7个水稻线粒体tRNATrp突变体的克隆和活力测定     

金晓玲  巩菊芳  乌云塔娜 《湖南农业大学学报(自然科学版)》2006,32(3):256-260

为了研究tRNAs被相应的氨酰酶识别的种属特异性,构建了7个水稻线粒体tRNA^Trp 3个碱基（G73,U72,A68）的单点或多点突变的突变体．突变基因,经体外转录后分别用枯草杆菌（B．subtilis）和人色氨酰tRNA合成酶（TrpRS）进行氨酰化反应,并测定动力学常数．结果表明：与野生型水稻线粒体tRNA^Trp相比,7个突变体的转录产物被B．subtilis TrpRS氨酰化的活力分别下降了53．33％～99．79％;被人TrpRS氨酰化的活力则提高了4～330倍,其中以pMPH7的氨酰化活力改变最大．识别位碱基G73,G1／U72,U5／A68对水稻线粒体tRNA^Trp的种属特异性识别起重要作用．  相似文献   

脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶-1基因敲低人肺癌细胞A549构建及其对线粒体功能影响     

许文亚  李春艳  林子英  王亚红  杨拉维  刘刚 《湛江医学院学报》2017,35(2)

目的 建立脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶-1(APE1)基因敲低人肺癌细胞A549,并初步观察线粒体功能变化.方法 APE1基因shRNA序列与pSIREN-RetroQ慢病毒载体经酶切连接重组体(pSIREN-RetroQ-shAPE1),再与病毒包装质粒共转染293T细胞;收集病毒液并感染A549细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞株A549shAPE1.免疫印迹法检测稳定细胞株中APE1干扰效率.用双氧水处理A549 shCotrol和A549 shAPE1细胞24 h,分析细胞内ATP及活性氧(ROS)变化.结果 经PCR和测序鉴定成功构建重组慢病毒载体pSIREN-RetroQ-sh APE1,免疫印迹法证实A549 shControl和A549 shAPE1稳定细胞株构建成功;双氧水处理后,A549shAPE1细胞中ATP活性明显低于A549shControl细胞(P＜0.05),而ROS明显增加(P＜0.01).结论 APE1干扰可影响肺癌细胞中线粒体功能.  相似文献   

实验用封闭群金黄地鼠mtDNA D-环核苷酸组成与变异分析     

贾晓蕊  宁磊  吴润  景志忠  王川  赵春林 《甘肃农业大学学报》2008,43(5)

对兰州、上海、北京和武汉4个封闭群共98只金黄地鼠线粒体DNA(mtDNA)D-环进行分析.结果表明:实验用封闭群金黄地鼠mtDNA D-环序列中,T、C、A、G碱基含量分别为30.9%2、5.2%、29.5%、14.4%,其中A+T为60.4%、G+C为39.6%,G+C含量明显低于A+T;发现的167个多态位点中,113个转换、52个颠换、2个位点既有转换也有颠换,分别占多态位点数的67.7%、31.1%1、.2%,没有插入/缺失同时出现的位点,表明我国实验用封闭群金黄地鼠个体间多态性丰富,群体间无明显变异.  相似文献   

长白山区中华蜜蜂mtDNA非编码区至COⅡ基因PCR及序列分析     

李志勇  薛运波  赵惠燕 《湖北农业科学》2009,48(5)

为了揭示长白山区中华蜜蜂种型的分子特点,选取其线粒体DNA(mtDNA)非编码区至COⅡ基因段的序列为研究时象,设计并合成了一种理想的用于扩增中华蜜蜂mtDNA非编码区至COⅡ基因段的引物对E2'/H2'.结果可以获得418bp有效的核酸序列;该序列上A+T含量占84.45%,而G+C的含量只有15.55%,序列里长白山区中华蜜蜂与意大利蜜蜂在核苷酸水平上的种间序列相似性为81.71%,并且序列具有丰富的限制性核酸内切酶的酶切位点,其中,52位上的MseI的酶切位点属于长白山区中华蜜蜂的特异酶切位点,53位处出现一个SNP位点,属于由碱基C转换为碱基T的转换型突变,这也进一步证明了蜜蜂mtDNA非编码区是进化速度较快的区域.长白山区中华蜜蜂mtDNA非编码区至COⅡ基因段序列结果已经获得美国国家生物信息(NCBI)网站GenBank的登录号,登录号为FJ494922.  相似文献   

