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小鼠卵胞浆内单精子注射(ICSI)的开展使解冻后的精子无需具有活动能力就可以使卵子受精和发育,因此多种简单的精子冻存方法被开发。从复苏后精子受精和支持胚胎发育的能力,以及DNA甲基化方面研究比较无冷冻保护剂的条件下-20℃和-196℃冻存的两种方法。结果表明,两种方法都不改变胚胎DNA甲基化状态,-196℃保存的精子的受精率和胚胎发育率降低,但是通过卵子激活可以修复受精和胚胎发育的能力。-20℃保存精子1个月不影响受精和胚胎发育能力,冻存6个月降低精子的受精和胚胎发育潜能。因此,-20℃短期保存精子是一种简单、有效且安全的方法。 相似文献
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试验旨在研究不同稀释液对湖羊精液的4℃保存效果,同时探讨不同种类及浓度的冷冻保护剂对湖羊精液冷冻保存效果的影响。选择6种常见的绵羊精液稀释液配方,检测湖羊精液稀释后精子活力变化,分析精子存活时间及生存指数;另选取6种常见的精子冷冻保护剂,分3组浓度(5%、10%、15%)添加,检测细管冻精解冻后的精子活率。结果表明,6种稀释液对湖羊精液的4℃保存效果存在显著差异,其中F稀释液保存效果最佳。冷冻保护剂的种类和添加比例对湖羊精液的冷冻保存效果都存在影响,稀释液中添加5%的丙三醇对湖羊精液的冷冻保存效果最佳。 相似文献
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筛选比较了不同保存液、保护剂、降温方式、解冻方式对缺帘鱼精液超低温保存活力的影响,初步解释了缺帘鱼精子经超低温短期保存后活力明显较鲜精低的原因.结果显示:Ringer's液作为保存液,16%二甲亚砜作为保护剂,选取五步法超低温冷冻保存精子[精子缓慢降温至-150℃→液氮面上3 cm(约-170℃),停留4 min→液氮面(约-190℃),停留1 min→液氮];40℃水浴解冻取得最好的冻后活力,解冻后精子活力为(35.2±4.5)%. 相似文献
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用猪冷冻精子进行体外受精和单精子胞浆内注射(ICSI),并研究添加L-半胱氨酸及不同成熟培养法对猪ICSI胚胎发育的影响。结果表明:用猪冷冻精子生产的ICSI胚胎卵裂率及囊胚发育率分别为68.3%和11.4%,均低于用冷冻精子进行体外受精(IVF)所获得的卵裂率和囊胚发育率(分别为76.9%和19.2%,P<0.05)。在培养液中添加1.71mmol·L~(-1) L-半胱氨酸培养3 h,无论是卵裂率、桑椹胚发育率,还是囊胚发育率,均未得到明显改善(P>0.05);采用含0.4%BSA的NCSU-23培养液进行猪卵母细胞成熟培养,ICSI胚胎卵裂率虽明显高,但各组所获胚胎发育率均无显著差异(P>0.05),表明所用卵母细胞的成熟方法并未对ICSI胚胎发育产生明显的影响;用颗粒细胞或卵丘细胞共培养ICSI胚胎后,卵裂率有明显提高(P<0.05),但各组囊胚发育率无统计学差异。 相似文献
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超低温保存对藏獒犬精子质量及超微结构的研究(英文) 总被引：1，自引：0，他引：1
[目的]该研究旨在观察超低温保存对藏獒犬精子质量及超微结构的影响。[方法]通过精子运动度、膜完整率及顶体完整率评价4种冷冻保护剂、冷冻时距液氮面3种不同高度及添加物(SDS和Vc)对精子超低温冷冻效果的影响;在此基础上,在扫描电镜和透射电镜下观察超低温冷冻对精子超微结构的影响。[结果]试验1表明,EG作为冷冻保护剂获得了最好的冷冻效果,解冻后精子运动度、膜完整率及顶体完整率分别为36.3%、38.0%和42.0%。但EG和甘油作为冷冻保护剂并无显著差异存在(P>0.05)。试验2表明,距离液氮面5cm冷冻时冷冻效果最好。