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为研究龙胆草水提取物、龙胆草总黄酮、龙胆草总苷体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的作用，本试验建立Marc-145细胞模型，在研究其对Marc-145细胞最大安全浓度的基础上，结合细胞病变形态观察和MTT法，设立药物组、利巴韦林阳性对照组、病毒对照组和细胞对照组，对病毒进行阻断、抑制和直接灭活3种作用方式的测定。结果显示，龙胆草水提取物、龙胆草总黄酮、龙胆草总苷和利巴韦林的最大安全浓度分别为6.250、0.020、0.630和0.016 mg/mL。在体外抗PRRSV作用的试验中，龙胆草水提取物对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为43.1%、57.4%和56.4%，均低于阳性对照利巴韦林，且各作用方式下细胞均发生了明显病变。龙胆草总黄酮对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为66.1%、41.1%和42.7%，其抑制作用和直接灭活作用的抑制率均低于阳性对照利巴韦林，阻断作用下细胞轻微病变。龙胆草总苷对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为33.4%、78.2%和81.9%，其抑制和直接灭活作用较强，远高于阳性对照利巴韦林，且在这两种作用方式下细胞基本保持单层完好。综合3种作用方式，3种龙胆草提取物中龙胆草总苷抗PRRSV的效果最好，其次是龙胆草水提取物和龙胆草总黄酮。 相似文献
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《中国兽医杂志》2018,(11)
为了在感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的Marc-145细胞模型上,探讨人参皂苷Rb1(Ginsenoside Rb1, GSR1)抑制PRRSV能力及其作用机制。采用MTT法测定GSR1在Marc-145细胞上的最大安全浓度(Maximum no-cytotoxic concentration, MNTC)和半数毒性浓度(50%Cytotoxic concentration, CC_(50))。建立PRRSV感染Marc-145细胞模型,设计阻断PRRSV复制和直接杀灭PRRSV试验,确定GSR1体外抗PRRSV的作用方式;利用FQ-PCR检测GSR1对病毒N基因的影响,间接免疫荧光试验(Indirect immunofluorescence assay,IFA)和Western Blot技术测定GSR1对PRRSVN蛋白表达的影响。结果表明,GSR1在直接杀灭PRRSV试验中最高抑制率为54.65%,在阻断PRRSV复制试验中前12 h起抗病毒作用,且最高抑制率达60.01%,推测GSR1主要通过直接使病毒灭活或干扰病毒的早中期复制来发挥其抗病毒作用。此外,在设定12～72 h试验时间内,阳性药物利巴韦林组,4 mg/mL、2 mg/mL GSR1组PRRSV N基因拷贝数显著低于病毒组(P0.05)。在对N蛋白含量影响试验中4 mg/mL GSR1和阳性药物可以减少N蛋白载量。表明GSR1可以通过抑制病毒N蛋白的表达来抑制病毒的复制,并可作为抗PRRSV的候选药物或先导物。 相似文献
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为探讨黄芩苷体外抗传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染鸡胚成纤维细胞系(DF1)作用机制,以DF1细胞为宿主细胞,利巴韦林为阳性对照药物,从黄芩苷对IBDV的直接灭活作用、阻滞作用、抑制吸附、穿入及其复制5个方面探讨黄芩苷抗IBDV机理。结果显示,黄芩苷的CC50为(206.48±12.74)mg/L,EC50为(46.76±3.15)mg/L,选择指数SI为4.415,在无毒质量浓度范围内其对IBDV的最高抑制率为72.02%;在阻滞试验和复制抑制试验中最高抑制率分别达到60.85%和68.11%;在病毒吸附、穿入抑制和直接灭活试验中抑制率很低,表明黄芩苷不能阻断IBDV对DF1细胞的吸附、穿入和直接灭活。结果表明,黄芩苷在体外可有效抑制IBDV对DF1细胞的感染,其抗病毒机制可能是干扰病毒的复制和阻滞,提示黄芩苷可作为预防及治疗传染性法氏囊病病毒的药物。 相似文献
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本试验以Marc-145细胞为模型,采用细胞病变(CPE)抑制试验和MTT法测定细胞活力,观察苦参碱(matrine)体外抗猪繁殖呼吸与综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)活性,并从抑制病毒复制、阻断吸附和直接杀灭3个方面探讨苦参碱体外抑制PRRSV的作用机制.结果显示,苦参碱CC50＞1 500 mg/L,最大安全浓度为750 mg/L,EC50为(443.5±33.4)mg/L,SI≥3.38,在安全浓度范围内对PRRSV感染Marc-145细胞的抑制率达到93.6％;在直接杀灭和复制抑制试验中最高抑制率分别达到105.10％和91.53％;在病毒吸附抑制试验中抑制率＜20％,表明苦参碱不能阻断PRRSV对Marc-145细胞的吸附.结果表明,苦参碱在体外可有效抑制PRRSV对Marc-145细胞的感染,其抗病毒机制可能是干扰病毒的复制或/和直接杀灭病毒,提示苦参碱可作为研发预防及治疗猪蓝耳病的药物或先导化合物. 相似文献
6.
