预防兽医学分子生物学技术发展概况   总被引：6，自引：2，他引：4  

景志忠  才学鹏  陈娟 《动物医学进展》2002,23(4):10-14

概括介绍了分子生物学理论、技术的发展，重点从病原学、免疫学和疫病预防与控制学三方面阐述了分子生物学在预防兽医学中的应用、发展及其贡献。同时，阐明了预防兽医学对分子生物学的贡献和促进作用。  相似文献   

CpG ODN增强猪囊尾蚴病疫苗免疫反应的试验研究   总被引：5，自引：1，他引：5  

景志忠  王佩雅  蒙学莲  窦永喜  陈涓  骆学农  方学鹏 《中国兽医科技》2004,34(2):3-6

依据CpG基序的生物学和免疫学特性，人工设计合成了硫代修饰的多种CpG ODN序列，通过兔、小鼠和猪体进行了与铝胶、206佐剂和蜂胶佐剂的配伍和比较试验，用ELISA法测定加单一佐剂或联合佐剂组疫苗诱导的抗猪囊尾蚴病的抗体含量(IgG或IgG2a)和效价，用MTT淋巴细胞转化试验法测定刺激指数，进一步证实了CpG基序的种类、数量和空间结构以及与其他佐剂联合对疫苗免疫反应的影响，CpG基序以1个TpC的5’端开始，紧接着3个GTCGTT基序，基序与基序之间由TpT或T分隔，在兔、小鼠和猪都能诱导机体产生强烈的免疫反应特别是细胞免疫反应。  相似文献   

藏獒犬IFNγ基因的克隆表达及其生物学活性测定     

宋世斌  陈国华  胡永浩  贾怀杰  何小兵  景志忠  仝保全 《畜牧兽医杂志》2018,(5)

通过RT-PCR技术从刺激的藏獒犬外周血淋巴细胞中成功克隆IFNγ全基因,其大小为501bp,编码167个氨基酸,前23个AA为信号肽,与GenBank上发表的犬IFNγ((NM001003174.1)比较,序列的同源性为99.4%。构建了原核表达载体pET-30a-IFNγ,转化BL2L,IPTG诱导后表达约23Kd的重组蛋白,经镍琼脂糖凝胶层析柱纯化后,纯度达90%以上;利用抑制病毒噬斑法测定重组藏獒犬γ干扰素的生物学活性,结果显示纯化的蛋白具有一定的抗病毒活性,本研究结果为进一步研究犬γ干扰素的抗病毒活性奠定基础。  相似文献   

鼠痘病毒EVM135和EVM085蛋白免疫原性及抗体中和活性的鉴定     

高真贞  蒙泽菁  何小兵  房永祥  田慧慧  陈国华  景志忠 《畜牧兽医学报》2023,(6):2468-2477

正痘病毒属病毒的A33和H3L蛋白是其成员共有的中和抗体的两个主要靶标。为检测鼠痘病毒(ectromelia virus, ECTV)A33和H3L蛋白同源物的免疫原性及抗体中和活性，以ECTV-Moscow株基因组DNA为模板，PCR扩增A33和H3L同源基因EVM135、EVM085目的序列，分别构建pET30a-EVM135、pET30-EVM085原核表达载体，转化Rosetta感受态细胞，IPTG诱导表达，利用镍层析柱纯化并进行逐步透析复性，免疫兔制备多克隆抗体。建立间接ELISA方法测定其抗体效价分别达1∶120 000和1∶360 000,Western blot和IFA证实该多克隆抗体具有良好的特异性和反应性；ECTV病毒中和试验表明抗EVM135多克隆抗体中和效价为1∶16,而抗EVM085多克隆抗体效价为1∶128。本研究通过高效表达EVM135和EVM085蛋白，并分析其免疫原性及抗体中和活性，为深入研究痘病毒致病和免疫机理，进而快速建立其诊断方法，为猴痘防控技术措施的研究奠定基础。  相似文献   

猪细胞因子cDNA表达文库的构建及其基因的克隆鉴定     

夏小慧  景志忠  王勤  窦永喜 《畜牧兽医学报》2006,37(4):352-355

为克隆和研究猪细胞因子及相关基因,应用建库试剂盒成功构建了猪细胞因子cDNA表达文库。采取健康猪外周血及淋巴结,分离单个核细胞,经LPS PHA联合刺激不同时间后,提取总RNA。将各组样品混合,分离纯化mRNA。反转录合成cDNA第一链和第二链,与EcoRI和HindⅢ接头连接。酶切和过柱分级分离后,与λScreen载体连接,经体外包装转染E.coliER1647宿主菌,进行文库容量测定和扩增。以扩增文库的DNA为模板,利用已知基因引物克隆猪IL-2和IL-4的cDNA并进行测序。结果表明,成功构建了猪细胞因子cDNA文库,文库原始库容量为8×105,插入片段在300~2 000 bp,扩增得到特定的IL-2和IL-4基因,说明文库质量高、代表性强,为进一步从文库中筛选未知细胞因子及相关基因提供了有效的工具。  相似文献   

柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA表达文库的构建     

林青  才学鹏  窦永喜  翟军军  闫鸿斌  张彦明  田广孚  景志忠 《畜牧兽医学报》2007,38(9):999-1002

在无RNase污染的环境下,提取柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)子孢子RNA,进而纯化mRNA,采用Oligo(dT)引物反转录合成cDNA第一链和第二链,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoRⅠ/HindⅢ黏性末端的λSCREEN载体的两臂之间。用Phage Maker extract对以上连接产物进行体外包装,形成完整的噬菌体,并用该噬菌体转染大肠杆菌ER1647,进行文库容量测定和扩增。以扩增文库的DNA为模板,利用已知基因引物克隆E. tenella3-1E基因,并进行测序。结果表明,成功构建了E. tenella孢子化卵囊子孢子的cDNA文库,文库原始库容量约为4×106pfu/mL,插入片段约100~3000 bp,扩增得到特定的E. tenella3-1E基因,说明文库质量高、代表性强,为进一步从文库中筛选相关基因提供了有效的工具。  相似文献   

斯氏艾美耳球虫的致病性及病理学研究     

孟庆玲  才学鹏  田广孚  乔军  景志忠  严鸿斌 《中国预防兽医学报》2007,29(10):788-790

用纯种斯氏艾美耳球虫孢子化卵囊人工感染25只断奶幼兔,进行致病性和病理学研究。试验兔分为1个不感染对照组和4个感染组,各感染组每只幼兔分别口服感染2.0×103、1.0×104、5.0×104、2.5×105个孢子化卵囊。与对照组相比,接种2.0×103个和1.0×104个孢子化卵囊的两个感染组的平均病变记分、肝重指数、血清转氨酶活性有显著差异(P<0.05);接种5.0×104个和2.5×105个孢子化卵囊的两个感染组上述指标有极显著差异(P<0.01)。表明斯氏艾美耳球虫对幼兔具有很强的致病性,能导致严重的肝球虫病。  相似文献   

检测绵羊源爱知病毒D型荧光RT-PCR方法的建立和应用     

阿比克哈莫  余忠华  杨晨  景志忠  汤承 《畜牧兽医学报》2022,53(5):1632-1637

绵羊源爱知病毒D型(ovine Aichivirus D)是在国内绵羊中新发现的病毒,本研究根据绵羊源Aichivirus D 3D基因序列设计检测引物,通过反应体系和条件优化,成功建立了检测绵羊源Aichivirus D的TB Green染料法荧光RT-PCR方法,该方法特异性和稳定性良好,灵敏度高。对2020年4月―2021年5月采集自四川6个场253份绵羊粪便样本(健康羊的133份,腹泻羊的120份)进行检测,结果该病毒的平均检出率为8.7％,场阳性率为66.7％。其中,腹泻粪便样本中绵羊源Aichivirus D阳性率(17.5%)显著高于非腹泻粪便样本中绵羊源Aichivirus D阳性率(0.75%,P<0.001)。表明绵羊源Aichivirus D可能是引起以上地区绵羊腹泻的病原。从绵羊源Aichivirus D的阳性样本中成功克隆出大小为1 422 bp的13个完整的绵羊源Aichivirus D 3D基因,其核苷酸相似性为99.4％～100.0％。遗传演化分析发现这13株绵羊源Aichivirus D 3D基因与本实验室前期研究上传的绵羊源Aichivirus D 3D基因共同聚为单独的一个大支。本研究为绵羊源Aichivirus D的分子检测提供了一种新的方法和基础流行病学数据。  相似文献   

可控制开放系统下培育清洁级小鼠的研究     

景志忠  张永兴  高世杰  李辛堂  宁磊  屠文俊  张自强  王自强 《中国兽医杂志》2002,38(5):10-11

普及清洁级实验动物已是摆在实验动物科技工作者面前的首要任务 ,据即将颁布的国家《实验动物质量控制标准》,将普通级小鼠使用范围局限于教学实习 ,而其他相关的试验研究均需清洁级以上小鼠。为了适应新的形势需要 ,同时结合西北地区实验动物发展的水平和实际情况 ,本项研究力  相似文献   

猪带绦虫不同发育阶段的cDNA合成及含量测定     

景志忠  才学鹏  窦永喜  王佩雅  宗瑞谦  骆学农  陈涓  王春民 《动物医学进展》2002,23(6):73-76

本文以猪带绦虫成熟虫卵、孵化激活的六钩蚴以及人工感染的囊尾蚴为原始材料，采用Promega试剂盒法分别分离提取总RNA和mRNA，反转录合成cDNA，并用a-^32P CTP掺入法放射测定其含量。实验表明：合成的猪带绦虫虫卵、六钩蚴和囊尾蚴的cDNA含量高，均可达2500ng，片段大小在300bp以上，可满足构建不同发育阶段cDNA基因文库的需要。  相似文献