口蹄疫兔化弱毒疫苗ZB株L蛋白N~2D、M~(143)L和E~(147)G氨基酸突变对病毒毒力影响的研究     

赵国洪  王继华  李华春  何于雯  朱明旺  信爱国 《中国预防兽医学报》2018,(9)

口蹄疫病毒(FMDV)前导蛋白L~(pro)是病毒的毒力因子之一。前期研究发现,FMDV兔化弱毒疫苗ZB株传代减毒致弱后,前导蛋白L~(pro)内仅存在3个氨基酸点突变(N~2D、M~(143)L和E~(147)G)。为确定这3个突变对病毒生物学特性的影响,本研究利用弱毒疫苗ZB株感染性分子克隆为骨架,构建获得含有这3个氨基酸回复突变的重组病毒r ZBatt-L,并比较其与亲本病毒r ZBatt生物学特性。结果显示,r ZBatt-L和r ZBatt在BHK-21细胞中均可以产生细胞病变效应,形成大小相似的噬斑,而在牛原代肾细胞(BK)中均不产生CPE;二者在BHK-21细胞中的生长曲线与病毒RNA复制动态相似(p0.05),对乳鼠的致病性也无显著差异;测定了r ZBatt-L和r ZBatt分别感染BK诱导I型干扰素(IFN-α和β)能力,结果显示r ZBatt-L和r ZBatt均可以在感染早期诱导IFN-α表达,而感染晚期抑制IFN-α表达。相对的是,r ZBatt-L和r ZBatt感染细胞后均可以诱导IFN-β含量增加,并且二者诱导IFN-β含量无差异(p0.05)。结果表明,FMDV弱毒疫苗ZB株L~(pro)蛋白中的N~2D、M~(143)L和E~(147)G突变不改变病毒的生物学特性,对病毒毒力不产生明显的影响。本研究明确了L~(pro)蛋白突变不是ZB株致弱的关键氨基酸位点。  相似文献   

蓝舌病病毒实时荧光定量PCR检测技术的建立及初步应用     

肖雷  姚俊  孟锦昕  李楠  高林  何于雯  李华春  朱建波 《上海畜牧兽医通讯》2014,(5):11-13

<正>蓝舌病最早于1905年发现于南非,主要存在于南纬40°至北纬53°之间的地区,包括美洲、非洲、澳洲以及亚洲。我国自1979年在云南分离到蓝舌病病毒以来,湖北(1983)、安徽(1985)、四川(1988)、山西(1993)、广西(1985)等省份分别报道发现了蓝舌病,此后蓝舌病普查中有29个省(市、地区)发现该病〔1〕。2006~2008年蓝舌病相继出现在荷兰、卢森堡、丹麦、瑞士、捷克以及英国,同年受到感染的  相似文献   

口蹄疫病毒实时定量RT-PCR方法的建立及初步应用     

胡骑  何于雯  信爱国  李华春 《中国预防兽医学报》2014,(3):218-222

  相似文献   

蓝舌病病毒血清9型毒株在我国的首次分离   总被引：1，自引：0，他引：1  

李占鸿  王金萍  杨恒  廖德芳  宋建领  高林  何于雯  李华春 《畜牧兽医学报》2019,(2):354-363

旨在分离流行于我国云南省的蓝舌病病毒(BTV),掌握分离BTV的遗传特征与感染特性。采用"鸡胚—C6/36细胞—BHK-21细胞"接种的方式,采集哨兵牛的BTV阳性血液进行病毒分离;采用血清中和试验以及Segment 2与Segment 6ORF区的克隆测序确定分离病毒的血清型;通过病毒噬斑形成和增殖曲线的测定,分析病毒在BHK-21细胞的增殖特性;通过qRT-PCR与血清中和试验分析BTV感染动物血液中病毒含量与中和抗体动态变化情况。结果显示:2013年8月,在云南芒市设定的哨兵牛中分离出一株BTV(毒株号V013/YN/2013),血清中和试验显示V013/YN/2013为BTV-9型病毒,Segment 2与Segment 6序列分析表明分离的病毒属BTV-9Eastern型,与日本毒株和澳大利亚BTV-9型毒株具有最近的亲缘关系。病毒噬斑与增殖曲线测定结果显示V013/YN/2013在BHK-21细胞上增殖能力明显强于BTV-9型参考毒株。自然感染V013/YN/2013的牛在连续5个月的监控期内未出现临床症状,感染动物虽产生了特异性中和抗体,但血液中始终能持续检测到病毒核酸。本研究首次报道了BTV-9Eastern型毒株V013/YN/2013在我国的分离,为进一步开展中国BTV-9型病毒的全基因组测序、诊断方法的建立、流行病学调查与致病性研究奠定了基础。  相似文献   

广西Tanay病毒粒子形态观察     

李楠  何于雯  孟锦昕  王静林 《云南畜牧兽医》2021,(2):1-2

为了研究广西分离Tanay病毒粒子的形态特征,用2013年从广西马山县采集致倦库蚊标本分离的1株Tanay病毒(GX13M50)接种C6/36细胞进行复壮及培养、固定,采用超薄切片透射电镜对GX13M50病毒粒子进行形态学观察。结果表明:该分离株能够引起C6/36细胞产生明显病变,在接种96 h后,被感染的细胞聚集、折光性变强、脱落;感染细胞的超薄切片电镜观察结果表明,病毒粒子为椭圆形,直径大约50 nm,具有一个短的突起。本研究对Tanay病毒粒子的形态进行了研究,为该病毒的形态学诊断及防控提供依据。  相似文献   

