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1.
以绵羊红血球免疫鸡,获得富含IgM的鸡血清。以提纯鸡血清IgM免疫BALB/C小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP 2/0骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA方法进行筛选,共获得7株稳定分泌特异性抗鸡IgM杂交瘤细胞)TM18、TM21、TM25、TM34、TM57、TM62、TM65)。杂交瘤培养上清的ELISA效价为10~3～10~5,腹水型单克隆抗体的ELISA效价为10~5～10~7。7株单抗中TM57、TM65为小鼠IgM类,其余5株均为小鼠IgG_1亚类。间接ELISA和夹心ELISA试验表明,所有7株单抗只与鸡IgM反应,而不与鸡IgG和鸡IgA反应。7株单抗均能抑制鸡IgM对其特异抗原绵羊红血球的血凝作用。血凝抑制价为1∶2~3～2~7,7株单抗中只有TM65能在琼脂扩散试验中与鸡IgM出现沉淀线. 相似文献
2.
为制备抗流产嗜性衣原体MIP蛋白单克隆抗体,以纯化的重组MIP蛋白为抗原,免疫Balb/c小鼠后经细胞融合,间接ELISA法筛选阳性细胞克隆并进行有限稀释克隆化,建立了两株分泌抗MIP蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,将其分别命名为M1,M2。间接ELISA测杂交瘤细胞上清抗体效价为1∶1600、相对亲和力为10μg/m L;Western blot鉴定两株单克隆抗体能特异识别MIP重组蛋白;细胞核型实验鉴定单抗符合杂交瘤细胞的特性;单克隆抗体亚类检测试剂盒鉴定两株单抗免疫球蛋白类型均为Ig G1,轻链为κ链;体外中和试验表明,两株单抗均能有效阻断感染。抗MIP单克隆抗体的成功制备将为建立诊断、治疗方法及MIP蛋白的进一步研究奠定基础。 相似文献
3.
抗水牛伊氏锥虫变异表面糖蛋白抗原单克隆抗体的研制 总被引：1，自引：0，他引：1
用纯化的伊氏锥虫变异表面糖蛋白（variant surface glucoprotein, VSG）免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经过3次克隆和间接ELISA方法筛选,获得3D7、5B9 2株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用间接ELISA方法检测杂交瘤细胞培养液上清效价和小鼠腹水效价,其中细胞培养上清效价分别为1∶6400和1∶12800,腹水效价分别为1∶105和1∶106。单抗的亚型鉴定结果表明,3D7、5B9分泌的抗体都为IgG1亚类κ链。 相似文献
4.
采用纯化的本地毛形线虫49KuES重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株制备腹水。获得两株稳定分泌抗重组蛋白McAb的杂交瘤细胞株D5和C1。试剂盒鉴定两株McAb均属IgM亚类,其轻链均为K链;间接ELISA检测细胞培养液上清和腹水效价,结果显示,两株细胞培养液上清均达到1∶1.28×10~3,腹水效价均达到1∶1.28×10~4;Westetrn blot结果表明,获得的两株McAb均能特异性的识别约49Ku处的ES抗原;间接ELISA结果显示两株McAb与日本血吸虫成虫、猪囊尾蚴囊液、猪蛔虫、猪鞭虫抗原均无交叉反应,表明两株McAb特异性良好。 相似文献
5.
以纯化的PPV重组VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术,间接ELISA筛选和3次以上细胞克隆,获得了5株稳定分泌抗PPV VP2蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为2D5、1F11、2B4、3C8、1 H3。其染色体平均数均为87～102条,分泌抗体亚类4株为Ig M类,1株为IgG类,Western blot检测表明,5株单抗均识别猪细小病毒VP2蛋白;间接免疫荧光鉴定表明,5株单抗均与PPV全病毒发生反应;间接ELISA鉴定与其他相关病毒的交叉反应性表明,制备的5株单抗不与TEGV、PRV和PEDV反应,表明所制备的抗体与猪细小病毒具有较强的特异性反应。 相似文献
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《畜牧与兽医》2018,(12)
为了制备H5N6亚型禽流感病毒(AIV)的单克隆抗体(MAb),采用纯化的H5N6 AIV免疫BALB/c鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA方法进行筛选,获得2株能稳定分泌抗NP蛋白的杂交瘤细胞,分别命名为3D9和2B10。间接ELISA检测2株杂交瘤细胞培养上清液抗体效价分别为1∶1×10~3和1∶1×10~4,腹水的抗体效价分别达到1∶1×10~5和1∶1×10~6; 3D9和2B10亚类鉴定重链为IgM,轻链为κ链; Western blot分析表明,2株杂交瘤细胞上清均能与不同的AIV感染的尿囊液在56 kD处发生特异性反应,并能与原核表达的重组NP蛋白发生特异性反应;间接免疫荧光试验显示,2株单克隆抗体均能与不同的AIV感染的MDCK细胞产生特异性反应。以上结果表明,本研究针对H5N6 AIV的NP蛋白制备了2株单克隆抗体,且都具有较好的特异性、保守性和广谱性,为今后禽流感诊断方法的开发奠定了基础。 相似文献
8.
