板蓝根微粉水提物抗大肠杆菌活性及其机制的探究   总被引：1，自引：0，他引：1  

姜晓文  燕鸽  李叔洪  于文会  魏佳宇  艾莉雯  白文 《中国畜牧兽医》2020,47(9):2968-2978

为了探究板蓝根微粉水提物的抗菌活性及其抗菌机制，试验通过扫描电镜、透射电镜检测板蓝根微粉水提物对大肠杆菌形态和结构影响；酶标仪测定板蓝根微粉对大肠杆菌电导率、胞内物质总漏出率影响；测定大肠杆菌培养液中碱性磷酸酶含量以及大肠杆菌菌体内、外蛋白质含量；通过DAPI染色DNA、RNA，检测板蓝根微粉水提物对大肠杆菌核酸的影响；检测板蓝根微粉水提物对大肠杆菌菌体内、外谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、丙酮酸以及三磷酸腺苷（ATP）等菌体内代谢的影响。结果显示，板蓝根微粉水提物作用大肠杆菌10 h后，扫描电镜检测可见菌体出现溢缩，菌体长度明显变短，断裂形成许多残体，有的中间凹陷，发生变形；透射电镜下可观察大肠杆菌的胞壁界限模糊不清，壁膜呈现锯齿状，弯弯曲曲，变形，有的菌体破碎。总漏出率、电导率以及碱性磷酸酶含量测定结果显示，板蓝根微粉水提物各组D_{600 nm}均高于空白对照组，且呈剂量依赖性。菌体外蛋白质含量从8 h开始与空白对照组差异极显著（P<0.01）；菌体内蛋白质含量从4 h开始与空白对照组差异极显著（P<0.01）。DNA含量在12 h前与空白对照组无显著差异（P>0.05），从16 h开始与空白对照组差异极显著（P<0.01）；RNA含量在8 h开始降低，在12 h时与空白对照组差异显著（P<0.05），从16 h开始差异极显著（P<0.01）。ALT和AST浓度测定无显著性差异（P>0.05）。培养液和菌体内的丙酮酸含量均高于空白对照组，且从4 h开始与空白对照组差异极显著（P<0.01）。培养液中的ATP含量与空白对照组差异极显著（P<0.01）；菌体内ATP含量从4 h开始与空白对照组差异极显著（P<0.01）。综上，板蓝根微粉水提物可以通过破坏细胞壁、细胞膜的完整性，抑制细菌遗传物质合成和代谢，影响丙酮酸和ATP含量从而实现抗大肠杆菌作用。  相似文献   

基于网络药理学联合16S rDNA高通量测序技术分析丹参对感染大肠杆菌小鼠肠道菌群的影响     

王乐  陈泓岑  张永红  吴琼  侯佳佳  王天祎  卢天航  黄传发  张华  崔德凤 《畜牧兽医学报》1956,53(10):3695-3711

本研究旨在通过网络药理学联合16S rDNA高通量测序技术分析丹参对感染大肠杆菌小鼠肠道菌群的影响。利用传统中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）筛选丹参有效成分及靶点基因。使用基因数据库（Genecards）获得E.coli靶点基因。两者靶点基因取交集,通过STRING平台进行蛋白质相互作用分析,构建PPI网络,并运用Cytoscape 3.8.2软件构建“丹参活性成分-潜在作用靶点”网络。利用DAVID在线工具进行基因本体论（GO）功能富集分析,Metascape数据库进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。试验选用110只雄性昆明小鼠,随机分为对照组、大肠杆菌组和低、中、高剂量丹参大肠杆菌感染组,每组22只。连续灌胃丹参液28 d后,用E.coli O₁₀₁进行腹腔注射,对照组注射无菌生理盐水,观察24 h后,收集各组粪便。应用16S rDNA高通量测序技术对各组小鼠肠道菌群进行分析。结果显示：1）网络药理学丹参有效成分36个,作用靶点669个,Genecards数据库搜索E.coli靶点8 902个,对两者取交集去除孤立点获得丹参治疗E.coli潜在靶点51个;GO、KEGG分析,获得关键靶点18个、关键通路47条,其中生物过程（BP）、分子功能（MF）和细胞成分（CC）各为174、76、45条;2）通过Illumina Miseq测序共获得950 855条有效序列,2 537个操作分类单元（OTUs）;3） Alpha多样性分析结果表明,不同剂量丹参组肠道菌群多样性与对照组具有显著差异,大肠杆菌组肠道菌群多样性显著低于对照组（P<0.05）;4）相比于大肠杆菌感染组,在门水平上,低、中、高剂量丹参大肠杆菌感染组Bacteroidetes （拟杆菌门）丰度极显著增高（P<0.01）,Firmicutes （厚壁菌门）丰度显著增高（P<0.05）,Proteobacteria （变形菌门）极显著降低（P<0.01）,在属水平上Bacteroides（拟杆菌属）丰度极显著增高（P<0.01）;5）基于LEfSe分析,对照组、大肠杆菌感染组、丹参高剂量大肠杆菌感染组共发现14种显著差异菌群;6） PICRUSt功能预测分析发现,丹参对大肠杆菌感染小鼠肠道菌群调节功能主要富集的途径是氨基酸、碳水化合物运输与代谢,翻译、核糖体结构和生物转化,细胞壁/膜/生物合成等方面。综上,基于网络药理学联合16S rDNA高通量测序技术全面揭示了丹参多成分、多靶点、多途径调节相关菌群生物丰富度,对大肠杆菌感染小鼠的肠道菌群紊乱有缓解作用,为临床应用丹参治疗大肠杆菌感染提供理论依据。  相似文献   