利用细胞病变(CPE)抑制试验和MTT法,通过抗病毒试验来评价甘草酸二钾对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Marc-145细胞的保护效果,并通过复制抑制、吸附抑制和直接杀灭3个试验探讨了甘草酸二钾体外抑制PRRSV的作用方式.结果表明,在安全浓度范围内,甘草酸二钾能够显著抑制CPE的产生(抑制率≥100％).在直接杀灭和复制抑制试验中均表现出较高的抑制率,但在吸附试验中却没有阻断病毒对细胞的吸附,初步推测甘草酸二钾可干扰PRRSV的复制或可直接将其灭活,或两种作用同时存在.说明在体外试验中甘草酸二钾具有良好抗PRRSV活性,可以作为潜在的抗病毒试剂供进一步研究使用. 相似文献
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板蓝根、黄芪等中药活性提取物对猪繁殖与呼吸综合征病毒体外作用的研究 总被引：8，自引：0，他引：8
本试验利用Marc-145细胞体外培养系统，通过观察细胞病变效应（CPE）来评价板蓝根、黄芪等中药活性提取物成分体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）对细胞的感染作用，并通过改变加药方式（先加药物后接种病毒、先接种病毒后加药物、病毒和药物感作后同时加入），初步探讨中药活性提取物的抗病毒机制。结果表明。在安全浓度范围内，板蓝根水提物体外对PRRSV具有显著的直接杀灭作用；连翘、黄芪水提物和黄芪多糖体外对PRRSV均具有明显的阻断和抑制作用，为筛选抗PRRSV中药制剂提供了理论依据。 相似文献
8.
《中国动物传染病学报》2018,(6)
为了研究中药野大黄(中药提取物)含药血清体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒活性,探讨其抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用机理。取"野大黄"药液,生药含量为2 g/mL,对照药物利巴韦林终浓度为0.025 g/mL,分别灌胃给药,饲喂SD大鼠,制备各组含药血清。采用MTT法和细胞形态观察法相结合,测定含药血清对Marc-145细胞的最大无毒稀释度。将含药血清倍比稀释至1∶4、1∶8、1∶16三种浓度,采用三种加药方式,以细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)观察与MTT染色检测OD492值,计算含药血清病毒抑制率为评价指标,观察野大黄含药血清体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒活性。结果显示,野大黄含药血清体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒活性最显著的是含药血清与病毒混合后加入方式,在1∶4稀释度时,野大黄含药血清组与利巴韦林对照含药血清组OD492均值差异显著(P0.05),两者对猪繁殖与呼吸综合征病毒抑制率分别为83.51%、73.07%,相差约10%。野大黄含药血清组三种稀释度镜检观察Marc-145细胞均无CPE出现,细胞单层完好,而利巴韦林对照含药血清在1∶16稀释度时病毒抑制率为63.55%,且出现CPE,细胞单层遭到破坏、部分细胞变圆、脱落。结果表明,野大黄含药血清体外具有显著的抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒活性,以同时给药时具有直接杀灭猪繁殖与呼吸综合征病毒作用,有望作为抗猪繁殖与呼吸综合征病毒药物进行开发。 相似文献
9.
