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1.
应用流行性出血病(EHD)群特异性单克隆抗体(1G9/C9)建立了检测EHD病毒血清抗体的高度敏感和特异的阻断ELISA(B-ELISA),该法能检出所有6种参与试验的EHD血清型高免参考血清中存在的阻断抗体,而不受19种南非和8种澳大利亚蓝舌病病毒(BTV)血清型参考抗血清的影响。与间接ELISA(I-ELISA)相比,EHD B-ELISA检测EHD特异性敏感性更高。同时用BTV和EHD B-ELISA检测试验血清和田间血清的BTV和EHD血清抗体滴度。结果表明:只有B-ELISA对相应的血清群特异性抗体敏感,即便是继发和混和感染另一种病毒亦如此。 相似文献
2.
《中国兽医学报》2020,(6)
为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5和M蛋白滴鼻免疫小鼠后产生的特异性抗体的中和活性,研究以原核表达的重组蛋白GP5和M为抗原分别与霍乱毒素B亚基(CTB)佐剂按10∶1的比例混合制备成CTB黏膜佐剂疫苗,滴鼻免疫小鼠,于首次免疫后0,7,14,21,28,35,42 d收集唾液和血清样品,利用间接ELISA方法分别检测免疫小鼠唾液中特异性抗体IgA,结果均于28 d时S/N值达到最高,ELISA效价均为1∶2;血清中特异性抗体IgG分别于21,28 d时S/N值达到最高,ELISA效价均为1∶800。通过本实验室建立的基于PAM细胞中和试验方法分别检测唾液中特异性抗体IgA和血清中特异性抗体IgG中和滴度均1∶2,结果表明PRRSV GP5和M蛋白滴鼻免疫小鼠后产生的特异性抗体未达到免疫保护作用的中和抗体水平。 相似文献
3.
应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测牛血清中牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)抗体的技术已经得到了发展。我们用ELISA方法检测从无IBR病毒牛群中采集的304份血清,其特异性为100%;检测经鼻内疫苗接种免疫后采集的62份牛血清,其诊断敏感性在免疫后第一个月为27.4%,第六个月为100%,检测标准血清中和抗体滴度≥1:2的303份牛血清,其敏感性为100%;463份随意诊断样品经比较试验证明ELISA检出血清阳性牛(61.6%)比标准血清中和试验(49.9%)要高。因此,我们认为ELISA具有技术上的优越性,可以作为一种常规诊断试验来检测牛血清中IBR病毒抗体。 相似文献
4.
《动物医学进展》1993,(2)
本文建立了单克隆抗体捕捉ELISA法(mAb-ELISA)来检测鸡血清中传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体,并与常规ELISA进行了比较。用上述两种ELISA法和血清中和试验(SN)检测鸡血清,发现SN与mAb-ELISA之间相关率为100％(49/49),而SN与常规ELISA之间的相关率为81.6％(40/49)。在 mAb-ELISA中,所有SN抗体阴性血清的光密度值都很低(<0.05),其光密度值与SN的滴度密切相关。而在常规ELISA中,SN抗体阴性血清出现不同的光密度值,其范围为0.06—0.32。因此,对于IBD阴性鸡血清来说,mAb-ELISA比常规ELISA非特异性反应更低。 相似文献
5.
《畜牧与兽医》2017,(1):80-85
从浙江某规模猪场分别采集不同日龄商品猪口腔液与血清样本,应用实时定量PCR和ELISA方法,分别检测2种体液中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的抗原和抗体水平,并分析其消长规律。结果提示:2种病毒各自的特异性抗体在口腔液和血清中的消长规律基本一致。相比血清,口腔液中的母源抗体存续时间更长(3周),主动免疫后产生特异性抗体的时间则更晚(3周)。口腔液中PRRSV和PCV2的感染动态规律,与血清和口腔液抗体的消长规律也具有很好的相关性,在出现病毒感染高峰后,血清和口腔液特异性抗体转阳,其中血清抗体的转阳反应更为迅速(3周)。本研究为进一步发展猪群口腔液检测系统提供了临床依据。 相似文献
6.
