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探索浙江省集约化猪场仔猪断奶腹泻(PWD)病原性大肠杆菌血清型和毒力因子特征,为PWD防治及耐药性研究提供资料.从10个规模化猪场以直肠棉拭子采集PWD病料,经细菌分离纯化、革兰氏染色、生化试验和小鼠致病性试验等,对病原进行鉴定.采用11种猪源大肠埃希氏茵常见O型抗原血清、应用K88及F18菌毛单因子血清对分离茵进行玻板凝集试验和PCR方法分析黏附素及肠毒素类型.分离鉴定的56株病原性大肠杆菌O抗原定型了33株,共覆盖了11种血清型,其中O149、O139、O8为优势血清型,共17株,占定型菌株的51.5%;茵毛单因子血清玻板凝集试验和PCR测得病原性大肠杆菌中产肠毒素大肠杆菌(ETEC)比例较高,占病原性大肠杆菌分离总数的67.92%(36/53),肠毒素中含STa、STb、STa+STb、LT和SL-2e分别占总检测菌株数的30.19%(16/53)、35.85%(19/53)、18.9%(10/53)、1.89%(1/53)和9.43%(5/53).黏附素类型主要有K88和F18两种,分别占总检测菌株数的24.53%(13/53)和28.30%(15/53).结果表明,浙江省PWD病原性大肠杆菌至少覆盖了包括优势血清型O149、O139、O8在内的11种血清型;大肠杆菌中以产肠毒素型为主,主要毒力因子包括黏附素F18及K88和肠毒素STa、STb、SLT-2e等. 相似文献
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大肠杆菌K_(88)菌毛抗原的纯化及抗血清制备 总被引：1，自引：0，他引：1
<正> 在引起仔猪腹泻的肠毒性大肠杆菌中,K_(88),K_(99)和987P是三种常见的吸附性菌毛,这些细菌表面纤毛能与肠粘膜上皮细胞表面的特异性受体位点结合,使细菌吸附于肠粘膜表面产生肠毒素,导致仔猪急性严重腹泻、脱水,最后衰竭死亡。K_(88)阳性的肠毒性大肠杆菌不仅是引起仔猪黄痢病最重要的病原之一,而且能引起仔猪水肿病,并能单独或协同轮状病毒导致仔猪白痢的流行。 相似文献
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江扬 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》1986,(4)
引起初生幼畜腹泻的重要病原之一是肠毒素性大肠杆菌(ETEC),它们都具备两类致病因子即粘着素和肠毒素,在ETEC中,迄今已发现的粘着素有K88、K99、987P和F41四种。鉴于ETEC的血清型较复杂,加之粘着素种类的多样性和抗原性的彼比不同,采用淋巴细胞杂交瘤技术,研制纯净、匀质、高效价的抗大肠杆菌粘着素单克隆抗体,并形成诊断试剂盒,已成为大肠杆菌病的快速诊断及流行病学研究的重要手段。继成功地研制出抗大肠杆菌K88单抗之后,最近,我们又用提纯的K99和987P抗原分别免疫BALB/C小鼠,以免疫小鼠 相似文献
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大肠杆菌F41菌株的分离鉴定和F41与K99纤毛抗原的特性观察 总被引：2，自引：0，他引：2
与大肠杆菌致病有关的纤毛抗原最早发现于1961年,到目前从腹泻幼畜的大肠杆菌中已发现有K88,K99、987P和F41等纤毛抗原。各国学者对这一类抗原的理化特性、粘着性和血凝性做了大量研究,具有纤毛的肠毒大肠杆菌的致病作用和免疫防制也有许多报道。 相似文献
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从西藏地区腹泻死亡牦牛中分离出一株肠毒素型大肠杆菌，该菌在形态特征，培养特笥和生化特性方面与大肠杆菌基本一致，血清学试验表明，该菌原O抗原属O148，K88，K99，987P单因子血清均不能凝集本菌，在MSHA反应中，木菌能凝集绵羊、豚鼠、马、鸡的红细胞，而K88、K99、987P抗血清均不能抑制其对绵羊、豚鼠、马、鸡红细胞的凝集，用腔接种对小白鼠具有太原市 致病性，乳鼠胃内投服试验和兔回肠结所试验证明，该菌能产生热稳定肠毒素和热敏性肠毒素，总之，该功得一株不表达K88、K99、987P的、能产生ST和LT的肠毒素型大肠杆菌， 相似文献