将板蓝根、甘草和鱼腥草3种单味中药各含量为100mg/mL的中药粗提物作连续倍比稀释后,采用CPE和MTT法将其在Marc-145细胞上进行最大安全质量浓度和对细胞增殖的影响试验,同时采用体外细胞培养的方法在Marc-145细胞上进行抗猪繁殖与呼吸综合征病毒突变株(PRRSV PX株)作用试验。结果显示,3种中药粗提物最大安全作用质量浓度板蓝根和甘草均为3.125g/L、鱼腥草为1.563g/L;板蓝根、甘草、鱼腥草分别在3.125～0.049、3.125～0.195、1.563～0.391g/L时测得细胞D值大于细胞对照组,对细胞分裂增殖均有促进效果,最佳作用质量浓度均为1.563g/L;3种中药粗提物有不同程度的抗PRRSV PX株作用,板蓝根和甘草粗提物阻断、抑制PRRSV PX株感染及直接灭活PRRSV PX株效果最好的质量浓度;阻断为3.125、3.125g/L、抑制为1.563、0.391g/L:阻断、直接灭活为0.782、0.782g/L,鱼腥草粗提物在0.782g/L时阻断和抑制PRRSV PX株效果为好,但其对PRRSV PX株基本没有直接灭活作用。 相似文献
10.
为体外筛选具有抗猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）的中药单体，本研究选择4味有效的中药单体成分，以Marc-145细胞为靶细胞，从阻断吸附、抑制复制和直接杀灭3个层面进行抗PRRSV研究，以CPE、病毒滴度评价药物抗PRRSV的效果。结果显示，绿原酸和连翘苷可明显抑制PRRSV在细胞内的复制|适当浓度的奎宁酸、绿原酸和连翘苷对PRRSV有较好的直接杀灭效果。综合阻断吸附、抑制复制和直接杀灭效果，绿原酸和连翘苷是理想的抗PRRSV中药单体药物。本研究为猪繁殖与呼吸障碍综合征防控提供了试验依据。
[关键词]猪繁殖与呼吸综合征|中药单体|抗病毒|病毒复制 相似文献
11.
鸡传染性法氏囊超强毒株(vvIBDV)可引起鸡群高死亡率及严重的免疫系统损伤,给养禽业带来巨大的经济损失。为探讨泰山松花粉多糖(TPPPS)体外抗vvIBDV感染鸡胚成纤维细胞(DF-1)作用机制,以DF-1细胞为宿主细胞,利巴韦林(Ribavirin)为抑病毒对照药物,从TPPPS对病毒的直接灭活作用、阻滞作用、抑制吸附及其复制4个方面探讨TPPPS抗vvIBDV机理。结果显示,在无毒质量浓度范围内TPPPS对vvIBDV的最高抑制率为92.4%,Ribavirin的最高抑制率仅为76.7%;在阻滞试验和抑病毒吸附试验中最高抑制率分别达到91.85%和78.36%;在抑制病毒复制试验和直接灭活病毒试验中抑制率很低,表明TPPPS不能抑制病毒复制和直接灭活病毒。结果表明,TPPPS在体外可有效抑制vvIBDV对DF-1细胞的感染,推测其抗病毒机制是TPPPS预处理DF-1细胞从而结合了病毒颗粒在细胞表面的吸附位点及病毒与多糖直接相互作用抑制病毒吸附细胞,或两种作用同时存在。提示TPPPS可作为预防及治疗超强鸡传染性法氏囊病病毒感染的药物。 相似文献
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为研究板蓝根、黄芪和青蒿及其提取物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的作用,本试验在研究板蓝根、黄芪和青蒿及其提取物对Marc-145细胞最大安全浓度的基础上,研究3种中药提取物体外抗PRRSV的作用。结果显示,板蓝根多糖、黄芪多糖和青蒿素3种中药提取物对Marc-145细胞安全浓度分别为为0.03、0.03和0.06 mg/mL,板蓝根、黄芪和青蒿3种中药单方的安全浓度分别为6.25、6.25和3.13 mg/mL。在体外抗PRRSV作用的试验中,3种中药单方中黄芪的阻断作用最强,能达到100%的保护率,中药提取物中板蓝根多糖对PRRSV的阻断作用最强,在浓度为0.031 mg/mL时对细胞保护率能达到48.03%,青蒿素最差,在0.16 mg/mL时就已不具有阻断作用。