相似文献   

猪伪狂犬病病毒GXBB株的分离鉴定及gE基因的克隆分析   总被引：4，自引：2，他引：2  

王仰杰  刘芳  华俊  马玲  陈忠伟  张伟  黄红梅  陈凤莲  吴健敏 《中国畜牧兽医》2008,35(11):32-35

从广西玉林博白某猪场采集的发病仔猪大脑和内脏病料中分离到一株病毒。病毒接种家兔后引起典型的奇痒、神经症状,接种PK-15细胞出现典型的细胞病变,病毒效价（TCID₅₀）为10^-7.22/0.1 ml。设计扩增PRV gE胞外区基因的引物,能扩增出约947 bp的特异性片段,将扩增出的目的片段进行克隆、测序,并与国内外不同PRV毒株进行分析比较,发现该毒株与国内MinA株、Ea株、SH株、LA株、GXB株、GXW株核苷酸同源性在98.7%～99.4%之间,氨基酸同源性在98.1%～99.1%之间,上述结果证实该分离毒株为伪狂犬病病毒,命名为GXBB株。GXBB株与国内流行毒株同源性很高,说明目前广西PRV流行株变异不大。这为下一步广西伪狂犬病的预防和净化工作提供科学的理论基础。  相似文献   

三聚氰胺等4种物质的毒性比较研究   总被引：7，自引：0，他引：7  

贾广乐  王建峰  林祥梅  梅琳 《中国畜牧兽医》2008,35(12):162-163

试验旨在通过细胞毒性试验、急性毒性试验对三聚氰胺及其类似物的毒性进行了初步研究。结果表明,三聚氰胺、三聚氰酸、双氰胺、单氰胺的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为10.11、3.17、22.56、0.305 mg/ml,而三聚氰胺、三聚氰酸、双氰胺的半数致死量（LD₅₀）均大于5000 mg/kg,单氰胺的半数致死量（LD₅₀）小于500 mg/kg。表明三聚氰胺、三聚氰酸、双氰胺为微毒或基本无毒,单氰胺为高毒。  相似文献   

口蹄疫病毒O型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗的研究     

《广东畜牧兽医科技》2008,(4)

对O型口蹄疫病毒OHM/02株和亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒AsiaⅠ-KZ/03株进行了部分生物学特性分析,结果表明它们对牛的毒力较强,传代后毒力稳定,OHM/02株半数感染量(ID50)在107.5～108.25/0.2mL,AsiaⅠ-KZ/03株半数感染量(ID50)在106.75～107.5/0.2mL之间,适合做检验用毒;同时该2株毒易感染乳鼠,适应BHK21细胞,对乳鼠毒的半数致死量(LD50)OHM/02株毒在107.0～109.0/0.2mL,AsiaⅠ-KZ/03株毒在107.0～108.5/0.2mL;通过攻毒保护试验证实,病毒的免疫原性良好,制备的细胞毒灭活疫苗均达到3个以上的PD50。通过病毒大规模生产工艺的探索(转瓶培养和悬浮培养)、疫苗佐剂的研究、免疫持续期的监测和安全性等试验,成功研制了口蹄疫病毒O型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗,获农业部新兽药注册证书。  相似文献   

Asial型口蹄疫病毒感染性克隆的建立   总被引：1，自引：1，他引：0  

王海伟  涂亚斌  周国辉  杨德成  张亚科  于力 《中国预防兽医学报》2008,30(12)

  相似文献   

B亚群禽白血病病毒SDAU09C2株的TCID₅₀与p27抗原之间的相关性研究     

李薛  董宣  赵鹏  牛星  崔治中 《中国畜牧兽医》2013,40(2):14-17

为了研究B亚群禽白血病病毒(ALV-B)的半数细胞培养物感染量(TCID₅₀)与p27抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)的S/P值之间的相关性,本试验将ALV-B SDAU09C2 株接种鸡胚成纤维细胞(CEF细胞),换维持液后连续10 d取样,检测10 d的TCID₅₀值与p27抗原的S/P值之间的相关性;同时,将该毒株在DF-1细胞系上传代至20代,取其中的第1、5、10、15和20代分别进行TCID₅₀滴度的测定和p27抗原检测。结果表明,在CEF细胞上接种的ALV-B SDAU09C2株连续10 d的TCID₅₀值与p27抗原之间存在显著的正相关(r=0.94002;P<0.0001);在DF-1细胞系上传的不同代数之间也呈显著正相关(r=0.96449;P=0.0080)。由此可推测ALV-B的TCID₅₀与p27抗原呈显著正相关,可以用ELISA法测得的p27抗原的S/P值来估测病毒的TCID₅₀值。  相似文献   