本文叙述了应用抗蓝舌病病毒(BTV)群特异性单克隆抗体(MAb)作间接酶联免疫吸附试验(I—ELISA)和竞争酶联免疫吸附试验(C—ELISA)检测牛羊血清中的BTV抗体,并对从10型BTV感染的3头小牛及4只绵羊,连续采集的血清及干涸于滤纸上的全血洗脱液中检测BTV抗体的结果进行了比较。 相似文献
7.
《中国畜牧兽医文摘》2015,(1)
本文采用猪瘟抗体间接ELISA和阻断ELISA检测试剂盒对320份血清样本进行猪瘟抗体检测,符合率达80.63%,对检测结果不一致的样品,利用抗体中和试验(FVNT)做定性检测,结果表明,间接ELISA试剂盒的敏感性和特异性均高于阻断ELISA试剂盒,猪瘟间接ELISA试剂盒更适用于我国猪瘟抗体检测。 相似文献
8.
《中国预防兽医学报》2016,(2)
为建立犬免疫球蛋白G(Ig G)的检测方法,本研究以兔抗犬Ig G Fc段多克隆抗体为包被抗体,过氧化酶标记的兔抗犬Ig G(全分子)多克隆抗体为检测抗体,建立了双抗体夹心ELISA定量检测方法,并采用Protein A方法从犬血清中纯化犬Ig G作为ELISA检测标准品。该检测方法与小鼠、兔、马、牛、鸡及羊常见动物血清均无交叉反应,特异性好;最低检测下限可以达到4.8 ng/m L,敏感性较高。以本研究建立的ELISA方法检测犬细小阳性血清和阴性血清,阳性血清Ig G含量明显高于阴性血清;检测转染犬源化抗体序列重组质粒的细胞培养液上清,重组质粒在96 h表达量达到峰值。本研究为进一步建立稳定表达犬源化抗体的细胞系提供了特异性的定量检测方法。 相似文献
9.
利用血清中和试验(VN),酶联免疫吸附实验(ELISA)和琼脂扩散沉淀试验(AGP)对IBDV血清Ⅰ型和血清Ⅱ型抗体进行鉴别检测。被检血清来自用活毒攻毒鸡和用灭活油佐剂疫苗免疫鸡,血清Ⅰ型和血清Ⅱ型两者之间抗体的差异用VN试验很容易鉴别检出,但用ELISA方法却不能区分两者之间的差异。AGP试验更不能令人满意。目前用于检测IBDV抗体水平的方法主要有VN、AGP和ELISA等。VN试验不仅可鉴别检测血清Ⅰ型和血清Ⅱ型IBDV抗体,而且可鉴别检测同一血清型内不同毒株的抗体。ELISA也同样用于检测鸡的IBDV抗原和抗体,并被广泛应用于测定大型鸡场IBDV的免疫状态。此报道的主要目的是对比ELISA,AGP试验和VN试验检测IBDV血清Ⅰ型和血清Ⅱ型特异性抗体之间差异的敏感性。 相似文献
10.
以鸽抗鸡劳氏肉瘤病毒(RSV)血清IgG作为包被抗体及酶标抗体的双抗体夹心法Dot-ELISA,检测禽白血病病毒抗原,其特异性及敏感性与澳大利亚ELISA(用兔抗AMV-P_(27)血清IgG作为包被抗体及酶标抗体)相同。可用以检测卵清中禽白血病病毒抗原及用鸡胚或鸡胚细胞生产的各种疫苗中污染的禽白血病病毒抗原。 相似文献
11.
12.