《畜牧与兽医》2020,(10)
为制备针对犬细小病毒(CPV)的单克隆抗体,以纯化的CPV免疫BALB/c小鼠,3次免疫后,取其脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合。利用超速离心纯化的病毒作为包被抗原,采用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,获得3株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1D9、3G9和4F6。单克隆抗体细胞培养上清效价为1∶64、1∶64、1∶128,腹水效价为1∶10~4、1∶10~4、1∶10~5。3株杂交瘤细胞的染色体数分别为92、94、98。亚类鉴定结果显示1D9和3G9重链为IgG1,4F6重链为IgG2b,轻链均为kappa链。病毒中和试验表明,单克隆抗体4F6对CPV具有明显的病毒中和活性。交叉试验表明,3株单克隆抗体均可与CPV特异性结合,与其他犬类常见病毒无交叉反应。本研究制备的单克隆抗体为CPV的检测及其感染动物的治疗提供了物质基础。 相似文献
9.
分别用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和纯化的重组N蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体(McAb)。用纯化的PRRSV免疫小鼠,经细胞融合获得2株可分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为4B8、4D8。用重组N蛋白免疫的小鼠,经细胞融合获得3株可分泌特异性McAb的抗PRRSV N蛋白的杂交瘤细胞2F3、4D5、5D11。间接ELISA检测4D8、4B8、4D5和5D11杂交瘤上清效价为1∶32~1∶512,而2F3的腹水效价为1∶12 800。单抗2F3、4B8和4D8与纯化病毒的Western blotting反应都为阳性,而4D5和5D11为阴性。IFA检测结果5株单抗都有明显的荧光,与PRRSV呈阳性反应。2F3的Ig亚型为IgM。5株单抗杂交瘤细胞连续传代至20代,分泌相应McAb的效价基本一致。本研究为PRRSV生物学诊断和方法研究提供有用工具。 相似文献
10.
为进一步建立克伦特罗(CL)残留检测方法,给制备CL残留检测试剂盒打下基础,进行了CL单克隆抗体(McAb)的制备研究。以重氮反应,将CL与牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵清白蛋白(OVA)偶联,分别制备免疫原和检测原,并通过杂交瘤技术,获得了5株能稳定分泌特异结合CL小分子的单克隆抗体杂交瘤细胞株(1E9A9、2A9C1、3F2E9、6G2E9、6E10D9)。这5株细胞株经过体外传代培养和冻存复苏后均能稳定分泌抗体。用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)测定的这5株细胞上清液抗体效价分别为1:1.28×10~5、1:5.12×10~5、1:1.28×10~5、1:5.12×10~5、1:2.56×10~5;选用3F2E9、6E10D9细胞株,制备CL单克隆抗体腹水并纯化,其纯化后的腹水抗体效价分别为1:1.28×10~5、1:2.56×10~5,BCA(2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠)方法检测的浓度分别为1.60 mg/mL、1.54 mg/mL;最终通过斑点ELISA(Dot-ELISA)方法测定CL抗原与这2株抗体有较强的结合力。在上述方法的制备及验证下,成功获得了特异性较高的CL单克隆抗体,为进一步研制CL残留检测试剂盒奠定了基础。 相似文献
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抗氯霉素单克隆抗体的制备与鉴定 总被引：6，自引：0，他引：6