鸭肝炎病毒A₆₆株部分cDNA文库的构建与序列分析     

赵瑞宏  张小飞  温立斌  潘孝成 《中国畜牧兽医》2007,34(9):84-86

本研究根据已发表的小核糖核酸病毒（picornavirus）核苷酸序列设计4对引物。以RNAiso Reagent试剂抽提含DHV A₆₆鸡胚尿囊液总RNA ，用TakaRa RNA PCR Kit（AMV）Ver3.0试剂盒进行RT-PCR扩增，将所得PCR产物回收并克隆于pMD18-T 载体、转化感受态细菌DH5а，利用氨苄青霉素筛选阳性克隆子, 经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切鉴定重组质粒。取重组阳性质粒进行测序，测序结果与近期GenBank登录的3株Ⅰ型DHV核苷酸序列比对，结果显示与03D株、H株、5886株鸭肝炎病毒的核酸序列同源性分别为96.8%、96.3%、96.2%，表明成功构建了DHV A₆₆ 株部分cDNA文库。  相似文献   

口蹄疫病毒(FMDV)多重RT-PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

葛淑敏  金宁一  尹革芬  郑敏 《中国兽医杂志》2008,44(2):3-5

在大量比较国内外口蹄疫病毒（FMDV）流行毒株序列的基础上自行设计了检测FMDV通用型引物及FMDV AsiaⅠ型、O型口蹄疫病毒不同基因型即：中国型（Cathay）与泛亚株（PanAsia）的多重PCR引物。本试验确定了单项RT-PCR反应条件范围,在此基础上建立、优化了多重RT-PCR反应体系和反应条件,并进行了相关病毒检测试验。结果表明,本试验建立了有效、特异、敏感的检测FMDV AsiaⅠ型及O型FMDV不同基因型中国型与泛亚株的多重RT-PCR检测方法,为口蹄疫的诊断防制、流行病学调查及疫苗的使用奠定了基础。  相似文献   

猪伪狂犬病病毒SA株的分离鉴定及其gE基因缺失株转移载体的构建     

管宇  沈志强  曲光刚  吕素芳  任艳玲  李书光  王玉炯 《中国畜牧兽医》2007,34(6):109-111

  相似文献   

单细胞克隆技术提纯分化的IBRS-2细胞研究     

高林  李乐  廖德芳  朱明旺  李华春 《中国畜牧兽医》2011,38(6):87-90

IBRS-2细胞出现分化变异影响使用,为不影响正常的科学研究,本研究采用单细胞克隆的方法重新提纯,用96孔板经过3周的独立培养后,将具有代表性的4株进行扩增,然后用已知毒价的口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)弱毒分别对其进行接毒试验和TCID₅₀测定。结果表明,B1株克隆细胞的病变最为理想,其TCID₅₀为7.60,比提纯前的4.52更接近实际毒价7.85,且和实际毒价无显著差异。  相似文献   

Titration and Neutralization of Rabies Virus (ERA Strain) Following its Replication in a Pig Fallopian Tube Cell Line   总被引：2，自引：2，他引：0       下载免费PDF全文

A. M. P. Bouillant  H. Tabel    A. S. Greig 《Canadian journal of veterinary research》1974,38(2):118-123

The ERA strain of rabies virus was found to replicate and produce a constant cytopathic effect in a cell line derived from a gilt's Fallopian tube. Titration and neutralization tests were made by a microtest technique in which one TCID₅₀ corresponded approximately to one mouse LD₅₀.  相似文献   