流行性出血病多克隆抗体C-ELISA检测方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
为能简便、快速地进行流行性出血病病毒(epizootic haemorrhagic disease virus,EHDV)抗体监测,采用纯化的6型EHDV抗原包被ELISA板,以豚鼠抗EHDV-2型多克隆抗体作为竞争抗体,建立了检测EHDV群特异性抗体的竞争ELISA(C-ELISA)方法。结果显示:抗原最佳包被浓度为5.12μg·mL-1(1∶10 000),竞争抗体最佳稀释倍数为1∶10 000;通过对各270份阴性和阳性的牛、羊血清检测,确定该检测方法临界值为50%;特异性试验表明该ELISA方法仅能检测出不同血清型EHDV抗体,具有较好的群特异性;对已知抗体效价的阳性血清检测表明,建立的C-ELISA方法敏感性好于血清中和试验(SNT)和琼脂扩散试验(AGID);分别用C-ELISA、SNT、RTPCR和病毒分离试验对监控动物采集的血清和抗凝血样品进行检测,ELISA结果与其他3种方法检测结果对应一致。结果表明本研究建立的C-ELISA为EHDV抗体的检测提供了一种快速、敏感、稳定的方法。 相似文献
13.
禽流感抗体的间接ELISA检测 总被引：3，自引：0，他引：3
本试验建立了AIV抗原,检测AIV抗体的AI-ELISA方法。本试验应用单方阵滴定法确定了酶联免疫吸附试验(ELISA)检测禽流感抗体的最适工作浓度、最适血清稀释倍数,建立了ELISA检测鸭血清抗体的程序,并提出以P/N(Positive/Negidive)确定阳性血清滴度的方法。经小批血清的实验检测表明此方法特异性较好,操作简便,适于大批鸭群抗体水平的检测,并为免疫监测提供了可靠的技术手段。 相似文献
14.
为研制特异性敏感性较好的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体检测方法,更好地实现PRRSV的流行病学监测和诊断,将PRRSV GDr180毒株N蛋白基因序列克隆到p ET32a(+)载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内实现了高效表达,表达形式为可溶性表达,通过Western blot证明表达产物与PRRSV GDr180株阳性血清具有很好的反应原性和特异性。将大肠杆菌表达的N蛋白经过超声、离心、过柱纯化后,作为间接ELISA包被抗原检测血清中的PRRSV抗体,通过对各参数和试剂的优化建立了能检测PRRSV血清抗体的间接ELISA检测方法;对方法的特异性和重复性以及与同类成品试剂盒间的应用效果对比进行了试验。结果表明,研究建立的ELISA抗体检测方法可用于检测猪血清中PRRSV抗体、监测猪繁殖与呼吸综合征的流行情况和评价相关疫苗的免疫效果。 相似文献
15.
建立了检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)IgA抗体的间接ELISA方法,旨在为PEDV感染检测与免疫效果评价提供技术手段。以重组PEDV结构蛋白(S1蛋白)作为包被抗原,采用方阵滴定法确定抗原包被浓度、封闭液、稀释液以及待测血清和酶标抗体的最佳工作浓度,建立了PEDV IgA抗体检测间接ELISA方法。进而检测方法的特异性、批内与批间重复性,评价建立方法与国外试剂盒的符合率,分析ELISA检测血清特异性IgA抗体水平与中和抗体的相关性。结果显示,ELISA方法的最佳抗原包被浓度为1 mg/L,封闭液和抗体稀释液为含5%犊牛血清的PBS,待检血清和酶标抗体的工作浓度分别为1∶40与1∶1 500倍稀释。结果表明,该ELISA能够特异地检测PEDV抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型等病毒的抗血清无交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数低于10%,与现有试剂盒的总符合率为94.8%,血清特异性IgA抗体水平与中和抗体呈正相关(r=0.69,P<0.001)。 相似文献
16.