长白山区中华蜜蜂mtDNA非编码区至COⅠ基因PCR及序列分析     

李志勇  薛运波  赵惠燕 《湖北农业科学》2009,48(5)

为了揭示长白山区中华蜜蜂种型的分子特点,选取其线粒体DNA（mtDNA）非编码区至COⅡ基因段的序列为研究对象,设计并合成了一种理想的用于扩增中华蜜蜂mtDNA非编码区至COⅡ基因段的引物对E2’/H2’,结果可以获得418bp有效的核酸序列;该序列上A＋T含量占84.45%,而G＋C的含量只有15.55%,序列里长白山区中华蜜蜂与意大利蜜蜂在核苷酸水平上的种间序列相似性为81.71%,并且序列具有丰富的限制性核酸内切酶的酶切位点,其中,52位上的MseⅠ的酶切位点属于长白山区中华蜜蜂的特异酶切位点,53位处出现一个SNP位点,属于由碱基C转换为碱基T的转换型突变,这也进一步证明了蜜蜂mtDNA非编码区是进化速度较快的区域。长白山区中华蜜蜂mtDNA非编码区至COII基因段序列结果已经获得美国国家生物信息（NCBI）网站GenBank的登录号,登录号为FJ494922。  相似文献   

长白山区中华蜜蜂mtDNA非编码区至COII基因PCR及序列分析     

李志勇  薛运波  赵惠燕 《湖北农业科学》2009,(5)

为了揭示长白山区中华蜜蜂种型的分子特点,选取其线粒体DNA(mtDNA)非编码区至COII基因段的序列为研究对象,设计并合成了一种理想的用于扩增中华蜜蜂mtDNA非编码区至COII基因段的引物对E2’/H2’,结果可以获得418bp有效的核酸序列;该序列上A+T含量占84.45%,而G+C的含量只有15.55%,序列里长白山区中华蜜蜂与意大利蜜蜂在核苷酸水平上的种间序列相似性为81.71%,并且序列具有丰富的限制性核酸内切酶的酶切位点,其中,52位上的MseI的酶切位点属于长白山区中华蜜蜂的特异酶切位点,53位处出现一个SNP位点,属于由碱基C转换为碱基T的转换型突变,这也进一步证明了蜜蜂mtDNA非编码区是进化速度较快的区域。长白山区中华蜜蜂mtDNA非编码区至COII基因段序列结果已经获得美国国家生物信息(NCBI)网站GenBank的登录号,登录号为FJ494922。  相似文献   

山东省地方绵羊品种的mtDNA D-loop序列多态性及系统进化研究     

黄庆华  张果平  王金文  崔绪奎  王建英  王可 《山东农业科学》2012,44(5):5-8

为了进一步了解山东省绵羊起源、群体遗传结构、群体遗传关系,利用线粒体DNA(mtDNA)分析了小尾寒羊、大尾寒羊、洼地绵羊3个地方绵羊品种(群体)的遗传多样性和起源进化。通过PCR和测序技术测定了3个绵羊群体82个个体的线粒体D-loop 1182 bp全序列,采用DnaSP 5.0进行多态性分析,并利用MEGA 5.05的邻接法(NJ)构建系统发育树。结果显示,3个绵羊群体mtDNA D-loop碱基组成:A、T、G、C平均含量分别为32.88%、29.33%1、8.28%、19.50%,A+T含量明显高于G+C含量;碱基突变以转换为主,说明绵羊线粒体碱基替换存在转换偏倚现象。mtDNA D-loop区的核苷酸多样度分别为0.03240、0.02455和0.03172;单倍型多样度分别为0.9710、.728和0.932,表明小尾寒羊和洼地绵羊mtDNA D-loop区具有较高的多态性,遗传资源相当丰富,大尾寒羊相对较低,需要加强资源保护。构建的NJ系统发育树表明3,个绵羊品种内、品种间存在基因交流,品种间存在共同的起源。  相似文献   

