大肠埃希氏菌F18ab菌毛F亚单位基因的克隆与鉴定     

成大荣  徐建生吕玲 唐波曹军  孙怀昌高崧 《中国兽医科技》2004,34(5):43-46

根据已发表的大肠埃希氏菌F18ab菌毛F亚单位(FedF／ab)的基因(fedF／ab)序列，设计了1对引物，利用PCR技术从大肠埃希氏菌F107／86、YCED1、YCED2、C、D和12F株中分别扩增获得了一段序列，并克隆至pGEM—T载体，获得了重组质粒TF107F、TYCED1F、TYCED2F、TCF、TDF、T12FF。经琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析，6个重组质粒的大小均为903bp，与fedF／ab基因大小一致。其中大肠埃希氏菌F107／86、YCED1、C和12F株的fedF基因序列完全相同；只有YCED2株在第181位碱基处存在1个C→T的无义变异差异，D株在第655位碱基处存在1个T→C变异差异并在氨基酸水平出现1个S→P变异。结果表明，所克隆的序列均为F18ab菌毛F亚单位的基因。  相似文献   

用改进的方法提纯禽脑脊髓炎病毒     

徐建生  唐波  成大荣  董国雄  王小波 《畜牧与兽医》2005,37(12):49-50

将AEV VR株种毒经卵黄囊接种6日龄SPF鸡胚复壮,然后取复壮的病毒作为种毒经卵黄囊接种6日龄SPF鸡胚扩大培养病毒,继续孵化至18日龄,收取病变明显的鸡胚脑组织、胰腺和小肠,充分研磨后经差速离心和CsC l密度梯度离心提纯AEV,取经密度梯度离心后的样品进行电镜观察其纯度,并经脑内接种1日龄SPF雏鸡观察其致病情况及其病理变化,结果证明获得了纯化的AEV。  相似文献   

F18ac菌毛A亚单位基因的克隆与序列分析     

成大荣  徐建生  吕玲  曹军  唐波  孙怀昌 《中国预防兽医学报》2005,27(2):144-147

根据已经发表的F18ab菌毛A亚单位(FedA/ab)的基因(fedA/ab)[1],设计一对引物,利用PCR技术从表达F18ac菌毛的大肠杆菌2134P株[2]、8199株[3]、8813株[3]中分别扩增到一段序列,并克隆至pGEM-T载体,获得重组质粒T2134PA、T8199A、T8813A.琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析表明,该3个序列大小均为516bp,与fedA/ab(513bp)具有较高的同源性,分别为96.3%、96.5%、95.9%,推导的Fed/ac氨基酸序列与FedA/ab同源性分别为93.0%、93.6%、92.4%.数据表明该实验所克隆的序列均为F18ac菌毛A亚单位(FedA/ac)的基因(fedA/ac).  相似文献   

环介导等温扩增技术及其在动物疫病检测中的应用     

胡成  成大荣  余树培  赵方  苏玲玲  蔡树东  顾玲玲  王永娟 《中国动物检疫》2015,32(4):46-50

环介导等温扩增（LAMP）是一门新兴的分子生物学检测技术,因其具有高特异性、高灵敏度、简便快捷、成本低廉等特点,受到越来越多兽医工作者的关注。目前,该方法已经广泛应用于各种病原微生物的检测。本文就环介导等温扩增技术的原理、方法、应用等方面进行简述,最后指出LAMP当前存在的一些不足之处,并对其发展前景进行了展望,以期为其临床应用提供理论依据。  相似文献   

番鸭细小病毒VP3基因的原核表达及多克隆抗体的制备     

吴萌  成大荣  朱善元  吴海涛  左伟勇  王安平 《江苏农业学报》2014,(6)

为获得针对番鸭细小病毒VP3蛋白的多克隆抗体,根据已发表的该病毒基因序列设计一对引物,利用PCR扩增出VP3基因,将其克隆到原核表达载体p ET-32a,转化感受态细胞BL21(DE3)。经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测重组蛋白。将重组蛋白切胶免疫BALB/c小鼠,制备抗番鸭细小病毒部分结构蛋白的多克隆抗体。结果显示成功获得VP3基因,构建的原核表达重组质粒成功表达预期的重组蛋白,免疫小鼠获得的多克隆抗体能与番鸭细小病毒及VP3蛋白反应。表明制备的多克隆抗体可用于MDPV的检测,并为进一步研究MDPV奠定了基础。  相似文献   

鸡大肠杆菌毒力因子的流行病学及药物敏感性分析     

陈晓浪  成大荣  朱善元  孙怀昌 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2010,31(3)