口蹄疫双佐剂灭活疫苗的研究   总被引：1，自引：1，他引：1  

黄炯  刘宏  朱刚  乌斯曼江  王延  徐亚萍  王莉君  朱长动  王学军  贺笋 《中国畜牧兽医》2009,36(1):91-93

在口蹄疫二价灭活疫苗（O型、AsiaⅠ型）常规使用法国SEPPIC公司206佐剂的基础上,设计了一种缓释作用更强的双佐剂成分疫苗。通过MTT法检测淋巴细胞增殖能力、液相阻断ELISA法检测口蹄疫抗体效价及攻毒试验测定PD50来评判该双佐剂疫苗与常规疫苗的效果差异。结果显示,双佐剂疫苗组细胞免疫水平（淋巴细胞刺激指数SI为1.235±0.060）比常规佐剂疫苗组（SI为1.115±0.035）和对照组（SI为1.010±0.045）高,与常规疫苗组相比差异显著（P＜0.05）,与空白对照组相比,差异极显著（P＜0.01）。双佐剂疫苗组O型和AsiaⅠ型抗体与常规佐剂疫苗组相比,全剂量组抗原量较充分,两组抗体水平差距不大;1/3剂量组和1/9剂量组由于抗原量较少和强缓释作用,导致抗体水平明显较低。攻毒保护结果为双佐剂疫苗组略高于常规佐剂疫苗组,前者每头份疫苗AsiaⅠ型为9.0 PD50,O型为11.84 PD50,后者每头份疫苗AsiaⅠ型为9.0 PD50,O型为9.0 PD50。由分析结果可见,双佐剂疫苗可引起较好的细胞免疫应答和缓释作用,达到好的攻毒保护效果。  相似文献   

牛病毒性腹泻病毒JN株的分离鉴定及E2基因的序列分析     

汤中和 《中国畜牧兽医》2013,(5):83-86

本研究从疑似牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)感染牛的分泌物与排泄物中分离鉴定1株牛病毒性腹泻病毒,并进行E2基因序列分析。结果表明,分离株病毒命名为JN株;Reed-Muench法测定分离株病毒TCID₅₀为10^-7.5/0.1 mL;病毒中和试验结果表明,BVDV JN分离株可被BVDV阳性血清特异性中和,而不能被BVDV阴性血清中和;分离株病毒E2基因序列测序结果表明,该分离毒株属于BVDVⅠa亚型。  相似文献   

AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达     

丁银巧  张文杰  张云霞  赵铁柱  孙明  遇秀玲  赵德明  田克恭 《中国畜牧兽医》2009,36(7):63-66

利用杆状病毒表达系统对AsiaⅠ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)VP1基因在Sf9昆虫细胞中进行表达,为研究AsiaⅠ型FMDV VP1蛋白功能及建立AsiaⅠ型FMDV血清学诊断方法奠定基础。采用PCR方法从pGEM-T-Easy-AsiaⅠ型VP1质粒中扩增VP1基因,将其插入杆状病毒转座载体pFastBacHTA,构建的重组质粒pFastBacHTA-VP1再转入DH10Bac感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-VP 1,然后转染Sf9昆虫细胞。PCR鉴定证实VP1基因正确地插入到Bacmid中,成功构建了杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1,SDS-PAGE和Western-blotting检测结果表明,VP1基因在Sf9昆虫细胞中表达出约26.5 ku的VP1蛋白。将可溶性表达的融合蛋白用Ni-NTA亲和层析方法进行纯化,通过ELISA分析,能特异性地检测出AsiaⅠ型口蹄疫病毒阳性血清。AsiaⅠ型FMDV VP1基因在杆状病毒表达系统中的成功表达为AsiaⅠ型FMDV VP1蛋白的抗原性及血清学抗体水平检测研究奠定了基础。  相似文献   

用间接免疫荧光检测方法评价猪瘟兔化弱毒活疫苗效力的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

戴志红  王在时 《中国兽药杂志》2014,48(1):34-37

为用体外试验方法评价猪瘟兔化弱毒活疫苗效力,以猪瘟病毒抗体（兔源）为一抗、荧光素标记羊抗兔IgG 为二抗,建立了CSFV兔化弱毒株的间接免疫荧光检测方法（ IFA）。特异性试验表明,用该IFA方法检测CSFV兔化弱毒株接种的RK细胞为阳性,而检测伪狂犬病毒、猪细小病毒病、牛病毒性腹泻/粘膜病毒接种的RK细胞均为阴性。 CSFV兔化弱毒株和活疫苗的兔体感染量（ RID）用兔体测定,半数组织感染量（ TCID50）用IFA测定,拟合RID与TCID50的线性回归方程,确定1RID/mL＝（ TCID50/0．1mL＋200）/12。  相似文献   