但除顶体完整率外,冷冻高度2和5cm间不存在显著差异(P>0.05)。试验3表明,稀释液中单独或共同添加十二烷基磺酸钠(SDS)和维生素C(Vc)均能改善精子冷冻-解冻效果。单独添加SDS或Vc时,除单独添加Vc组表现精子冷冻-解冻后运动度更低外(P<0.05),其它指标并无显著差异存在(P>0.05)。共同添加SDS和Vc时,精子冷冻效果最好,精子解冻后运动度、膜完整率和顶体完整率分别为44.1%、48.0%和48.2%。超微结构显示超低温保存引起藏獒犬精子不同程度的损伤,顶体损伤更严重,如顶体肿胀、囊泡化,甚至顶体消失。[结论]冷冻保护剂EG、距液氮面5cm高度及共同添加SDS和Vc可提高精子超低温保存效果,但超低温对精子超微结构仍具有一定损伤作用。 相似文献
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供体细胞的同步化处理可能改变其表观遗传特性,进而影响胚胎的克隆效率。研究同步化处理对小鼠胎儿成纤维细胞(mouse embryonicf ibroblasts,MEFs)组蛋白H3K9甲基化、乙酰化及组蛋白H3K4单甲基化、三甲基化表达的影响。分离培养MEFs,增殖稳定的第3代MEFs分别用5mL/L血清饥饿处理4d或15mL/LDM-SO处理2d使细胞处于增殖抑制期,通过免疫组化染色和Image-J图像处理软件,相对定量比较不同处理情况下组蛋白H3K9甲基化、乙酰化和组蛋白H3K4单甲基化、三甲基化变化情况。Ki-67染色检测结果表明,两种同步化处理可使细胞处于G0期或G1期。DMSO处理使MEFs组蛋白H3K9乙酰化表达水平升高,而5mL/L血清饥饿处理则使其表达水平下降;此外,两种同步化处理均导致组蛋白H3K9甲基化和H3K4单甲基化表达下降,但不影响组蛋白H3K4三甲基化的表达水平。研究结论表明:同步化处理可改变MEFs组蛋白乙酰化和甲基化表达水平,进而有可能影响胚胎克隆效率。 相似文献
8.
以自然海水为基础溶液,用二甲亚砜、乙二醇、甘油分别配制不同体积分数的抗冻保护剂溶液,用以激活虾夷马粪海胆精子并且观察其精子活力、受精率及其形态学上的改变。结果表明,经4%~18%的抗冻保护剂处理过的样本精子皆可被激活,并具有受精能力,若抗冻保护剂浓度达到18%以上,则精子全部失活。经4%乙二醇处理过的样本精子活力为最高,平均可达到76.44%(P≤0.05),但在各浓度梯度的样本中均以二甲亚砜处理过的样本受精率最高。这3种抗冻保护剂均对虾夷马粪海胆精子有毒害作用,并且对其精子的活力和受精率有一定的影响。 相似文献
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【目的】研究不同精子数量对小鼠体外受精与胚胎早期发育的影响,通过比较分析进一步完善小鼠的辅助生殖技术。【方法】试验随机选用9周龄C57BL/6雄鼠附睾尾获取的精子放入HTF培养液,在二氧化碳培养箱中培养1 h后通过精子计数计算1、3、5、10、15、20 μL精子溶液的精子数量,并吸取相应的精子溶液于4周龄C57BL/6雌鼠超排后获取的卵母细胞团中,体外培养24 h后计算体外受精率与2-细胞胚胎发育率。【结果】1、3、5、10、15、20 μL精子溶液的精子数量分别为0.25(±0.23)×10~6、1.23(±0.31)×10~6、2.03(±0.35)×10~6、3.95(±0.33)×10~6、6.50(±0.76)×10~6、9.88(±0.52)×10~6个/mL;同时,小鼠体外受精率分别为88.92%、95.17%、94.29%、90.56%、85.89%、78.26%,其中2-细胞胚胎率分别为78.21%、81.75%、81.51%、77.42%、70.47%、50.76%。精子数量为1.23(±0.31)×10~6、2.03(±0.35)×10~6个/mL的体外受精率与2-细胞胚胎发育率较好,差异不显著,但极显著高于精子计数为6.50(±0.76)×10~6、9.88(±0.52)×10~6个/mL的情况。【结论】不同的精子数量对小鼠体外受精与胚胎早期发育影响有显著性差异,精子数量为1.23(±0.31)×10~6～2.03(±0.35)×10~6个/mL时能有效提高小鼠的体外受精率并促进胚胎的正常发育。 相似文献