石榴皮水提物对猪源多重耐药大肠杆菌的抑菌作用研究     

刘琳  吴保庆  郭晓银  于文会  田浪 《中国畜牧兽医》2023,50(1):328-340

【目的】筛选腹泻仔猪中携毒力基因且多重耐药的大肠杆菌菌株,评估中药水提物对该菌株的抑菌活性,并探索中药抑菌机制。【方法】通过PCR方法与Kirby-Bauer(K-B)药敏纸片法评估临床大肠杆菌菌株的肠毒素基因携带情况和耐药性;通过微量肉汤稀释法评估中药水提物对多重耐药大肠杆菌菌株的抑菌活性,确定最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)和最小杀菌浓度(minimal bactericidal concentration, MBC);通过电导率仪以及相关试剂盒检测评估石榴皮水提物对多重耐药菌株作用不同时间后菌液电导率、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, AKP)含量及菌体内ATP含量的变化;通过SDS-PAGE和蛋白含量检测评估菌体内可溶性蛋白的含量变化;通过扫描电镜观察大肠杆菌形态变化。【结果】PCR检测14株临床大肠杆菌中肠毒素基因携带率达到78.57%,抗生素药敏试验结果显示,所有菌株至少对2种抗生素耐药,均属于多重耐药菌株。中药药敏试验结果显示,黄连、黄芩、石榴皮水提物对多重耐药菌株抑菌活性较好,其中石榴皮水提...  相似文献   

灭活大肠杆菌与脂多糖诱导猪肠黏膜上皮细胞表达RegⅢγ的机理研究     

孟江海  向琼昊  宋云云  曹斌  陈韬 《中国畜牧兽医》2021,48(3):846-854

试验旨在探索革兰氏阴性菌大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）及其表面分子脂多糖（LPS）诱导胰腺再生蛋白Ⅲγ（RegⅢγ）表达调控的机制。首先,用不同浓度灭活E.coli（10⁹、10⁸、10⁷、10⁶、10⁵、10⁴ CFU/mL）和LPS （0.01、0.1、1、5、10、20、40、80 μg/mL）诱导猪肠黏膜上皮细胞（IPEC-JⅡ）,用MTT法测D_{490 nm}值,检测E.coli和LPS对IPEC-JⅡ细胞活力的影响;其次,用不同浓度灭活E.coli（10⁷、10⁶、10⁵ CFU/mL）和LPS （0.01、0.1、1、5 μg/mL）处理IPEC-JⅡ细胞24 h,用实时荧光定量PCR和Western blotting检测RegⅢγ mRNA和蛋白的表达;最后,用1 μg/mL LPS处理IPEC-JⅡ细胞24 h,用实时荧光定量PCR和Western blotting检测p65、p38、JNK、ERK mRNA和蛋白表达及磷酸化水平。结果显示,除0.01 μg/mL LPS不抑制IPEC-JⅡ细胞活力外,其他浓度的灭活E.coli和LPS均可抑制IPEC-JⅡ细胞活力,且10⁹、10⁸ CFU/mL E.coli和10、20、40、80 μg/mL LPS组细胞活力极显著下降（P<0.01）;与对照组相比,10⁷、10⁶和10⁵ CFU/mL E.coli均能诱导RegⅢγ表达增加,且10⁵ CFU/mL E.coli组RegⅢγ mRNA表达量极显著高于对照组（P<0.01）,蛋白表达量显著高于对照组（P<0.05）;0.01、0.1、1和10 μg/mL LPS均能诱导RegⅢγ表达增加,且0.1和1 μg/mL LPS组RegⅢγ mRNA表达量极显著高于对照组（P<0.01）,RegⅢγ蛋白表达虽有增加趋势,但差异不显著（P>0.05）;与对照组相比,1 μg/mL LPS组p65、p38 mRNA表达量极显著增加（P<0.01）,JNK、ERK mRNA表达量显著增加（P<0.05）;同时,p38、JNK蛋白表达量和磷酸化水平均极显著增加（P<0.01）,p65蛋白磷酸化水平显著增加（P<0.05）,ERK蛋白和磷酸化水平均增加,但差异不显著（P>0.05）。以上结果表明,灭活E.coli和LPS均可诱导RegⅢγ表达,1 μg/mL LPS可增加p65、p38和JNK蛋白的磷酸化水平。  相似文献   