口蹄疫病毒VP2基因重组表达载体的构建及其稳定表达细胞系的建立     

谢金鹿  王洪梅  刘国艺  武建明  刘晓  高运东  于力  仲跻峰  何洪彬 《畜牧兽医学报》2011,42(4)

本试验旨在构建Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)的VP2基因重组表达载体,并建立稳定表达VP2基因的BHK-21细胞系。利用RT-PCR方法扩增Asia 1型FMDV的cDNA,获得VP2基因完整的编码区,构建可表达VP2的带有绿色荧光蛋白标记基因的pIRES2-EGFP-VP2重组表达载体。经鉴定正确后,利用LipofectamineTM2000将重组质粒转染293T细胞,通过Western Blot技术检测VP2蛋白的瞬时表达;然后再转染BHK-21细胞,通过G418筛选,形成单克隆细胞系,经荧光筛选到表达EGFP的抗性单克隆细胞,扩繁培养克隆细胞,再通过West-ern Blot技术检测其VP2的表达,最终筛选到稳定表达FMDVVP2基因的BHK-21细胞系。结果表明,VP2基因重组表达载体pIRES2-EGFP-VP2构建正确,能够在293T细胞内瞬时表达;转染BHK-21细胞,经G418筛选到表达VP2基因的BHK-21细胞克隆,经长达60d的传代,获得了稳定表达VP2基因和EGFP的BHK-21细胞系。上述结果表明,我们建立了稳定表达VP2基因的BHK-21细胞系,为进一步探讨VP2基因在FMD...  相似文献   

Genome analysis and development of infectious cDNA clone of a virulence-attenuated strain of foot-and-mouth disease virus type Asia 1 from China   总被引：1，自引：0，他引：1  

Aiguo Xin  Huachun Li  Le Li  Defang Liao  Yongqin Yang  Nianzu Zhang  Baoshan Chen   《Veterinary microbiology》2009,138(3-4):273-280

The RNA genome sequence of the rabbit passage-attenuated strain of foot-and-mouth disease virus (FMDV) Asia 1, ZB/CHA/58(att), was determined to be 8165 nt in length excluding the poly(C) tract in the 5′ UTR and the poly(A) tail at the 3′ end. ZB/CHA/58(att) was most similar to the vaccine strain Asia 1/YNBS/58 in genome sequence and there were no deletions or insertions within the deduced polyprotein between ZB/CHA/58(att) and YNBS/58, but there were a total of 25 substitutions at the amino acid level and an extra 19-nt stretch in the 5′ UTR was found in ZB/CHA/58(att). An infectious full-length cDNA clone of ZB/CHA/58(att) was developed. Infectious virus could be recovered in BHK-21 cells transfected with the synthetic viral RNA transcribed in vitro. The plaque morphology, growth kinetics and antigenic profile of the infectious clone-derived virus (termed tZB) were indistinguishable from those induced by the parental virus. Furthermore, the virulence properties of ZB/CHA/58(att) and tZB were found to be highly similar in the mouse model. The availability of genome sequence information and infectious cDNA clone of the FMDV ZB/CHA/58(att) lays a new ground for further investigation of FMDV virulence determinants and development of new potent vaccine to FMD.  相似文献   

PCV2a和PCV2b感染性克隆的体外拯救          下载免费PDF全文

柳晓  钟辉  孙玉霞  李谦  邹榕凯  李俊  时建立  丛晓燕  孙文博  杜以军  吴家强  王金宝 《家畜生态学报》2012,33(6):67-71

 研究旨在获得PCV2a和PCV2b的拯救毒株。对筛选得到的PCV2a和PCV2b感染性克隆分别进行酶切,使酶切得到的全长基因组DNA自身环化并分别转染PK15细胞。经IFA和PCR验证,确认成功拯救出两亚型PCV2病毒。病毒传至第9代时对PCV2a和PCV2b的毒价分别进行测定,结果显示PCV2a的毒价为103.5TCID50/mL, PCV2b的毒价为104.6TCID50/mL。本试验为分型特异性序列与病毒致病力相关性的研究打下了基础.  相似文献