基于线粒体DNA控制区（mtDNA Dloop）序列分析瓢鸡的遗传多样性   总被引：3，自引：0，他引：3  

贡潘偏抽  刘丽仙  李大林  袁跃云  孙利民  杨润  刘文瑜  刘伟  苗永旺 《云南农业大学学报(自然科学版)》2011,26(2):211-214

 采用PCR产物直接测序技术对云南省镇沅县50只瓢鸡样品的线粒体DNA控制区（mtDNA D loop）第Ⅰ高变区序列进行了分析。结果表明：在所分析的Dloop区序列中（520bp）,T,C,A,G平均含量分别为30.4%,29.6%,27.4%,12.6%;共检测到27个核苷酸多态位点,其中24个为转换,3个为颠换,序列突变率为5.19 %;序列存在13种单倍型,单倍型多样度(H)为0.883±0.028,核苷酸多样度(π值) 为0.01503±0.00099,表明瓢鸡群体内遗传变异较丰富。瓢鸡样品可划分为A,B,E,F,G等5个世系,在NJ无根系统树上聚为5大枝,揭示瓢鸡在遗传组成上具有5个母系血统来源。  相似文献   

基于线粒体控制区部分序列的大青鲨种群遗传结构研究     

郑真真  许强华  戴小杰  朱江峰 《大连海洋大学学报》2014,(5)

基于线粒体DNA ( mtDNA)控制区部分序列对采集自太平洋、大西洋、印度洋的5个大青鲨Prion-ace glauca群体165尾成鱼样本进行遗传多样性与遗传结构分析。结果表明：165尾大青鲨的mtDNA控制区片段长为694 bp,共得到110个变异位点,定义了145个单倍型,碱基组成中A为33.46%, T为36.40%, C为18.61%, G为11.53%, G+C含量为30.14%;单倍型多样性指数( Hd )在各个采样点都较高,平均值为0.9973±0.0014,核苷酸多样性指数(π)为0.01510±0.00091,这表明大青鲨群体的遗传多样性水平很高,遗传资源丰富;分子方差分析表明,99.28%的遗传变异出现在种群内,0.72%的遗传变异来自于种群间;采用邻接法构建的系统发育树表明,5个群体间未形成显著的遗传结构,群体间的高基因交流值( Nm )和低遗传分化指数( Fst )揭示了三大洋的大青鲨群体间基因交流频繁,不存在显著的遗传分化。  相似文献   

中国大鸨东方亚种群体间遗传关系分析   总被引：2，自引：1，他引：1  

孔有琴  张微微  李枫  白素英  徐艳春  田秀华 《东北林业大学学报》2008,36(11)

在中国境内松辽平原西北部的大鸨繁殖地、呼伦贝尔高原西南部的大鸨繁殖地及山东黄河三角洲地区,采集了大鸨东方亚种(Otis tarda dybowskii)18个个体,对线粒体DNA控制区Ⅱ的部分序列进行了测定和遗传关系分析.研究结果显示:18只大鸨mtDNA控制区301 bp序列的突变只有转换和颠换;核苷酸多态性为0.001 11±0.000 52;松辽种群与呼伦贝尔种群间有共享单倍型,两繁殖地存在遗传交流;山东种群与松辽种群、呼伦贝尔种群都有共享单倍型.根据研究结果,建议:应将松辽种群与呼伦贝尔种群作为一个保护单元进行保护;重视越冬地的保护;繁殖地与越冬地之间的迁徙通道和中途停留地,也应纳入大鸨的保护规划.  相似文献   

ROS-generating mitochondrial DNA mutations can regulate tumor cell metastasis     

Ishikawa K  Takenaga K  Akimoto M  Koshikawa N  Yamaguchi A  Imanishi H  Nakada K  Honma Y  Hayashi J 《Science (New York, N.Y.)》2008,320(5876):661-664