穿心莲内酯干混悬剂对人工感染大肠杆菌致肉鸡腹泻的药效评价     

李江北  杨霞  傅嘉莉  李美娣  邱电  陈建新  武力 《畜牧兽医学报》2021,52(11):3246-3259

本试验旨在评价穿心莲内酯干混悬剂对大肠杆菌感染致肉鸡腹泻的治疗效果,为其临床应用提供试验依据。选取12日龄健康试验鸡300只,随机分为5个组,每组4个重复,每个重复15只。包括空白对照组、大肠杆菌ETECO101攻毒组、大肠杆菌攻毒加100和200 mg·L^-1穿心莲内酯干混悬剂及60 mg·L^-1粘菌素组。肉鸡15日龄通过腹腔注射0.2 mL含5×10⁸ cfu·mL^-1 ETECO101的生理盐水感染细菌,空白对照组腹腔注射0.2 mL生理盐水。细菌感染前3 d开始通过饮水给药,早、晚各给药1次,每次每个重复700 mL,连续给药至攻菌后第3天停止给药。每组随机选取1个重复,于攻菌后24 h和第5天分别选取6只鸡采血、剖检和取组织样,用于肝组织病理学观察、小肠微结构分析、免疫器官指数测定和血液生化指标分析。每组剩余3个重复（45只）试验至攻菌后第7天,计算存活率、粪便评分、平均日增重（ADG）和平均日采食量（ADFI）,以评价药物的药效。结果显示,相对于ETECO101组,药物含量为100和200 mg·L^-1的穿心莲内酯干混悬剂组肉鸡存活率分别提高13.3和17.8个百分点（P<0.05）,减轻大肠杆菌感染导致的腹泻,显著提高肉鸡ADG （P<0.01）和ADFI（P<0.01）;200 mg·L^-1穿心莲内酯干混悬剂组显著地增加了攻菌后24 h肉鸡脾脏和法氏囊指数（P<0.01）,降低了攻菌后第5天肉鸡血清中球蛋白（GLB）和白蛋白（ALB）含量（P<0.05）,有效地抑制肉鸡血清中丙二醛（MDA）含量的增加,提高肉鸡血清超氧化物歧化酶（SOD）活力（P<0.01）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力（P<0.01）。同时,200 mg·L^-1穿心莲内酯干混悬剂组可显著改善肉鸡空肠绒毛高度（P<0.05）,以及绒毛高度与隐窝深度的比值。综上所述,饮水中添加穿心莲内酯干混悬剂可减少大肠杆菌感染导致的鸡死亡,改善肉鸡生长性能、血清氧化应激状态和空肠肠道形态,提高法氏囊指数,对大肠杆菌感染而导致的肉鸡腹泻具有显著疗效。  相似文献   

大肠杆菌对奶牛子宫内膜上皮细胞炎性损伤的研究     

李博通  王仕宇  刘佳玮  张玮琪  倪耀娣  刘明超 《中国畜牧兽医》2021,48(7):2627-2634

试验旨在研究大肠杆菌（E.coli）对奶牛子宫内膜上皮细胞（bovine endometrial epithelial cells,BEECs）的体外炎性损伤,探究大肠杆菌引发炎性反应的最佳浓度、作用时间及机制。首先,用不同浓度的大肠杆菌（5×10⁴、5×10⁵、1×10⁶、2.5×10⁶、5×10⁶ CFU/mL）诱导刺激细胞3、6和9 h,通过倒置显微镜观察细胞形态、CCK-8法测D_{450 nm}值,检测大肠杆菌对细胞活性的影响;其次,用不同浓度的大肠杆菌（5×10⁴、5×10⁵ CFU/mL）处理细胞3、6和9 h,用ELISA方法检测细胞上清液中白介素-1β（IL-1β）、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的分泌量;最后,用不同浓度的大肠杆菌（5×10⁴、5×10⁵ CFU/mL）处理细胞6和9 h,用Western blotting检测核因子κB抑制蛋白α（IκBα）和p65蛋白的磷酸化水平。结果显示,与对照组相比,大肠杆菌感染细胞9 h后,1×10⁶、2.5×10⁶和5×10⁶ CFU/mL大肠杆菌组细胞活性均极显著降低（P<0.01）,5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌组显著降低（P<0.05）;大肠杆菌感染细胞9 h后,5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌组IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α极显著升高（P<0.01）;大肠杆菌感染细胞6 h后,5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌组IκBα、p65蛋白磷酸化水平和IL-6均极显著升高（P<0.01）,5×10⁴ CFU/mL大肠杆菌组IκBα和p65蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.05）。结果表明,大肠杆菌可以刺激奶牛子宫内膜上皮细胞产生炎性反应,且当细胞与5×10⁵ CFU/mL大肠杆菌作用6 h或与5×10⁴ CFU/mL大肠杆菌作用9 h为最佳。  相似文献   

中药复方对大肠杆菌感染雏鸭的防治效果研究     

秦枫  刘云  吴植  封琦  吴双  宋海港  吴晓洁  朱善元 《中国畜牧兽医》2020,47(10):3371-3378

本研究对由地锦草、石榴皮等组成的中药复方对大肠杆菌感染雏鸭的临床治疗效果进行了研究，旨在为临床大肠杆菌感染提供新的治疗手段。试验选取50只健康1日龄雏鸭，随机分为5组，每组10只。试验组分别为空白对照组、模型组、阿莫西林组、中药复方高剂量组（DS_H）和低剂量组（DS_L）。给药组在3日龄开始给药，连续给药至试验结束，共10 d。除空白对照组外，在雏鸭6日龄时用大肠杆菌腹腔注射进行攻毒，0.5 mL/只。比较各试验组雏鸭的病死率；对病死鸭和各组存活鸭进行解剖，观察肝脏和小肠的病理剖检及HE染色切片；检测血常规及血清生化各项指标，评价中药复方对感染大肠杆菌雏鸭的治疗效果。结果显示，DS_H、DS_L和阿莫西林均能够有效降低感染雏鸭的死亡率；与模型组相比，阿莫西林和DS_H、DS_L组均可减少肝脏、小肠等器官的损伤。与空白对照组相比，模型组的谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）显著升高（P<0.05），碱性磷酸酶（ALP）、乳酸脱氢酶（LDH）和尿素（UREA）极显著升高（P<0.01），且模型组和给药组血液中白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、血小板（PLT）等指标变化显著（P<0.05）。与模型组相比，给药组ALP显著或极显著降低（P<0.05；P<0.01），血液中WBC、RBC、HGB、PLT等指标极显著升高（P<0.01），说明给药组机体损伤程度低于模型组。以上结果表明，中药复方可以减轻因大肠杆菌所引起的机体损伤，且作用效果与阿莫西林相近。  相似文献   