建立一种快速检测人血清中程序性细胞死亡因子5(PDCD 5)的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,初步研究PDCD 5蛋白在血清中含量变化与疾病的相关性。用抗PDCD 5多克隆抗体包被酶标板,高碘酸钠法标记PDCD 5单克隆抗体作为酶标抗体,以PDCD 5重组蛋白为标准蛋白绘制标准曲线,以特异性、稳定性和灵敏度对ELISA方法进行评价。检测81份癌症患者及21份类风湿性关节炎患者血清,探讨血清PDCD 5蛋白与癌症、免疫缺陷病的相关性。经双扩散试验检测标记后的抗体和酶都具有生物学活性,初步建立了检测人血清PDCD 5蛋白的定量ELISA方法,该方法具有良好的特异性、稳定性,灵敏度达0.5ng/mL。临床检测应用表明,类风湿性关节炎患者血清PDCD 5含量明显高于正常人血清,癌症患者血清PDCD 5蛋白水平明显低于正常人含量(P<0.05),各种癌症患者之间PDCD 5含量差异不显著(P>0.05)。成功建立了一种检测人血清PDCD5的定量ELISA方法,为疾病的诊断提供临床参考。 相似文献
17.
《中国兽医学报》2014,(10):1584-1588
为了进一步提高对猪圆环病毒2型(PCV2)检测的特异性,利用PCV2Cap蛋白及酶标记Cap单克隆抗体,建立了一种检测猪血清中PCV2Cap蛋白抗体的阻断ELISA方法,并将其组装成试剂盒。对阻断ELISA试剂盒进行了敏感性、特异性、重复性、符合率和保存期测定。结果显示,其敏感性高,特异性强,批内批间重复性好,与商品化试剂盒符合率高,保存期长且性质相对稳定。先后制备了5个批次的阻断ELISA试剂盒,用于检测PCV2不同疫苗免疫猪血清、规模猪场PMWS发病猪及同群健康猪血清、不同日龄猪群血清.结果显示,PCV2油佐剂免疫组血清抗体水平相对较高,PWMS发病猪血清抗体水平高于同群健康猪,猪群中育肥猪血清抗体水平最高。 相似文献
18.
旨在建立一种新型可适用于鸭疫里默氏杆菌(RA)病抗体检测的间接ELISA方法。以血清2型RA贵州分离株为研究对象,将其微孔蛋白Proin编码的基因克隆至pET-32a载体,构建重组表达质粒pET-32a-porin,在E.coli BL21(DE3)中使用IPTG诱导后表达。以纯化后的Porin蛋白作为包被抗原,通过一系列条件的优化建立一种检测RA抗体的间接ELISA方法,对其性能进行综合评价。结果显示,该方法具有较好的敏感性、重复性及特异性,阳性血清经1∶6 400稀释后检测结果仍为阳性,批内变异系数(CV)在1.27%～4.90%之间,批间CV在2.59%～5.43%之间,该方法可特异性地检测出抗RA抗体,与禽流感病毒(AIV)H5亚型、AIV H7亚型、新城疫病毒(NDV)、鸭圆环病毒(DuCV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)及E.coli阳性血清均无交叉反应,与商品化ELISA抗体试剂盒检测相比,两者符合率为97.26%。使用建立的ELISA方法对临床采集的801份样品血清开展抗体检测分析(626份为已免疫鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗“血清1型+血清2型”的样品血清,175份为未免... 相似文献
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检测猪脑心肌炎病毒重组非结构蛋白2C间接ELISA方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
以猪脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)重组非结构蛋白2C作为包被抗原,确定间接ELISA反应的最佳工作条件;通过病毒阻断试验和交叉试验检验方法的特异性;通过与血清中和试验比较,确定方法的敏感性;通过对试验感染猪的血清2C抗体产生动态的检测,分析建立方法用于EMCV感染早期诊断的意义。结果显示,建立的间接ELISA方法能够特异地检出EMCV感染猪的血清2C抗体,与猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等的抗血清没有交叉反应;与血清中和试验检测结果的符合率为95.7%(22/23),相对敏感性为90.9%(10/11);仔猪感染EMCV后第4天,应用建立的间接ELISA方法即能够检出血清中的特异性2C抗体。结果表明,建立了可以替代血清中和试验的基于EMCV重组非结构蛋白2C的间接ELISA方法。 相似文献