采集江苏省不同地区15个鸡场的疑似大肠杆菌感染病例的病料,通过细菌学分离鉴定,共获得45株大肠杆菌,并确定了O78(53.33%)和O109(28.89%)为优势O抗原型。根据Pap菌毛基因设计1对引物,根据文献报道合成2对引物,分别用于Pap菌毛、F1菌毛以及毒力岛HPI的基因检测;通过对45株大肠杆菌分离株的PCR扩增,确定了7株(15.56%)为F1+大肠杆菌,1株(2.22%)为F1+Pap+大肠杆菌,22株(48.89%)为F1+HPI+大肠杆菌,4株(8.89%)为F1+Pap+HPI+大肠杆菌,5株(11.11%)为HPI+大肠杆菌,未发现Pap+菌株。选用7种临床常用的抗菌药对全部菌株进行药敏试验,结果表明:绝大多菌株对呋喃妥因、头孢唑林、多黏菌素B敏感,对环丙沙星和庆大霉素因菌株差异而异,林可霉素、四环素多不敏感。  相似文献   

大肠杆菌F18菌毛A亚单位基因(fedA)的克隆与序列测定     

芦银华  徐建生  成大荣  董国雄  李俊宝 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2001,22(3):59-61

利用PCR技术 ,分别从产F18ab菌毛的猪水肿病大肠杆菌分离株G及产F18ac菌毛的大肠杆菌 8813株中扩增出 5 10bp左右的F18菌毛A亚单位基因 (fedA)。将这 2个PCR扩增产物按预定阅读框架克隆入pGEX 6p 1载体的谷胱甘肽S 转移酶 (GST)基因的下游 ,筛选获得阳性重组质粒 ,并对质粒中的插入序列进行测定。序列分析表明 :F18ab与F18ac的fedA基因的核苷酸序列同源性为 97.6 % ,推导的氨基酸序列同源性为 94.7% ,两者的主要区别在于F18acfedA基因的第 36 3bp处比F18ab多 3个核苷酸 ,并出现一个新的酶切位点 (NgoMI)  相似文献   

鹧鹕传染性鼻炎的诊治     

成大荣  徐建生等 《中国家禽》2001,23(5):27-27

  相似文献   

断奶仔猪源产Vero细胞毒素大肠杆菌eaeA基因的检测     

成大荣  徐建生  孙怀昌  高崧 《畜牧与兽医》2005,37(8):14-16

根据文献合成了一对引物,利用PCR方法检测了84株来自断奶仔猪水肿病例的产Vero细胞毒素大肠杆菌(VerotoxigenicEscherichiacoli,VTEC)的LEE(locusofenterocyteeffacement)毒力岛的eaeA基因,以了解携带LEE毒力岛的大肠埃希菌在江苏省断奶仔猪群VTEC中的流行状况。结果发现:从其中17株中可扩增到预期的DNA片断,证实它们携带LEE毒力岛,携带率为20.24%。数据分析提示:LEE毒力岛的分布不仅限于EPEC和EHEC,在断奶仔猪源VTEC中也有一定的分布,并可能成为重要的毒力因子。  相似文献   

江苏部分地区羊消化道寄生虫与弓形虫感染情况调查     

蔡为民  高阳  刘丹丹  成大荣  邢华  杨安龙  陈前岭  陶建平 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2019,40(2):70-75

采用饱和盐水漂浮法、尼龙筛兜淘洗法和间接血凝法对江苏扬州、南通、宿迁和连云港地区19个羊场310份粪样和85份血清进行寄生虫检查和弓形虫抗体检测,并分析羊的饲养方式与季节及其月龄与寄生虫感染间的关系,为江苏省羊寄生虫病的防治奠定基础。结果表明:共检出1种绦虫、6种线虫和7种球虫,蠕虫优势种为毛圆科线虫(Trichostrongylidae),球虫优势种为艾丽艾美耳球虫(Eimeria alijeri)。总感染率为90.32%(280/310),其中87.10%(270/310)羊混合感染2种及以上寄生虫。6月龄以上羊的感染率高于6月龄以下羊,风险系数为5.08倍(OR=5.08, 95%CI=1.16～22.19,P=0.020);放养式饲养羊的感染率高于高床圈养方式饲养羊,风险系数达10.61倍(OR=10.61, 95%CI=1.40～72.85,P=0.003);春秋季羊的感染率高于冬季羊,风险系数为2.05倍(OR=2.05, 95%CI=1.00～4.21,P=0.046)。弓形虫的抗体阳性率为0。  相似文献