Study on the Prevention and Control Effect of Chinese Herbal Compound on E.coli Infected Ducklings     

QIN Feng  LIU Yun  WU Zhi  FENG Qi  WU Shuang  SONG Haigang  WU Xiaojie  ZHU Shanyuan 《中国畜牧兽医》2007,47(10):3371-3378

In this study,the clinical therapeutic effect of Chinese herbal compound composed of Euphorbia humifusa Willd.and Punica granatum L.on ducklings infected with Escherichia coli (E.coli) was studied in order to provide a new therapeutic method for clinical treatment of E.coli.Fifty healthy one-day-old ducklings were selected and randomly divided into five groups,ten ducklings in each group.The experimental groups were blank control group,model group,amoxicillin group,Chinese medicine compound high-dose group(DS_H) and low-dose group(DS_L).The administration group started administration at 3 days of age,continued administration for 3 days,and continued administration until the end of the experiment,10 days total.Except for control group,when the ducklings were 6 days old,E. coli was intraperitoneally injected for challenge,0.5 mL/head.The mortality of the experimental groups was compared.The dead ducks and the surviving ducks were dissected,the pathological section of liver and small intestine and HE staining sections were observed.The blood routine indexes and serum biochemical analysis were detected to evaluate the therapeutic effect of traditional Chinese medicine compound on E.coli infected ducklings.The results showed that the high and low doses of the traditional Chinese medicine compound and the amoxicillin could effectively reduce the mortality of infected ducklings.Compared with model group,amoxicillin and traditional Chinese medicine high and low dose groups could reduce liver,small intestine and other organs damage.Compared with control group,aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) in model group increased significantly (P<0.05),and alkaline phosphatase (ALP),lactate dehydrogenase (LDH),UREA also showed extremely significant upward trend (P<0.01),and the WBC,RBC,HGB,PLT and other indicators changed extremely significantly(P<0.05).Compared with model group,the alkaline phosphatase(ALP)value was significantly or extremely decreased in the administration group(P<0.05;P<0.01),and the blood WBC,RBC,HGB and PLT indexes were extremely significantly increased (P<0.01).The results indicated that the degree of body damage in the administration group was lower than that in the model group.  相似文献   

中药联合益生菌对大肠杆菌性小鼠腹泻的保护作用     

李春亭  王沙沙  赵欣  王巍  葛冰洁  张雪梅 《中国畜牧兽医》2022,49(8):3226-3234

【目的】研究中药联合益生菌对大肠杆菌性小鼠腹泻的保护作用。【方法】通过正交试验筛选中药联合益生菌最佳因素配比。取60只小鼠随机分为空白组、模型组、中药组、益生菌组和中药联合益生菌组,每组12只。空白组小鼠腹腔注射生理盐水(0.2 mL/只),模型组、中药组、益生菌组和中药联合益生菌组均先腹腔注射分离菌悬液1×10⁷ CFU/kg,然后中药组按10 mL/kg灌胃中药液(其中蒲公英提取物浓度为0.25 g/mL,黄芪总黄酮和黄芪多糖浓度均为0.05 g/mL),益生菌组按4 mL/kg灌胃枯草杆菌悬液(菌含量5×10⁷ CFU/mL),中药联合益生菌组按上述量灌胃中药液和枯草杆菌混合液,每天定时灌胃给药1次,连续3 d。每日记录小鼠腹泻、体重、采食量等情况。末次给药12 h后分离心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肺脏,称重并计算脏器系数;血液分析法检测血液学指标;取粪便及小肠内容物检测粪便隐血情况并进行细菌计数;ELISA法检测小鼠血清和小肠组织中髓过氧化物酶(MPO)活性。【结果】中药联合益生菌最佳因素配比为A₁B₂C₂D₂。与空白组相比,模型组小鼠腹泻率100%且无自愈现象,症状和剖检病变明显,腹泻指数极显著上升(P＜0.01),体重、采食量均极显著下降(P＜0.01),肝脏、脾脏器官指数均显著升高(P＜0.05),淋巴细胞比率(LYM)、中间细胞比率(MID)均显著下降(P＜0.05),粒细胞比率(GRAN)极显著上升(P＜0.01);与模型组相比,中药组和中药联合益生菌组腹泻指数极显著下降(P＜0.01),体重、采食量显著上升(P＜0.05),中药组肝脏、脾脏器官指数显著下降(P＜0.05),中药联合益生菌组脏器系数极显著下降(P＜0.01),中药组、益生菌组及中药联合益生菌组LYM显著上升(P＜0.05)、GRAN显著下降(P＜0.05)。粪便隐血检测结果显示,模型组检测呈强阳性;中药组、益生菌组呈弱阳性,中药联合益生菌组呈阴性。与空白组相比,模型组小鼠肠内大肠杆菌数、血清及小肠组织中MPO活性均极显著上升(P＜0.01);与模型组相比,中药组和中药联合益生菌组小鼠肠内大肠杆菌数、血清及小肠组织中MPO活性均显著下降(P＜0.05)。【结论】中药联合益生菌可降低腹泻指数、肝脏和脾脏器官指数,增加体重、饮食量,使粪便隐血转阴并降低肠内大肠杆菌数、血清及小肠组织中MPO活性,从而对大肠杆菌性小鼠腹泻产生协同保护作用。  相似文献   

