犬钩端螺旋体黄疸出血群LipL32在大肠杆菌中的高效表达     

宋翠萍  贾雪波  陈鸿军  于圣青  丁铲 《中国兽医寄生虫病》2009,17(3)

本试验收集了临床发生黄疸病犬的尿液,提取基因组DNA,经16srRNA基因PCR鉴定,表明该犬存在钩体黄疸出血群毒株感染.以该基因组DNA为模板,扩增获得lipL32基因,并对该基因进行了原核表达,结果显示该抗原在大肠杆菌中获得高效可溶性表达.该蛋白的成功制备为犬钩体的诊断及新型亚单位疫苗的研制提供了广谱候选抗原.  相似文献   

宿主细胞磷酸激酶在新城疫病毒感染中的作用     

詹媛  陈鸿军  仇旭升  孙英杰  于圣青  丁铲 《中国兽医寄生虫病》2011,19(2):1-7

为探讨磷酸化通路在新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）感染中的作用,使用多种蛋白磷酸激酶抑制剂和激活剂预处理细胞,比较处理后NDV在细胞上生长状况的差异。结果显示NDV在PKC蛋白激酶抑制剂处理的细胞上的生长受到抑制,这种抑制作用能够被PKC蛋白激酶激活剂中和,而PKA蛋白激酶抑制剂和p38MAPK蛋白激酶抑制剂对其影响不大。通过PKC蛋白激酶抑制剂的细胞毒性试验证实,这种抑制作用不是由于药物对细胞的毒性或者因药物加入而改变培养基pH值而造成的。病毒在staurosporine处理的细胞上的生长曲线试验显示,浓度在20~200 nmol/L能对病毒感染产生抑制作用,并且药物浓度越高,上清中病毒的滴度相对越低。本研究结果表明PKC磷酸化通路在新城疫病毒的感染过程中发挥了重要作用。  相似文献   

Ⅰ型鸭肝炎病毒SH株全基因组序列测定与分析     

宋翠萍  仇旭升  陈鸿军  于圣青  丁铲 《中国兽医寄生虫病》2011,19(5):39-44

本研究从上海市某鸭场发病鸭群中分离到1株DHV-1型强毒株,对其进行毒价测定、琼脂扩散试验和动物回归实验,结果显示：按103.41 ELD50/0.2 mL接种1日龄雏鸭,该毒株对雏鸭有明显的致病性,死亡率为60%,肝脏病变率为100%。经全基因组测序显示：该毒株长度为7652 nt,含626 nt的5＇非编码区和314 nt的3＇非编码区,编码一个2249 aa大小的多聚蛋白。根据Blast比对发现,该毒株属于经典的DHV-1A群,与韩国经典强毒株R85952（99.7%）和中国分离强毒株HP-1（99.3%）的同源性最高。  相似文献   

单克隆抗体夹心ELISA试验检测鸡新城疫病毒抗原的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

于圣青  刘秀梵 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》1990,(2)

从10株抗鸡新城疫病毒(NDV)特异性单克隆抗体(MAbs) 中筛选出2株MAbs—M22和F23,分别用作包被抗体和酶标抗体而建立的MAbs—夹心ELISA试验,对提纯NDV的最小检出量为25ng/ml病毒蛋白.NDV鸡阳性血清对本试验的特异性阻断作用和与其他禽类病毒交叉反应的阴性结果,证明本试验对NDV的特异性。从临床疑为鸡新城疫的724只病鸡的口腔棉试样品中共检出阳性502只,其中200个样品与病毒分离试验结果完全一致,两者均查出阳性鸡176只。  相似文献   

鸭疫里默氏杆菌GroEL蛋白的原核表达和单克隆抗体制备     

侯湾湾  韩先干  王少辉  王小兰  岳嘉蘋  曹守林  范红结  于圣青 《中国动物传染病学报》2014,(2):58-64

本试验旨在研制鸭疫里默氏杆菌GroEL蛋白的单克隆抗体。将鸭疫里默氏杆菌WJ4菌株的groEL基因进行原核表达,重组蛋白经过纯化后作为免疫原免疫BALB/c小鼠。经过3次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,用间接ELISA筛选阳性细胞株并进行3次亚克隆后制备小鼠腹水单克隆抗体。共获得2株稳定分泌鸭疫里默氏杆菌GroEL单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1G2B6和1G2F10。2株单克隆抗体均为IgG1亚类。腹水单克隆抗体ELISA效价达到1:102 400。Western blot检测结果表明2株单克隆抗体均能与鸭疫里默氏杆菌血清1、2和10型菌株发生特异性结合,而与禽致病性大肠杆菌、沙门氏菌和禽巴氏杆菌菌株无反应性。本研究成功制备了稳定性好、特异性强的鸭疫里默氏杆菌GroEL单克隆抗体,为进一步研制基于抗体检测鸭疫里默氏杆菌抗原的试剂盒奠定了基础。  相似文献   