本文用人工合成的氯霉素 -牛血清白蛋白 (CAP- BSA)免疫 BAL B/ C小鼠 ,通过杂交瘤技术建立了 2株分泌抗氯霉素的单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 1D1 0 和 5 E6 。经间接酶联免疫吸附试验 (ci EL ISA)检测细胞培养上清效价为 1∶ 5 12 ,诱生腹水的效价可达 1× 10 8。两株单克隆抗体的亚型为 Ig G1 ,杂交瘤染色体数目为 84～ 96条。该细胞株体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定。ci EL ISA检测显示其与常见抗生素及结构类似物的交叉反应小 ,其灵敏度为 0 .1ng/ ml,IC50 为 2 .38ng/ m l,这表明该单抗具有较大的应用价值 相似文献
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WANG Yan WANG Xin-wei CHEN Lu ZHAO Jun YANG Xia WANG Shan WANG Chuan-qing Di LiBaiEr · AmuDi 《畜牧兽医学报》2012,43(2)
研制抗羊种布鲁菌脂多糖抗原的单克隆抗体,并应用其建立检测布病的双夹心ELISA方法.本研究采用热酚水法提纯羊种布鲁菌(16M菌株)的脂多糖抗原,并经SDS-PAGE鉴定.用脂多糖和灭活的羊种布鲁菌16M作为免疫抗原,交替免疫6～8周龄BAIB/c雌鼠,第1次免疫用羊种布鲁菌标准菌16M全菌加等量弗氏完全佐剂;第2次免疫用脂多糖加等量弗氏不完全佐剂.将脂多糖作为包被抗原建立间接ELISA方法,筛选针对抗羊种布鲁菌(16M菌株)脂多糖的单克隆抗体杂交瘤细胞株.筛选出3株能稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5H3、6B8和3H7,细胞培养上清的ELISA效价在1:1 000～1:5 000,小鼠腹水单克隆抗体ELISA效价在1:10 000～1:160 000;抗体亚类鉴定表明:5H3、6B8属于IgM亚类,3H7属于IgG3亚类;特异性试验结果显示:3株杂交瘤细胞分泌的抗体不与大肠杆菌O157裂解抗原、鸡白痢沙门氏菌裂解抗原、鸭源鸡杆菌脂多糖抗原以及福氏志贺菌裂解抗原反应,仅与灭活的羊种布鲁菌(16M)发生反应.布鲁菌虎红平板凝集试验和试管凝集试验检测结果显示,获得的单抗可与标准检测抗原形成明显的颗粒凝集物和伞状凝集物.利用所建立的单克隆抗体细胞株,建立了一种检测布鲁菌的双夹心间接ELISA方法,并进行了特异性和敏感性检测.对模拟样品和临床样品进行检测,准确性均很高. 相似文献
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磺胺间甲氧嘧啶(Sulfamonomethoxine,SMM)与牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备完全抗原(BSA-SMM),并以BSA-SMM免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与NSO细胞融合,建立分泌SMM单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过对杂交瘤细胞培养上清液的检测、鉴定,筛选出12株高亲和力的杂交瘤细胞株,其中4B9、1H10、2E9的腹水ELISA效价为1×10-7、5.1×10-6和1×10-7。该单克隆抗体可用于饲料和动物源性食品中磺胺间甲氧嘧啶残留检测的免疫学快速检测方法的建立。 相似文献
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抗A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系中建立与中和效应 总被引：5，自引：1，他引：4
用提取的A型产气荚膜梭菌α毒素包涵体免疫BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合和克隆化,经间接ELISA筛选,共获得1A8,1C3,1D5,1D8,1F1,1H1和2E37株稳定分泌单克隆抗体（McAb)的杂交瘤细胞株,经鉴定,7株McAb的Ig亚类有IgG1(1D8),IgG3(1A8,1C3和2E3)和IgM（1D5,1F1和1H1）,细胞培养上清和腹水抗体效价分别为1：512-1：1024和1：10^6-1:10^8。尤为重要的是,2E3杂交瘤细胞株分泌的McAb不仅能够中和α毒素的磷脂酸C活性和溶血活性,而且能够对致死性腹腔感染小鼠产生良好的被动保护作用。 相似文献
16.