同一养殖模式下不同地区猪源大肠杆菌耐药性比较     

夏绪进  程伟华  夏利宁  苏战强 《中国畜牧兽医》2015,42(8):2189-2193

本试验旨在比较新疆相同养殖模式下不同地区猪源大肠杆菌的耐药情况。分别在某规模化养猪场呼图壁(207份)、玛纳斯(210份)和昌吉(210份)地区采集粪样,共计627份样品,各地区猪源大肠杆菌的分离率均为100.0%。采用微量肉汤稀释法对分离出的大肠杆菌进行临床常用抗菌药物的药敏试验,并通过卡方检验比较3个地区猪源大肠杆菌耐药率的差异。结果显示,呼图壁地区猪源大肠杆菌对安普霉素、阿米卡星、阿莫西林—克拉维酸和头孢噻呋的耐药率均极显著高于另外两地区(P< 0.01);玛纳斯地区猪源大肠杆菌对环丙沙星的耐药率显著高于另外两地区(P< 0.05),对诺氟沙星的耐药率极显著高于另外两地区(P< 0.01);昌吉地区猪源大肠杆菌对诺氟沙星的耐药率极显著高于呼图壁地区(P< 0.01),而对阿莫西林—克拉维酸和氨苄西林的耐药率均显著高于玛纳斯地区(P< 0.05)。呼图壁地区3~8耐菌株占94.7%,玛纳斯地区3~7耐菌株占89.5%,昌吉地区4~8耐菌株占82.4%。不同地区之间3~7耐菌株数差异不显著(P> 0.05)。结果表明,在相同的养殖模式下,不同地区猪源大肠杆菌的耐药情况不同。此外,养殖场猪源大肠杆菌的耐药问题严重,以多药耐药为主,耐药谱型呈多样化。  相似文献   

Comparison of Drug Resistance of E.coli from Pigs in Different Regions under the Same Breeding Mode     

XIA Xu-jin  CHENG Wei-hua  XIA Li-ning  SU Zhan-qiang 《中国畜牧兽医》2015,42(8):2189-2193

In order to compare the resistance of E.coli from pigs of different regions under same breeding mode in Xinjiang, we collected fecal samples from pig farms of Hutubi (207), Manasi (210) and Changji (210) in a certain scale, respectively, a total of 627 samples, and isolation rate of E.coli from fecal samples were all 100.0%.The broth dilution method was used to detect resistance of E.coli to antimicrobials, and we compared the differences of resistance rate of E.coli from pig farms in three regions by chi square test. E.coli from pig farms of Hutubi region to apramycin, amikacin, amoxicillin-clavulanic acid and ceftiofur existed extremely significant differences comparing with another two regions (P< 0.01).E.coli from pig farms of Manasi region to ciprofloxacin existed significant differences comparing with another two regions (P< 0.05), and existed extremely significant differences to norfloxacin (P< 0.01).E.coli from pig farms of Changji region to norfloxacin had extremely significant differences comparing with Hutubi region (P< 0.01), and existed significant differences to amoxicillin-clavulanic acid and ampicillin comparing with Manasi region (P< 0.05).3 to 8 resistant E.coli strains accounted for 94.7% in Hutubi region, 3 to 7 resistant E.coli strains accounted for 89.5% in Manasi region and 4 to 8 resistant E.coli strains accounted for 82.4% in Changji region, respectively.There was no significant difference among different regions on multi-drug resistance (P> 0.05).The results indicated that E.coli from pigs of different regions under the same breeding mode had different characteristics of resistance.In addition, the resistance of E.coli from pigs were very serious and mainly multi-drug resistant, drug resistance patterns were diversified.  相似文献   

猪m6A甲基化酶WTAP基因与F18大肠杆菌感染的关系     

肖叶懿  郜重丞  包文斌  吴正常  吴圣龙 《畜牧兽医学报》2021,52(6):1709-1716

本研究旨在探讨猪m⁶A甲基化酶WTAP表达水平与大肠杆菌（E. coli）感染抗性的关系。选取35日龄苏太断奶仔猪（Sus scrofa）大肠杆菌抗性型和敏感型个体各4头,采集十二指肠和空肠组织,利用RT-qPCR检测WTAP在E. coli抗性型和敏感型个体十二指肠、空肠的表达差异,并分别利用产肠毒素大肠杆菌（F18ab、F18ac）刺激和内毒素（LPS）诱导猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）,检测WTAP基因的表达变化。同时构建WTAP基因干扰载体并转染IPEC-J2细胞,通过菌毛定量、菌落计数以及间接免疫荧光试验检测该基因沉默对大肠杆菌黏附能力的影响。结果显示：在十二指肠和空肠组织中,WTAP基因在E. coli抗性型个体中的表达量显著高于敏感型个体（P<0.01）;并且在F18ab和F18ac刺激后表达量显著下降,与LPS诱导6 h后结果相一致（P<0.01）。沉默WTAP基因后,大肠杆菌黏附能力极显著上升（P<0.01）。本研究在细胞和个体水平上验证发现,m⁶A甲基转移酶WTAP的高表达可能有助于仔猪抗大肠杆菌感染,为进一步揭示仔猪抗大肠杆菌感染的RNA甲基化调控机制奠定基础。  相似文献   