板蓝根多糖对病毒不具有直接杀灭作用,黄芪多糖和青蒿素在浓度为0.32 mg/mL时,保护率都是20%左右;黄芪的直接杀灭作用保护率为100%,且非常稳定,青蒿在浓度较高时还有促进细胞生长的作用,但稳定性差,随浓度降低其保护率迅速下降。在对病毒的抑制作用试验中,3种中药提取物的作用相当,浓度为0.01 mg/mL时,板蓝根多糖、黄芪多糖和青蒿素多糖对细胞的保护率分别为24.57%、24.30%和26.20%;而3种中药单方的细胞保护率都能达到100%甚至以上。综合3种作用方式可知,3种中药提取物中,黄芪多糖的抗PRRSV作用最好,青蒿素次之,板蓝根多糖最差;3种中药单方中黄芪的效果最好,青蒿最差。因此,可知黄芪及其提取物具有非常强的抗PRRSV作用,可对其进行进一步研究,以供临床上使用。 相似文献
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《中国兽医学报》2017,(4)
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是严重危害养猪业的传染病之一,也是重点防控的疾病之一。人参多糖(ginseng polysaccharides complex,GPS)具有抗病毒及增强免疫的作用。为了寻找有效预防和治疗PPRS的药物,本试验以Marc-145细胞为模型,采用细胞病变抑制试验和MTT法测定细胞活力,观察GPS在体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的作用,并通过改变药物作用方式初步探讨GPS的抗病毒机制。试验分为6组,分别为50,100,200和400 mg/L GPS组、病毒对照组及正常细胞对照组。在GPS对PRRSV感染Marc-145细胞的阻断和抑制作用中,各质量浓度GPS均显著提高感染PRRSV后Marc-145细胞的存活率(P<0.05),GPS处理组Marc-145细胞中的PRRSV量均显著低于病毒对照组(P<0.05)。而且,GPS可以促进Marc-145细胞中IL-6和IFN-γ的mRNA表达,也能增强细胞上清中IL-6和IFN-γ的活性。本试验研究表明GPS在体外可有效阻断或抑制PRRSV对Marc-145细胞的感染,提示GPS可作为预防和治疗PRRS的候选药物。 相似文献
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为了探究1株枯草芽孢杆菌复合诱变前后产生的表面活性素(surfactin,原始菌株YUAN.0和复合诱变菌株FHYB201030产生的表面活性素分别为YUAN.0S和FHYB201030S)对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)及猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)的作用,试验采用CCK-8试剂盒检测YUAN.0S和FHYB201030S对非洲绿猴肾(Vero)细胞及猴胚胎肾上皮(Marc-145)细胞的毒性,同时分析了不同质量浓度表面活性素对PEDV和PRRSV的直接灭活作用、吸附阻断作用及复制阻断作用。结果表明：YUAN.0S对Vero及Marc-145细胞的最大无毒性质量浓度均为7.81 mg/L,而FHYB201030S的最大无毒性质量浓度均提高至62.50 mg/L。YUAN.0S对PEDV和PRRSV基本上没有抑制作用,而FHYB201030S对PEDV和PRRSV有一定的直接灭活作用,FHYB201030S质量... 相似文献
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《中国家禽》2017,(1)