研制抗羊种布鲁菌脂多糖抗原的单克隆抗体,并应用其建立检测布病的双夹心ELISA方法。本研究采用热酚水法提纯羊种布鲁菌(16M菌株)的脂多糖抗原,并经SDS-PAGE鉴定。用脂多糖和灭活的羊种布鲁菌16M作为免疫抗原,交替免疫6～8周龄BALB/c雌鼠,第1次免疫用羊种布鲁菌标准菌16M全菌加等量弗氏完全佐剂;第2次免疫用脂多糖加等量弗氏不完全佐剂。将脂多糖作为包被抗原建立间接ELISA方法,筛选针对抗羊种布鲁菌(16M菌株)脂多糖的单克隆抗体杂交瘤细胞株。筛选出3株能稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5H3、6B8和3H7,细胞培养上清的ELISA效价在1∶1 000～1∶5 000,小鼠腹水单克隆抗体ELISA效价在1∶10 000～1∶160 000;抗体亚类鉴定表明:5H3、6B8属于IgM亚类,3H7属于IgG3亚类;特异性试验结果显示:3株杂交瘤细胞分泌的抗体不与大肠杆菌O157裂解抗原、鸡白痢沙门氏菌裂解抗原、鸭源鸡杆菌脂多糖抗原以及福氏志贺菌裂解抗原反应,仅与灭活的羊种布鲁菌(16M)发生反应。布鲁菌虎红平板凝集试验和试管凝集试验检测结果显示,获得的单抗可与标准检测抗原形成明显的颗粒凝集物和伞状凝集物。利用所建立的单克隆抗体细胞株,建立了一种检测布鲁菌的双夹心间接ELISA方法,并进行了特异性和敏感性检测。对模拟样品和临床样品进行检测,准确性均很高。 相似文献
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猪瘟病毒保护性抗原E2蛋白单抗的制备及其抗原表位的初步分析 总被引：25，自引：3，他引：22
应用大肠杆菌表达的猪瘟病毒主要保护性 E2抗原决定簇蛋白和全长 E2基因构建的 DNA疫苗免疫 BAL B/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与 SP2 /0骨髓瘤细胞进行融合 ,经克隆和间接 EL ISA筛选 ,获得了 A11、B2、E3、H6、D5、D86株稳定分泌抗猪瘟病毒 E2蛋白单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞株。它们的腹水效价在 1∶ 80 0～ 1∶ 2 10 0 0 0之间。抗体类型鉴定结果表明 ,A11、E3、H6、D5和 D8为 Ig M类型 ,B2为 Ig G类型。随后用蛋白 A凝胶层析法和 PEG沉淀法分别纯化了 Ig G和 Ig M单抗。对纯化单抗进行的抗原识别表位研究结果初步表明 ,6株单抗可能识别 3种不同的E2抗原表位。 相似文献
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为了提高赤羽病的检测速度与效率,建立双抗夹心ELISA检测方法并进行试剂盒的研制。试验用纯化的AKV免疫BALB／c小鼠,细胞融合后用ELISA方法筛选出3株分泌抗AKV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞（1D1、1812和2G1）,各杂交瘤细胞株均可以稳定地分泌特异性单克隆抗体,且其单克隆抗体亚型测定的结果均为IgG1、轻链均为k链。建立DAS--ELISA检测方法,确定抗AKV单克隆抗体1812株的最佳包被浓度为4μg／mL,多克隆抗体最佳稀释比为1：500,二抗最佳工作浓度为1：5000,阴性／阳性结果判定临界值为0．238,具有较好的特异性,检测极限为10^-4。表明该方法及试剂盒具有较强的实用价值。 相似文献
19.
《中国兽医杂志》2016,(12)
为制备鸡白介素10(chIL-10)单克隆抗体,以常规分子生物学技术从禽细胞系MDCC-MSB1克隆chIL-10基因,将去信号肽chIL-10基因亚克隆至原核表达载体p ET-30a,并在大肠杆菌中表达,纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠。经4次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合。将原核表达的GST-chIL-10融合蛋白作为包被抗原,利用间接ELISA筛选阳性克隆。阳性细胞株经3次亚克隆后,获得3株稳定分泌chIL-10抗体的杂交瘤细胞克隆,分别命名为4B2、4F3以及1E3。经间接ELISA测定,以上3株杂交瘤细胞腹水效价为1∶3.2×10~6,亲和力解离常数(Kd)分别为1.05×10~(-9)、5.01×10~(-10)以及7.59×10~(-10)。抗体重链类型分别为Ig G2a、Ig G2a以及Ig G1。经Western Blot试验证明,3株单抗均能特异地识别原核或真核表达的chIL-10蛋白,4B2、4F3单抗识别的抗原表位区域为chIL-10 N端的1 aa~52 aa,1E3识别的是N端的52 aa~102 aa。这些单抗为鸡IL-10的检测及生物学功能研究奠定了基础。 相似文献
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利用小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞系与纯化鸡IgG免疫的BALB/C小鼠脾细胞融合,成功地建立了5株能持续分泌抗鸡IgG单克隆抗体(McAbs)的杂交瘤细胞株。选择产生抗体效价高、生长快的C_(44)株,扩大培养后注射于小鼠制备腹水,经硫酸铵盐析粗提后,用HRP标记,制备出McAbs酶结合物。将制备的McAbs酶结合物和多克隆抗体(PcAbs)酶结合物,采用间接ELISA,对35份鸡血清中鸡新城疫病毒(NDV)抗体以及19份鸡血清中鸡嗜血杆菌(HG)抗体进行检测,McAbs和PcAbs两者的相关系数分别为0.928和0.921,证明制备的抗鸡IgG McAbs具有特异性强、效价高的特点. 相似文献