奶牛乳腺炎模型的建立及炎症相关因子基因mRNA转录水平的分析     

罗仍卓么  王晋鹏  焦鹏  李彦霞  董益闻  魏大为  王兴平 《畜牧兽医学报》2022,53(8):2763-2772

旨在探讨金黄色葡萄球菌（S.aureus）型和大肠杆菌（E.coli）型乳腺炎奶牛乳腺组织的炎症相关因子基因的mRNA转录水平。将10⁵ CFU·mL^-1的S.aureus和E.coli经乳导管分别注入奶牛乳房,在感染第7天采用活体无菌手术法采集乳腺组织,并采用组织HE染色和免疫荧光法进行乳腺炎模型的鉴定;利用qPCR分别检测了2个诱导组和对照组奶牛乳腺组织的趋化因子家族（CCL2、CCL8、CXCR1、CXCL2和CXCL13）、补体因子（CFI和CFB）、自噬调节因子DEPP1和白细胞介素受体IL21R共9个基因的mRNA转录水平。结果显示：与对照组相比,TLR4/NF-κB炎症相关信号通路中的关键分子（TLR4、NF-κB和TNFα）在2个诱导组乳腺组织中的蛋白表达水平均极显著上调（P<0.01）;结合HE染色结果,表明本试验成功构建了2种类型的奶牛乳腺炎活体模型。mRNA转录水平的检测结果表明,与对照组相比,7个基因（CCL2、CCL8、CXCR1、CXCL2、CFI、CFB和IL21R）在2个诱导组乳腺组织中的mRNA转录水平均极显著上调（P<0.001）,CXCL13的mRNA转录水平仅在S.aurues诱导组乳腺组织中极显著上调（P<0.01）;DEPP1的mRNA转录水平在2个诱导组中均极显著下调（P<0.01）。此外,CCL2、CCL8、CXCR1、CFI和IL21R共5个基因在E.coli诱导组中的mRNA转录水平均极显著高于S.aureus组（P<0.01）。S.aureus和E.coli感染均可导致奶牛产生严重的临床乳腺炎症状,并促使上述炎症相关基因的mRNA转录水平在乳腺组织中发生变化,以应对乳腺炎症的发生与发展过程;趋化因子CCL2等5个基因在E.coli诱导组中的mRNA转录水平显著高于S.aureus诱导组,解释了E.coli常常能引起急性乳腺炎,而S.aureus可引起慢性乳腺炎的原因。上述结果可为深入研究不同类型乳腺炎的分子调控机制提供参考。  相似文献   

猪m6A去甲基化酶FTO、ALKBH5基因表达水平与大肠杆菌F18感染抗性的关系分析     

齐晓艺  杨荔  吴正常  包文斌  吴圣龙 《中国畜牧兽医》2020,47(9):2960-2967

为了探讨猪6-甲基腺嘌呤（m⁶A）去甲基化酶mRNA表达水平与仔猪大肠杆菌F18抗性的关系,本研究运用实时荧光定量PCR方法检测m⁶A去甲基化酶FTO和ALKBH5基因在35日龄苏太猪断奶仔猪大肠杆菌F18抗性型和敏感型个体十二指肠和空肠组织中的mRNA表达差异,同时分别利用F18ab、F18ac大肠杆菌菌体刺激和内毒素LPS诱导猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）,检测FTO、ALKBH5基因表达变化。结果表明,FTO、ALKBH5基因在抗性型个体十二指肠和空肠中的表达量均极显著或显著高于敏感型个体（P<0.01,P<0.05）;不同F18大肠杆菌菌体刺激IPEC-J2细胞后,FTO基因表达水平均无显著变化（P>0.05）,而ALKBH5基因在F18ac刺激后表达量显著上调（P<0.05）;LPS诱导4 h时,FTO和ALKBH5基因表达量均显著上调（P<0.05）。本研究在细胞和个体水平上初步验证并发现了m⁶A去甲基化酶FTO和ALKBH5基因表达水平与大肠杆菌感染仔猪密切相关,为今后深入研究RNA去甲基化修饰在仔猪细菌性腹泻调控中的作用机制提供了理论基础。  相似文献   

Relationship Between Expression Levels of Porcine m6A Demethylases FTO and ALKBH5 Genes and Resistance to E.coli F18 Infection     

QI Xiaoyi  YANG Li  WU Zhengchang  BAO Wenbin  WU Shenglong 《中国畜牧兽医》2007,47(9):2960-2967