乙基环丙沙星对蓝舌病病毒在BHK-21细胞中的增殖影响研究     

高林  苗海生  肖雷  廖德芳  何于雯  李华春 《上海畜牧兽医通讯》2014,(4):62-63

<正>乙基环丙沙星以其出色的抗菌、抗支原体特性,在细胞培养中的作用正日益凸显,而该药在细胞培养的下游工作,其在病毒扩增中是否会带来副作用,并未见相关的报道。本研究试用蓝舌病病毒1型感染BHK-21细胞来测定乙基环丙沙星对该病毒在细胞中增殖的影响。1材料与方法1.1材料1.1.1材料。BHK-21细胞、蓝舌病病毒1型,来自云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室;乙基环丙沙星,德国Bayer公司产品;血清、MEM培养  相似文献   

蓝舌病病毒BTV-1型的分离鉴定     

肖雷  孟锦昕  李楠  高林  何于雯  杨恒  胡骑  李华春  朱建波 《上海畜牧兽医通讯》2014,(4):5-7

<正>蓝舌病(BT)是由蓝舌病病毒(BTV)通过吸血昆虫-库蠓叮咬传播,感染牛羊等反刍动物的一种非接触性传染病,分布于热带、亚热带和温带地区。主要侵害绵羊,其病症是颊黏膜和胃肠道黏膜严重的卡他性炎症,病羊精神沉郁,食欲丧失,常出现血样下痢,常因蹄冠上皮脱落而跛行,被毛断裂,甚至全部脱落。蓝舌病病毒可经胎盘感染胎儿,引起流产、死胎或胎儿先天性异常,山羊和牛隐性感染,症状不明显,目前国际上的一些流行毒株可导致牛发  相似文献   

云南蓝舌病病毒1型毒株M6基因序列分析     

李楠  朱建波  肖雷  李乐  杨恒  孟锦昕  何于雯  李华春 《中国畜牧兽医》2016,43(2):340-347

为了解云南蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV) 1型M6基因流行株的遗传变异及其与国内外流行病毒的遗传进化关系,试验从细胞培养物中分别提取4株云南分离株BTV-1 (Y863、SZ120169、6-12和7-12) RNA,用M6基因特异引物进行RT-PCR扩增和测序,采用生物信息学软件对获得的M6基因编码区序列进行核苷酸、氨基酸同源性比对及遗传进化分析.结果表明,分别获得4株云南分离株BTV-1 M6基因1 763 bp序列;4株云南分离株BTV-1核苷酸同源性在95.2%~99.9%之间,氨基酸同源性在97.6%~99.8%之间,1979年师宗分离的Y863病毒毒株与2012年师宗(SZ120169)、2013年江城(6-12、7-12)分离的3株病毒毒株核苷酸同源性分别为95.5%、95.2%和95.2%,氨基酸同源性分别为97.6%、98.4%和98.2%,而近两年(2012、2013)分离病毒核苷酸和氨基酸同源性较高,分别在96.9%~99.9%和99.1%~99.8%之间;遗传进化分析发现,4株云南分离株BTV-1为Eastern基因群病毒,它们之间核苷酸和氨基酸同源性分别为95.2%~99.9%和97.6%~99.8%;进一步分析发现4株云南分离株BTV-1与希腊及澳大利亚 BTV-1型毒株亲缘关系较近,核苷酸和氨基酸同源性分别为90.4%~95.6%和95.1%~99.1%,而与地中海国家(意大利、法国、阿尔及利亚、摩洛哥和突尼斯)和南非毒株关系较远,核苷酸和氨基酸同源性分别在83.8%和95.7%以下.4株云南分离株BTV-1属于Eastern基因群病毒,云南分离株BTV-1 M6基因在自然进化中发生遗传变异缓慢,该基因可以用来进行BTV-1基因群分布及毒株的地理区域来源相关的研究.  相似文献   

欧洲蚊媒疾病流行态势与媒介蚊虫控制     

胡骑  王静林  孙强  吴晶  何于雯  李楠 《动物医学进展》2018,(5)

蚊虫是多种疾病的传播媒介,能够传播很多严重危害动物和人类健康的疾病,是重要的医学昆虫。长久以来,依靠蚊子传播的蚊媒疾病广泛流行于热带地区。但近年来,在全球化和全球变暖的大背景下,很多原先已经在欧洲绝迹的蚊媒疾病又开始卷土重来,造成很大的危害。我国的卫生和健康标准远低于欧洲,且我国幅员辽阔,气候多样,更适于蚊子的繁殖和蚊媒疾病的传播。论文通过对近年来欧洲流行的蚊媒疾病进行回顾,为我国蚊媒疾病流行和媒介蚊虫控制方面提供参考。  相似文献   

蓝舌病病毒16型毒株在不同细胞中的增殖特性研究     

何于雯  高林  孟锦昕  李楠  李华春 《上海畜牧兽医通讯》2018,(1):6-8,11

为研究蓝舌病病毒16型毒株在不同细胞中的增殖特性,本实验将BTV-16型毒株接种在BHK-21、Vero、C6/36传代细胞系及山羊肾原代细胞,通过细胞敏感性试验、病毒感染生长曲线以及qRT-PCR方法检测BTV-16型毒株在上述不同细胞中的复制效率和增殖情况。试验结果表明,BTV-16型毒株在BHK-21、Vero、C6/36及山羊肾原代细胞中均能增殖,但产生CPE的时间及病毒滴度有所差异。病毒在BHK-21、Vero细胞上病变较快,山羊肾原代细胞次之,C6/36细胞病变不明显。从病毒滴度和核酸检测结果来看,病毒在BHK-21细胞中的增殖效率与Vero细胞基本一致,并且病毒在这两种细胞中的增殖效率明显高于在山羊肾原代细胞和C6/36细胞。本试验为蓝舌病病毒分离、抗原制备、致病性以及反向遗传学研究提供了细胞学研究基础。  相似文献