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肠毒素型大肠杆菌菌毛的研究进展 总被引：6，自引：0，他引：6
1概述 肠毒素型大肠杆菌(ETEC)是猪的一种重要肠道病原菌,能够引起仔猪黄痢、白痢和猪的水肿病.猪常见致病性大肠杆菌血清型是O8、O9、O20、O60、O138、O139、O157等[1～3 ]并具有相应的菌毛.菌毛是ETEC的一个重要毒力因子,具有粘附于小肠绒毛上皮的作用,使ETEC牢固地定居于小肠粘膜上,从而导致腹泻的发生.菌毛抗原是一种蛋白质,可以用来制成菌苗免疫母猪,使其所产仔猪获得被动免疫,不受大肠杆菌的侵袭[4～6].引起仔猪腹泻的菌毛抗原主要是K88(F4)、K99(F5)、987P(F6)、F41[7].随着对菌毛的深入研究,人们又发现了新的菌毛抗原[8,9]. 相似文献
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从江苏、上海、北京的七个县十一个患有新生仔猪腹泻的猪场分离到的225个大肠杆菌株中,有127个菌株能在0℃下对豚鼠红血球呈现m.r.e.血凝反应。随猪场不同,它们分属于5个O抗原型,用它们的OK血清和新鲜菌液作交叉凝集反应,表明它们都含有一个共同的K抗原。从这些菌株得到的表面m.r.e.血凝素提取物,在琼脂扩散沉淀反应中均能与这些OK血清形成一条共同的沉淀线。在所试的36个标准O抗原菌株中,有三个呈m.r.e反应阳性,凝集反应和琼扩反应也证明它们与上述病原菌株具有一种共同的K抗原和m.r.e.血凝素抗原。其中44752株的自发突变株在失去m.r.e.血凝活性的同时,也不再能与其它菌的OK血清发生交叉凝集反应,表明这种m.r.e.血凝素就是那个共同的K抗原。一系列试验表明,这种m.r.e.血凝素在对培养温度的依赖性、等电点沉淀及水溶性,颗粒大小、血凝性和抗原性等理化和生物学特性方面均与Stirm和φrskov等确定的大肠杆菌表面K_(88)抗原相一致。在体外试验中,这些m.r.e.阳性菌株能吸着于2～3日龄仔猪小肠前段上皮细胞上,表明它们确系K_(88)~ 大肠杆菌。在仔猪结扎肠试验中,它们具有肠道病原性,引起肠扩张,证明它们确系仔猪黄痢的致病菌。从仔猪水肿病、仔猪白痢、羔羊大肠杆菌病及拉痢幼兔分离到的大肠菌株均呈m.r.e.反应阴性。由此表明,对豚鼠红血球的m.r.e.血凝反应在鉴定黄痢致病菌株方面是特异性的。本文证明了,在没有标准K_(88)单因子血清的条件下,用m.r.e.血凝反应从国内流行菌株中筛选和鉴定K_(88)~ 大肠菌株是可行的,并且这种方法简单易行,便于普及应用。用m.r.e血凝反应还可以从己知K_(88)~ 菌株中发现K_(88)抗原方面的变异性。对来自江苏、上海、北京七个县十一个猪场的菌株的研究表明,在我国,大多数猪场的仔猪黄痢都是由K_(88)~ 大肠杆菌引起的。在国内引起黄痢的K_(88)~ 菌株中,至少有4个O抗原类型,其中以O_(60)在江苏、上海一带最常见。O_(60)型乃是国外尚未报道的含K_(88)的O抗原类型。自从φrskov et. al.(1961)在对仔猪有肠病原性的大肠杆菌中发现K_(88)抗原以来,许多学者陆续证明,从不同国家和地区黄痢仔猪分离到的病原性大肠杆菌,虽然可能具有不同的O、K、H抗原结构,但它们中大多数部含有一个共同的表面K_(88)抗原。一系列研究表明,K_(88)抗原是一种仔猪小肠上皮细胞吸着素,它与细菌在小肠前段的定居力有关。根据这些研究,英国一家公司研制了一种实验性疫苗,它是用提取浓缩的K_(88)抗原加到不同大肠杆菌株的混合液中制成的,该苗给妊娠母猪皮下注射后,可通过初乳为仔猪提供被动免疫,显著降低新生仔猪腹泻(即我国的黄痢)的发病率和死亡率。在我国,对K_(88)~ 大肠杆菌在仔猪黄痢的发病中究竟起多大作用,尚没有详细研究。在没有标准K_(88)单因子血清的条件下,本文探索了应用对豚鼠红血球的m.r.e.血凝反应从国内黄痢流行菌株中筛选和鉴定K_(88)~ 大肠杆菌的可能性,并根据它对肠上皮细胞的吸着性、抗原性及K_(88)抗原的一些理化特性进行了鉴定。研究的目的在于寻找一种简单易行的试验方法,以弄清K_(88)~ 大肠杆菌在我国的流行情况,从而为进一步开展黄痢防治的研究创造了必要的条件。 相似文献