To investigate the relationship between the mRNA expression level of m⁶A demethylase and E.coli F18 resistance in piglets,Real-time quantitative PCR was used to detect the mRNA expression differences of m⁶A demethylase FTO and ALKBH5 genes in the duodenum and jejunum tissues of E.coli F18-resistant and -sensitive individuals from 35-day Sutai weaned piglets.In E.coli F18ab,F18ac bacteria-stimulated and endotoxin LPS-induced porcine small intestinal epithelial cells (IPEC-J2),the expression levels of FTO and ALKBH5 genes were detected,respectively.The results showed that the expression levels of FTO and ALKBH5 genes in the duodenum and jejunum of resistant individuals were extremely significantly or significantly higher than those of sensitive individuals (P<0.01,P<0.05),and the expression of FTO gene were not significantly changed in E.coli F18 bacteria-stimulated IPEC-J2 cells (P>0.05),but the expression levels of ALKBH5 gene were significantly up-regulated after F18ac stimulation (P<0.05).After LPS induction for 4 hours,the expression levels of FTO and ALKBH5 genes showed significant up-regulation in IPEC-J2 cells (P<0.05).This study preliminarily verified and indicated that the expression levels of m⁶A demethylases FTO and ALKBH5 genes were closely related to E.coli resistance of piglets at the cellular and individual levels,which will provide a theoretical basis for future in-depth study of the regulation mechanism of RNA demethylation modification on bacterial diarrhea in piglets.  相似文献   

甜叶菊绿原酸增强大肠杆菌感染蛋雏鸡免疫力研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

卓春柳  王方方  钟翠红  王斌  石玉祥  徐美利  武亚南  张永英 《畜牧兽医学报》2021,52(8):2200-2212

旨在评价甜叶菊绿原酸增强人工腹气囊感染大肠杆菌O₇₈蛋雏鸡免疫力的作用效果,为功能性抗生素替代品研发提供基础参数支持。本试验随机将1日龄、体重无显著差异的健康海兰蛋鸡360只分为6组：空白对照组（C）、大肠杆菌O₇₈处理组（EC0）、1.0 g·L^-1杜仲素+大肠杆菌O₇₈处理组（ED1）、1.0 g·L^-1甜叶菊绿原酸+大肠杆菌O₇₈处理组（EC1）、2.0 g·L^-1甜叶菊绿原酸+大肠杆菌O₇₈处理组（EC2）、4.0 g·L^-1甜叶菊绿原酸+大肠杆菌O₇₈处理组（EC4）,预饲7 d后开始正式试验。第7天时将大肠杆菌O₇₈通过腹气囊感染蛋雏鸡,饮水投喂药物,每天1次,连用3 d。随后通过ELISA法检测血清IL-1β、IL-2、IL-6、IgM、IgA、TNF-α水平;RT-qPCR检测空肠和回肠IL-1β、IL-2、TNF-α、Claudin-1和ZO-1基因表达;高通量测序分析盲肠内容物微生物种类。结果显示：1）腹气囊感染大肠杆菌O₇₈显著增加了蛋雏鸡死亡率（P<0.05）,而甜叶菊绿原酸处理组（EC2、EC4）蛋雏鸡的死亡率显著降低（P<0.05）。2）甜叶菊绿原酸对大肠杆菌O₇₈感染蛋雏鸡血清IgA和IgM含量有提高趋势,可不同程度降低血清炎性因子含量,其中EC1、EC2、EC4组血清TNF-α含量显著降低（P<0.05）;EC2显著降低大肠杆菌O₇₈感染蛋雏鸡回肠促炎细胞因子IL-1β、IL-2、TNF-α的基因表达（P<0.05）。3）甜叶菊绿原酸可促进蛋雏鸡空肠紧密连接蛋白基因表达,改善腹气囊感染大肠杆菌O₇₈对肠道屏障的损伤。4）腹气囊感染大肠杆菌O₇₈导致鸡肠道特有OTUs增加,增加肠道拟杆菌门、变形菌门和梭杆菌门的相对丰度,降低厚壁菌门的相对丰度;而甜叶菊绿原酸处理组（EC2）蛋雏鸡盲肠厚壁菌门的相对丰度升高,拟杆菌门和变形菌门的相对丰度降低。甜叶菊绿原酸可增强腹气囊感染大肠杆菌O₇₈蛋雏鸡机体的免疫功能,抵御大肠杆菌O₇₈对蛋雏鸡的侵袭,其中应用剂量为2.0 g·L^-1甜叶菊绿原酸的效果较好。这预示绿原酸具有抗生素替代品的功效,其对大肠杆菌感染蛋雏鸡机体免疫力的积极作用可能是通过调控免疫相关基因和维持盲肠微生物菌群稳态达到的,但其作用机制仍需深入的研究。  相似文献   

Effects of SLT-Ⅱe on Cytokines of Inflammatory Response Secreted by PIMVECs     

WANG Weiran  SHI Xiaojie  ZHANG Meng  MU Xiang 《中国畜牧兽医》2007,47(11):3467-3473

The aim of the study was to investigate the changes of TNF-α,P-selectin,ICAM-1,NO and ET in porcine intestinal microvascular endothelial cells (PIMVECs) treated with Escherichia coli Shiga-like toxin type Ⅱ variant (SLT-Ⅱe).SLT-Ⅱe was extracted from Escherichia coli by using ultracentrifugation,and the concentration was determined by BAC kit.The purity of SLT-Ⅱe was detected by SDS-PAGE and Western blotting.The optimal incubation time (0,2,4,8,12,24 h) and concentration of SLT-Ⅱe (0.1,0.5,1,5,10 μg/mL) on PIMVECs were evaluated by WST-1.The levels of TNF-α,P-selectin,ICAM-1,NO and ET in cell culture supernatant of control group (0 μg/mL SLT-Ⅱe) and test group (1 μg/mL SLT-Ⅱe) were detected by ELISA.The results showed that using ultracentrifugation could extract pure SLT-Ⅱe with a concentration of 721.75 μg/mL.1 μg/mL SLT-Ⅱe could significantly reduce the activity of PIMVECs after 8 h (P<0.01) and significantly increase the TNF-α secretion of PIMVECs after 9 and 12 h treatment (P<0.05).The NO/ET values at 9 and 12 h were significantly higher than that in the control group (P<0.05).After 9 and 12 h treatment the content of P-selectin was significantly increased (P<0.05) and the levels of ICAM-1 was significantly increased at 12 h (P<0.05).In summary,1 μg/mL SLT-Ⅱe could induce the increase of TNF-α,P-selectin,ICAM-1 and NO/ET secreted by PIMVECs,which laid a foundation for studying the pathogenesis of piglet edema disease.  相似文献   