Mutations in mitochondrial DNA (mtDNA) occur at high frequency in human tumors, but whether these mutations alter tumor cell behavior has been unclear. We used cytoplasmic hybrid (cybrid) technology to replace the endogenous mtDNA in a mouse tumor cell line that was poorly metastatic with mtDNA from a cell line that was highly metastatic, and vice versa. Using assays of metastasis in mice, we found that the recipient tumor cells acquired the metastatic potential of the transferred mtDNA. The mtDNA conferring high metastatic potential contained G13997A and 13885insC mutations in the gene encoding NADH (reduced form of nicotinamide adenine dinucleotide) dehydrogenase subunit 6 (ND6). These mutations produced a deficiency in respiratory complex I activity and were associated with overproduction of reactive oxygen species (ROS). Pretreatment of the highly metastatic tumor cells with ROS scavengers suppressed their metastatic potential in mice. These results indicate that mtDNA mutations can contribute to tumor progression by enhancing the metastatic potential of tumor cells.  相似文献   

A G protein mutant that inhibits thrombin and purinergic receptor activation of phospholipase A2   总被引：7，自引：0，他引：7  

S K Gupta  E Diez  L E Heasley  S Osawa  G L Johnson 《Science (New York, N.Y.)》1990,249(4969):662-666

The stimulation of phospholipase A2 by thrombin and type 2 (P2)-purinergic receptor agonists in Chinese hamster ovary cells is mediated by the G protein Gi. To delineate alpha chain regulatory regions responsible for control of phospholipase A2, chimeric cDNAs were constructed in which different lengths of the alpha subunit of Gs (alpha s) were replaced with the corresponding sequence of the Gi alpha subunit (alpha i2). When a carboxyl-terminal chimera alpha s-i(38), which has the last 38 amino acids of alpha s substituted with the last 36 residues of alpha i2, was expressed in Chinese hamster ovary cells, the receptor-stimulated phospholipase A2 activity was inhibited, although the chimera could still activate adenylyl cyclase. Thus, alpha s-i(38) is an active alpha s, but also a dominant negative alpha i molecule, indicating that the last 36 amino acids of alpha i2 are a critical domain for G protein regulation of phospholipase A2 activity.  相似文献   

矮杆大穗高产小麦育种亲本SW3243重要农艺性状特性及育种应用效果（摘要）     

杨恩年  李俊  杨武云  邹裕春 《农业科学与技术》2011,12(2):283-286

[目的]研究小麦亲本材料SW3243（组合为1426/4/IR68-77/YAA//ALD‘S’/3/YAZ//ST2022/983）的育种利用价值。[方法]对SW3243的选育、农艺特性、部分品质相关遗传性状、1BL/1RS易位系及育种的应用情况进行了分析。[结果]SW3243具有如下特点：SW3243高抗条中29、30,对抗性基因不具有抑制作用;具有矮杆、多花、大穗、高产、迟播早熟等显著特点;SW3243的高分子量谷蛋白亚基（HMW-GS）组成为1,7＋8,2＋12,含有232bp片段的PPO等位基因,Waxy蛋白亚基没有缺失,籽粒含有少量迟熟α-淀粉酶;SW3243含1BL/1RS易位系,但与供试易位系具有明显不同;利用SW3243的优良农艺特性育成了一批高产新品系,其中有42个衍生系参加了国家和四川省区试,育成国家、省级审定小麦新品种10个（次）;SW3243及其衍生品种已累计推广433万hm2以上。[结论]麦材料SW3243具有优良的农艺性状,是四川小麦育种的重要亲本,研究结果将为小麦种质资源创新和高产育种提供信息参考。  相似文献   