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定居在人和新生幼畜小肠的肠致病性大肠杆菌产生的肠毒素(enterotoxin),是引起腹泻的直接原因。肠致病性大肠杆菌产生二种肠毒素,一种是热稳定肠毒素(Heat-stable enterotoxin,简称ST),另一种是热敏肠毒素(Heat-labile enterotoxin,简称LT)。在产肠毒素的菌株中,有的菌株只产ST,有的菌株二种毒素都产。ST分子量小,无抗原性,作用迅速但较短暂;LT是一种大分子的蛋白质,有抗原性,作用较迟但 相似文献
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育成牛K99 F41兼型大肠杆菌的分离鉴定 总被引：1，自引：2，他引：1
从肠毒血症病死的4头育成牛空肠内分离到4株革兰氏阴性细菌,经生化试验、O抗原鉴定、纤毛抗原检查、ST肠毒素测定及动物感染试验证明,分离的4株细菌均为兼有K99和F41两种纤毛抗原的产ST肠毒素的O_(142)血清型致病性大肠埃希氏菌。 相似文献
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仔猪大肠杆菌性腹泻的病原检测与免疫防制 总被引：2，自引：1，他引：1
以江苏姜曲海种猪场的仔猪腹泻病症为研究对象,研究合成了检测肠毒素(ST1、ST2、LT1)、菌毛(K88、K99、987P、F41)以及耶尔森氏菌强毒力岛(high pathogenicity island,HPI)核心基因的特异性引物,用PCR方法对产肠毒素大肠杆菌(enterotoxigenicE.coli,ETEC)和HPI+大肠杆菌进行检测,并对致病性大肠杆菌的免疫防治进行了研究.结果表明:该猪场62.5%的病例存在HPI+大肠杆菌感染,12.5%的病例存在HPI+大肠杆菌及ETEC感染,仅有5%的病例与ETEC感染相关.取分离鉴定的2株大肠杆菌制备灭活抗原,并以氢氧化铝胶为佐剂免疫接种母猪,结果表明,其所产仔猪的腹泻发病率为15.2%,保护率高于仔猪大肠杆菌三价灭活疫苗. 相似文献
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根据产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K99菌毛蛋白的全基因序列设计产肠毒素大肠杆菌主要菌毛K99的一对引物。PCR扩增K99菌毛蛋白的全基因序列大小为546bp。将PCR扩增的目的片断克隆于pMD18-T载体、pET-32a载体中,分别转化大肠杆菌,经酶切鉴定、PCR鉴定及DNA序列分析,筛选出阳性克隆。经过序列比对,所克隆的外源基因与报道的K99菌毛蛋白结构基因序列同源性达99.3%。成功克隆分离到的产肠毒素大肠杆菌菌毛的K99基因,为当地产肠毒素性大肠杆菌病疫苗的选择及基因疫苗的研制提供了坚实的理论基础,为产肠毒素性大肠杆菌病检测、预防及基因工程疫苗的研制开辟新的途径。 相似文献
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用等电点沉淀和葡聚糖凝胶柱层析法从大肠埃希氏菌C83901株(08:K87,K88_(ab))培养物分离和提纯K88_(ab)抗原,并以200ug/只的剂量免疫BALB/c纯系小鼠。第三次免疫后72小时取免疫小鼠脾脏淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP_2/0—Ag14进行融合,得到能分泌抗K88_(ab)特异单克隆抗体的杂交瘤细胞系4个,分别命名为JLZK—1、JLZK—4、JLZK—7和JLZK—10。经多次克隆后,JLZK—7和JLZK—10在体外长期培养仍能稳定地分泌特异单克隆抗体。用JLZK—7和JLZK—10接种经降植烷(Pristane)激化的BALB/c小鼠所产腹水的免疫荧光滴度高达10~4—10~6,直接凝集反应滴度高达10~2—10~4。免疫荧光试验和直接凝集试验表明JLZK—7单克隆抗体能与所试验的含K88_(ab)或K88_(ac)抗原的全部大肠埃希氏菌反应,而不与K88抗原阴性的大肠杆菌和肠杆菌科的其他细菌起反应,是针对K88_(ab)抗原中成分a的型共同的单克隆抗体。另一方面,JLZK—10单克隆抗体只与大肠埃希氏茵中的K88_(ab)阳性菌株起反应,不与K88_(ac)阳性茵株和K88阴性菌株起反应,是针对K88_(ac)抗原中成分b的型特异单克隆抗体。 相似文献