PGD2/DP1途径对细菌感染奶牛子宫内膜组织中HMGB-1和PAFR表达的影响     

杨效林  韩润林  毛伟  包海霞  刘昆  吴金迪  曹金山  刘博 《中国畜牧兽医》2021,48(6):2169-2176

为了研究前列腺素D₂（prostaglandin D₂,PGD₂）/DP₁受体途径对大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）感染奶牛子宫内膜组织中炎症介质HMGB-1和PAFR的表达及对组织损伤程度的影响,试验以体外培养奶牛子宫内膜组织为研究对象,应用1×10^-6 mol/L DP₁受体激动剂（BW-245C和15d-PGJ2）和等量（1×10⁶ CFU/mL）大肠杆菌、金黄色葡萄球菌共同处理奶牛子宫内膜组织,采用实时荧光定量PCR、免疫组化和HE染色法检测奶牛子宫内膜组织中HMGB-1和PAFR的表达并评价组织损伤情况。结果显示,与空白对照组相比,大肠杆菌和金黄色葡萄球菌感染奶牛子宫内膜组织中HMGB-1和PAFR表达量显著升高（P<0.05）,而DP₁受体激动剂与大肠杆菌和金黄色葡萄球菌共处理奶牛子宫内膜组织中DP₁受体激动剂显著抑制奶牛子宫组织中HMGB-1和PAFR的表达（P<0.05）。HE染色结果显示,大肠杆菌与金黄色葡萄球菌感染的奶牛子宫内膜组织上皮细胞和腺上皮细胞完全脱落、坏死、崩解;而DP₁受体激动剂、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌共同处理奶牛子宫内膜组织中,DP₁受体激动剂的加入显著减轻奶牛子宫内膜组织的损伤程度（P<0.05）。免疫组化染色法结果与以上两种方法结果一致。结果表明,PGD₂能够抑制大肠杆菌与金黄色葡萄球菌感染的奶牛子宫内膜组织中损伤相关因子HMGB-1、PAFR的表达,减轻组织损伤程度,这一作用可能是由DP₁受体所介导的。  相似文献   

苦参苍术颗粒对大肠杆菌感染肉鸡肝组织胆固醇代谢的调节作用     

未张怡  韩飞  范婷婷  陈子贤  李寒梅  袁非凡  丛日华  李贤 《畜牧兽医学报》2023,54(1):392-402

旨在探究苦参苍术颗粒是否通过调节肝组织胆固醇代谢，改善致病性大肠杆菌诱导的肉鸡肝组织胆固醇合成异常。将40只21日龄白羽肉鸡随机分为空白对照组、模型对照组、苦参苍术低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组8只。模型对照组和苦参苍术组分别胸部肌肉注射0.7 mL致病性大肠杆菌菌液(8.37×10⁸ CFU·mL^-1),苦参苍术组在接种菌液24 h后，在饮水中分别添加不同剂量的苦参苍术颗粒(低剂量组：3.6 g·L^-1,中剂量组：5.5 g·L^-1,高剂量组：7.3 g·L^-1),自由饮水，连用7 d。试验结束，所有试验肉鸡处死，收集血液，采集组织样品，称体重和各器官重；采用石蜡切片技术观察肝组织形态变化；检测血清和肝组织中总胆固醇(total cholesterol, TCH)、甘油三酯(hepatic triglyceride, TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein-cholesterol, HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low-densi...  相似文献   

Screening of Probiotics Inhibiting E. coli K88 in vitro     

WANG Lei  LV Yang  ZHANG Yue  XIE Jia-qian  ZHAO Di  YAN Li-qiong  MEI Hui-min  WANG Lei  YI Dan  CHEN Hong-bo  DING Bin-ying  HOU Yong-qing  WU Tao 《中国畜牧兽医》2016,43(5):1355-1360

The probiotics tested in the experiment were isolated from the intestinal of weaning piglets.The isolated probiotics and E.coli K88 were inoculated into the culture of intestinal porcine epithelial cell-1 (IPEC-1).The activity of lactate dehydrogenase (LDH) in the supernatant was measured after incubating for 2.5 h.At the same time, the probiotics and E.coli K88 were co-cultured in vitro, the number of E.coli K88 was counted and the probiotics which could be resistant to the E.coli K88 were selected 2.5 h later.The results showed that the Lactobacillus casei and Bacillus coagulans could significantly reduce LDH activity (P<0.05), decrease the damage of E.coli K88; Bacillus coagulans could inhibit the growth of E.coli K88.At the same time, Bacillus coagulans could resist high temperature, acid and bile salt.The results showed that Bacillus coagulans strains had great potential as the application of probiotics strains.The methods could be used as a model of screen probiotics which could inhibit the growth of E.coli K88 in vitro.  相似文献