鸡线粒体ND1基因变异/异质性及其与性状的关联分析     

徐媛媛  侯玲灵  姬杰菲  王焕杰  李思露  陈文  康相涛  黄艳群 《中国农业科学》2019,52(16):2880-2890

【目的】探究鸡线粒体ND1基因的异质性,并在此基础上进行线粒体异质性在不同品种间和固始鸡资源群中的分布研究及其对重要经济性状的效应分析。【方法】选用固始鸡、卢氏鸡、来航鸡、白洛克鸡、白羽丝毛乌骨鸡、藏鸡、肉鸡以及河南斗鸡8种各具特色鸡种的血样DNA,利用PCR-RFLP技术进行mt.A4589G变异/异质性在自然群体的分布研究。此外,利用实验室先前构建的固始鸡资源群的血样DNA,通过PCR-RFLP技术进行mt.A4589G变异/异质性在固始鸡资源群的分布研究及其与固始鸡资源群F₂代性状的关联分析,包括腹脂、腿肌率、盲肠长度等屠体性状指标,胫长、胸深、体斜长等生长性状指标,肌纤维直径、肌肉pH、剪切力等肉质性状指标以及葡萄糖、淀粉酶、甘油三酯等血液生化指标,进而掌握鸡线粒体ND1基因异质性及其潜在效应。【结果】（1）在8个鸡品种中,从线粒体ND1基因全长检测到一个同义突变mt.A4589G,其分布具有明显的品种特性：外来品种如肉鸡、白洛克和白来航鸡的优势等位基因为A,而国内地方品种如丝羽乌骨鸡、河南斗鸡、卢氏鸡、固始鸡和藏鸡均为G;（2）通过PCR-RFLP检测到mt.A4589G在不同品种以及固始鸡资源群中皆存在异质性。在8个不同品种中,仅从固始鸡、河南斗鸡和肉鸡中检测到5个AG异质性个体,异质性发生的频率为0.063,表明mt.A4589G异质性的分布具有一定的品种特性。而在固始鸡资源群中,mt.A4589G存在较不同品种间更为广泛的异质性,在F₀、F₁和F₂代的异质性发生频率分别为0.81、0.41和0.70,表明mt.A4589G异质性具有普遍性;（3）mt.A4589G异质性与固始鸡资源群F₂代性状的关联分析表明,mt.A4589G异质性对腹脂、皮脂厚度、8周胫长、腿肌纤维直径、葡萄糖和乳酸脱氢酶等的影响都达到差异显著水平(P<0.05);（4）mt.A4589G不同的异质性等级与固始鸡资源群F₂代性状的关联分析表明,mt.A4589G异质性等级除与腹脂、腹脂率和腿肌率等屠体性状显著相关（P<0.05）外,还与生长性状（8周胫长等）、血清生化指标（葡萄糖等）均产生显著的关联（P<0.05）。【结论】mt.A4589G是一个异质性变异,其异质性的分布具有明显的品种特性,在自然群体的异质性发生频率较低,而mt.A4589G在固始鸡资源群中存在广泛的异质性。通过mt.A4589G异质性及其不同异质性等级与固始鸡资源群F₂代性状的关联分析发现,mt.A4589G变异/异质性与鸡的腹脂、血液中葡萄糖水平等性状均产生了显著的关联（P<0.05）。  相似文献   

Method for Isolating Mitochondrial DNA from Etiolated Tissue of Cabbage     

Wang Shuai  Wang Chao  Zhang Xiao-xuan 《东北农业大学学报(英文版)》2014,21(3):23-29

Isolation of high-quality mitochondrial DNA（mtDNA） is an important premise for researching molecular mechanisms in cytoplasmic male sterility of cabbage（Brassica oleracea L.var.capitata）. An efficient protocol for separation and purification of mitochondria and extraction of mitochondrial DNA（mtDNA） from etiolated tissues of cabbage was developed. We took a method combined mannitol density gradient with differential centrifugation, selected appropriate rotational speed, extended DNase I treating time and changed mitochondria cracking condition. The results showed that the extracted mitochondria in this protocol had complete structure, appeared to ellipsoid and had not been contaminated with other impurities under the Jannus Green B staining. The isolated mitochondrial DNA had high purity and yield through detecting the optical density, nuclear specific primer PCR and agarose gel electrophoresis. The results indicated that mitochondrial DNA extracted by this protocol had high quality and enabled to be used in futher genetic studies.  相似文献   