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大肠杆菌不耐热肠毒素A、B亚单位基因双价植物表达载体的构建 总被引：1，自引：0，他引：1
不耐热肠毒素LT是肠产毒性大肠杆菌（Enterotoxigenic E．coli，ETEC）分泌的一种热不稳定性肠毒素，由A、B两种亚单位组成的AB5型杂六聚体蛋白，是目前人们发现的最强有力的粘膜免疫原和粘膜免疫佐剂之一。本研究利用基因工程技术，从强致病菌株K88ac中，分别克隆了LTA和LTB基因，并利用高效植物表达载体pBI121、pBLG和pCAMBIA2300成功构建了带有内质网滞留信号RDEL／KDEL不耐热肠毒素A、B哑单位基因双价植物表达载体pCAMBIA2300-LTA—LTB。为研究LT全毒素在植物中的正确组装及进一步构建带有保护性抗原类全毒素嵌合植物疫苗奠定基础。 相似文献
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将抗大肠埃希氏菌K_(88)粘着素抗原的单克隆抗体(MCA)标记辣根过氧化物酶,建立了一种MCA-ELISA,其对K_(88)阳性菌株的检测限为1×10~4个菌。本法对113株大肠杆菌分离培养物的检查结果与直接凝集试验结果完全符合,两种方法都检出K_(88)阳性菌株 相似文献
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定居在人和幼畜小肠的肠致病性大肠杆菌产生的肠毒素(enterotoxin),是引起腹泻的直接原因。肠致病性大肠菌产生两种肠毒素即热稳定肠毒素(heat-stable enterotoxin,简称ST)和热敏肠毒素(heat-labile enterotoxin,简称LT)。前者在肠道中的作用迅速而短暂,无抗原性;后者作用缓慢但持久,在致腹泻中起着主要的作用,且是一种大分子的蛋白质,具有抗原性,其作用能被其抗血清中和。因此,开展对猪源性肠致病性大肠菌热敏肠毒素的研究,无疑是对开展新生仔猪大肠菌性腹泻防治研究的重要一环。 相似文献
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采用体外细胞黏附模型,研究菠萝蛋白酶对K88+产肠毒素大肠杆菌(ETEC)黏附大鼠小肠黏膜上皮细胞的抑制作用.结果表明:菠萝蛋白酶能显著降低K88+ETEC的黏附率,且与庆大霉素的抑菌效果相当(P>0.05).由此可以推测,菠萝蛋白酶能体外抑制K88+ETEC菌毛黏附上皮细胞,阻止K88+ETEC对肠道的侵袭,为临床提供一定的理论依据. 相似文献
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《江西农业大学学报》2017,(3)
本研究运用肠毒素大肠杆菌K88(E.coli K88)特异的适配体结合纳米金和银增强技术,建立了E.coli K88一种可视化快速检测技术,实现约2 h检测E.coli K88达10 CFU/反应的灵敏度。通过人工模拟E.coli K88污染25 g蔬菜、牛奶或猪肉等食品原料,采用该可视化快速检测技术进行非预增菌直接检测,结果显示检测灵敏度达100 CFU/m L(或g),检测需时约2 h,在1.0×102~1.0×105CFU/m L(或g)的E.coli K88污染浓度范围内,样品A630nm吸光值与目标菌污染浓度对数值呈线性关系,相关系数R20.97以上。研究结果表明,E.coli K88可视化检测方法可用于食品样品E.coli K88污染非预增菌的快速、灵敏检测分析。 相似文献
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用基因工程技术构建的大肠杆菌HB101/pBP52菌株能产生987 P型菌毛,但不产生热稳定肠毒素(ST),用该茵株制备灭活苗,在产前21天免疫18头第一胎怀孕母猪.在分娩后24～48小时内,用产热稳定肠毒素(ST)大肠杆菌987菌株(O9:K103,987P:NM)人工感染所产仔猪102头,88头仔猪在观察期(攻毒后7天)结束时安全无恙,保护率达86.27％.结果表明:用无毒大肠杆菌HB 101/pBP 52菌株制备的灭活苗可以有效地预防987P菌毛型致病性大肠杆菌引起的仔猪黄痢. 相似文献