探讨黄芩苷体外抗马立克氏病病毒(MDV)作用,应用细胞病变观察法(CPE)观察MDV对鸡胚成纤维细胞(CEF)的影响,采用Reed-Muench法计算MDV细胞半数感染量(TCID50),以CEF为宿主细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法从黄芩苷对MDV的增殖抑制、感染阻断以及直接灭活3个给药途径探讨黄芩苷抗MDV作用。结果显示:MDV对CEF的TCID50为10-4.5/0.1 m L;3种给药途径下,黄芩苷浓度在312.5~78.13μg/m L范围都具有较好的抗MDV感染作用,并且感染阻断途径下黄芩苷浓度为312.5~156.25μg/m L时能够促进细胞的生长,直接灭活途径下黄芩苷浓度为312.5μg/m L时能够促进细胞的生长。其中感染阻断与直接灭活途径给药比增值抑制途径给药的抗MDV感染作用效果要好,直接杀灭途径给药时的病毒抑制率最高。 相似文献
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为探讨诃子、矮紫堇、甘青乌头3种藏药的体外抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)作用效果,利用细胞培养技术,对BVDV进行增殖并检测TCID50;通过CPE观察和CCK8检测相结合的方法测定3种藏药和利巴韦林的最大药物安全浓度和药物半数中毒浓度(CC50);采用先加药后加病毒、先加病毒后加药、药和病毒预先作用的3种不同加药方式进行体外抗病毒抑制试验,计算不同作用方式下抗病毒有效率、药物半数有效浓度(EC50)和治疗指数(TI),进一步明确各个药物对BVDV的抑制作用。结果表明,经Reed-Muench氏法计算出病毒的TCID50为10-4.67·0.1mL~(-1);诃子、矮紫堇、甘青乌头和利巴韦林的最大安全浓度分别为1mg·mL~(-1)、1mg·mL~(-1)、8mg·mL~(-1)和2μg·mL~(-1);3种藏药及利巴韦林在药物和病毒预先作用方式下的最大有效抑制率均高于50%,其中矮紫堇浓度为1mg·mL~(-1)时,有效抑制率可达到72.86%,抑制效果极显著高于利巴韦林(P0.01);在先加药后加病毒、先加病毒后加药两种作用方式下的最大有效抑制率均小于30%,药物的吸附阻断作用和复制阻断作用并不明显。综上所述,3种藏药对BVDV均有一定的直接杀灭作用。其中,矮紫堇直接杀灭效果最佳且优于利巴韦林,有望被进一步开发成抗病毒药物。 相似文献
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甘草酸体外抗PRRSV的作用机制 总被引：1，自引：0，他引：1
为了研究甘草酸体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Marc-145细胞的作用及机制,本试验确定了甘草酸的抗PRRSV作用,并通过检测甘草酸对病毒的吸附侵入、核酸复制等环节对病毒的结构蛋白、非结构蛋白以及宿主细胞受体和IFN-α表达的影响确定甘草酸体外抗PRRSV的作用机制。结果显示,甘草酸阻断PRRSV感染时减少了GP4的表达,并降低CD163和CD151的表达;抑制PRRSV吸附时抑制了PRRSV GP4和细胞CD163的表达;抑制PRRSV侵入时抑制了GP4的表达,并显著提升细胞CD163和CD151的表达;抑制增殖的作用机制是抑制细胞内PRRSV nsp9和nsp10的表达,前期抑制病毒引起的TLR3表达升高的趋势,后期促进TLR3的表达;中后期降低、末期促进IFN-α的表达。结果表明,甘草酸能通过调节PRRSV的蛋白、宿主细胞受体和细胞因子的表达来抑制PRRSV体外感染Marc-145细胞。 相似文献
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猪蓝耳病毒等在感染的猪的精液中可检测到相关病毒,能过精液导致疫病爆发已有报道,筛选在体外精液中抗病毒药物组方意义重大.应用细胞培养和病毒滴度试验,比对筛选不同类型抗病毒中药、化药及组合配方抗猪精液中蓝耳病病毒（PRRSV）的作用效果.结果表明黄芩、利巴韦林、银黄与利巴韦林组合制剂3种配方具有抗猪精液中蓝耳病病毒（PRRSV）的作用,其中银黄和利巴韦林组合配方对蓝耳病病毒（PRRSV）抑制率达到78％,抗猪精液中蓝耳病病毒（PRRSV）效果显著.为人工授精和冷冻精液制贮备中预防疫病发生提供了基础. 相似文献