人α干扰素转基因小鼠模型的建立     

李维纳  衣帅  刘烨  扈荣良  袁宝  任文陟  刘殿峰 《安徽农业科学》2011,(13):7857-7859

[目的]建立人α干扰素（interferon-α,IFN-α）转基因小鼠,为研究IFN-α在抗病毒中的作用提供模型动物。[方法]将人IFN-α基因插入CMV启动子下游,构建转基因表达载体,通过原核显微注射法建立IFN-α转基因小鼠。[结果]通过特异性引物PCR法和South-ern杂交法检测出4只阳性转基因小鼠。分离4个转基因鼠系F1代PCR阳性小鼠血液中的淋巴细胞进行RT-PCR检测,其中3个鼠系为阳性。收集阳性小鼠血清,用ELISA方法和微量板染色测定法检测出3个转基因鼠系均有IFN-α表达。[结论]成功建立了CMV启动子启动的表达人IFN-α基因转基因小鼠,为研究干扰素抗病毒机制及对其他动物进行抗病毒感染基因工程育种研究奠定了基础。  相似文献   

贵州麻羊mtDNA Cytb基因遗传多样性分析     

黄勤华  刘若余  吴芸  王兴群 《山地农业生物学报》2008,27(5)

对贵州麻羊13个个体线粒体DNA细胞色素b基因全序列进行直接测序比对。结果表明,山羊线粒体细胞色素b基因全长为1140bp,T、C、A和G碱基的平均含量分别为26．8％、28．2％、31．9％和13．1％,碱基组成的百分比中显示出G的相对缺乏,A＋T含量（58．7％）比G＋C（41．3％）含量高;总共发现6个变异位点,分别为174、576、594、721、852、1068;观察到3种单倍型;构建了16个山羊个体的N-J树,显示贵州黔北麻羊存在2个母系起源。  相似文献   

线粒体研究现状及其在热带作物中的应用前景     

陈洋洋  谢宇超 《安徽农业科学》2010,38(26):14272-14274,14294

线粒体普遍存在于高等动、植物和真菌等真核细胞中。其在人类遗传疾病的发生、发展、功能修复以及起源和进化中具有重要的功能。在植物中,与雄性不育、细胞程序死亡、果实成熟、衰老以及光合作用等多种生理功能有关。综述了线粒体基因组在人体疾病的发生、诊断、DNA突变等方面的最新研究进展,并展望了线粒体研究在热带作物生长发育和果实成熟、衰老、贮藏等方面的应用前景。  相似文献   

Functional delivery of a cytosolic tRNA into mutant mitochondria of human cells     

Mahata B  Mukherjee S  Mishra S  Bandyopadhyay A  Adhya S 《Science (New York, N.Y.)》2006,314(5798):471-474

Many maternally inherited and incurable neuromyopathies are caused by mutations in mitochondrial (mt) transfer RNA (tRNA) genes. Kinetoplastid protozoa, including Leishmania, have evolved specialized systems for importing nucleus-encoded tRNAs into mitochondria. We found that the Leishmania RNA import complex (RIC) could enter human cells by a caveolin-1-dependent pathway, where it induced import of endogenous cytosolic tRNAs, including tRNA(Lys), and restored mitochondrial function in a cybrid harboring a mutant mt tRNA(Lys) (MT-TK) gene. The use of protein complexes to modulate mitochondrial function may help in the management of such genetic disorders.  相似文献   

适合于基因组测序的红麻高纯度线粒体DNA提取   总被引：1，自引：0，他引：1  

赵杨  陈鹏  周瑞阳 《东北农业大学学报》2011,42(4):98-101

采用红麻黄化苗为试材,结合密度梯度离心和差速离心的方法提取线粒体DNA(mtDNA)以满足测序要求.结果表明,蔗糖密度梯度离心法比Percoll密度梯度离心法更适合于红麻线粒体的分离.分离后的线粒体经DNaseI消化核DNA,并采用Jannus绿检测线粒体的完整性,SDS和蛋白酶K裂解线粒体,并用酚/氯仿抽提除去蛋白,...  相似文献