硝酸纤维素膜免疫吸附法纯化鸡IgM的研究     

丁铲  于圣青  刘学贤 《中国预防兽医学报》1995,(2)

以抗鸡ＩｇＭ单抗包被硝酸纤维素膜，小牛血清封闭非结合点，吸附鸡ＩｇＭ后，以硫氰酸钾解吸．收集解脱液，透析后即为纯化ＩｇＭ．其比活性为８２．３％，每次可获得１．２５ｍｇＩｇＭ纯品．膜可反复使用．  相似文献   

油乳剂苗的优越性与不足     

丁铲  于圣青 《中国禽业导刊》1995,(6)

油乳剂苗的优越性与不足丁铲，于圣青（江苏省家禽科学研究所）免疫接种是预防家禽传染性疾病的最主要方法。生物技术在禽病防制实际应用中最引人注目的科技进步是油乳剂疫苗（ＯｉｌＥｍｕｌｓｉｏｎＶａｃｃｉｎｅ，ＯＥＶ）的广泛应用和ＥＬＩＳＡ技术在常规血清学诊断...  相似文献   

将来的禽用疫苗     

丁铲  于圣青 《中国禽业导刊》1996,(1)

在过去的40年中,大多数重要的禽病都可以用相应的疫苗进行有效的预防,极大地减轻了疾病带来的损失,疫苗已成为控制禽病的基础。然而人们希望进一步降低生产成本,提高产品质量,这对改进现有疫苗和开发新型的生物制品将具有极大的推动作用,其中因变异株及超强毒株的出现而造成疫苗效果的逐渐降低,也为促使新型疫苗的研制以强大推动。以重组DNA技术研究古典型和新型疫苗空前活跃,新型生物制品必将大批涌现出来。  相似文献   

单一血清稀释度ELISA定量检测鸡新城疫抗体水平的研究     

丁铲  于圣青  刘学贤 《中国预防兽医学报》1993,(6)

建立了—种以单一血清稀释度定量检测鸡血清中 NDV抗体的间接 ELISA 方法,经试验得出回归方程 LnET=5.878 0.537P/N。该方法特异性强,能被 NDV 单抗所特异性阻断,比 HI 方法敏感。通过对 SPF 鸡等进行的不同疫苗免疫前、后抗体动态测定表明,ET 值与 HI 值之间呈一定的相关性(r=0.8702),强毒攻击试验表明,ET值>4000时鸡群能得以保护,装配成的商品试剂盒保存期长达6个月.  相似文献   

鸡霍乱口服弱毒疫苗的研究     

刘学贤  丁铲  于圣青  尤兆岚 《中国预防兽医学报》1997,(5)

用经过选择的禽多杀巴氏杆菌自然弱毒菌株Ｒ１－２３菌株制成的鸡霍乱固体培养口服弱毒疫苗，其安全剂量接近于２００个免疫剂量。该口服苗两次饮水免疫的最适总剂量为每羽５０亿个活菌，最佳间隔时间为４８小时。免疫鸡第二次饮苗后第３天即可产生较好的免疫保护率（７／８）。免疫鸡对异型强毒株Ｐ１０５９（８∶Ａ）、Ｐ２７２３（９∶Ａ）和同型强毒株Ｃ４８－１（５∶Ａ）滴鼻攻击的近期保护率平均为５／１０、６／１０和９／１０。６个月免疫期的平均保护率为７６．７０％（４６／６０），一万多羽鸡田间试验结果表明，免疫后２个月的平均保护率为９３．１０％（２７／２９），６个月的平均保护率为７３．５０％（２５／３４），除对产蛋率有轻度影响（下降１．２７％）外，无其它不良反应。野外大面积使用结果表明，该口服苗不但性能稳定，免疫原性优良，而且安全可靠，适用于鸡口服免疫。  相似文献