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不同品系小鼠精子冷冻及冻融精子体外受精的研究 总被引：6，自引：1，他引：6
采用小鼠精子冷冻、冻融精子体外受精的方法,进行小鼠保种、引种、生物净化及品系标准化的可行性研究,并初步探究小鼠精子冷冻的影响因素。实验选用同一年龄5种不同品系小鼠分别进行精子冷冻、复苏,并比较各品系冷冻效果及冻融精子的体外受精(IVF)率。结果显示,冷冻后各品系小鼠精子复苏存活率约在15%～50%之间;冻融小鼠精子体外受精结果随遗传背景的不同差异显著,受精率分别为:KM小鼠68.4%、ICR小鼠30.3%、DBA/2J小鼠47.2%、C57BL/6J小鼠6.8%、BALB/cA小鼠25%。冻融精子IVF得到的胚胎可以耐受体外培养。 相似文献
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对中间球海胆Strongylocentrotus intermedius精子的超低温保存技术进行了研究。以煮沸消毒海水为基础液,添加体积分数为10%的DMSO、体积分数为6%的甘油以及25 mmol/L海藻糖配制成冷冻保护液,与鲜精液按体积比以1∶1混合,在4℃下平衡15 min,于液氮面上方15、3 cm处分别停留3 min和5 min,然后浸入液氮保存。结果表明：用此方法保存的精子解冻后其存活率可达58.2%,受精率达24.7%;解冻后精子受精时,在受精海水中分别添加0、28、56、112、280 mmol/L的葡萄糖,56 mmol/L组的受精率高于其他组,受精率达26%;精子解冻后受精时,在受精海水中添加适量葡萄糖有助于提高受精率。本试验表明,冷冻过程中降温方式、冷冻保护液、平衡时间对精子的冷冻保存效果均有较大影响,各个因素通过优化组合可以大大提高解冻后精子的存活率和受精率。 相似文献
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为了探讨超低温（-196℃）对精子的损伤机理,采用试剂盒测定了冷冻前后俄罗斯鲟精浆和精子中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）和谷胱甘肽还原酶（GR）等酶活性。结果表明,经过超低温冷冻保存后,俄罗斯鲟精子活力下降,添加抗冻保护液冷冻后的精浆中SOD、CAT、GSH—PX活性较鲜精组显著升高（P〈0．05）,较未添加保护液组显著降低（P〈0．05）,GR的活性则显著低于鲜精组（P〈0．05）,但显著高于未添加保护液组（P〈0．05）;添加抗冻保护液冷冻后的精子中SOD、CAT、GSH—PX活性较鲜精组显著降低（P〈0．05）,较未添加保护液组显著升高（P〈0．05）,GR活性则显著高于鲜精组（P〈0．05）,但显著低于未添加保护液组（P〈0．05）。这说明超低温冷冻对俄罗斯鲟精子的抗氧化系统产生了较大影响,成为影响精子活力的一个重要原因。 相似文献
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[目的]使用低温定向冷冻方法建立有效的精子冻存条件。[方法]采用低温定向冷冻方法冻存食蟹猴精液,并与常规方法进行对比,探讨冷冻方法和甘油浓度对精子冷冻存活率的影响。[结果]在相同甘油浓度下,低温定向冷冻的食蟹猴精子的活力与顶体完整性显著高于常规冷冻法(P0.05),定向冷冻方法在保存食蟹猴精液效果明显优于常规冷冻方法,且甘油浓度5%时能够达到更好的冷冻效果。[结论]与常规冷冻相比,低温定向冷冻能显著提高精子存活率。在食蟹猴的精液冻存中,采用定向冷冻仪冻存精液能达到较好的冻存效果。 相似文献
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HSP90蛋白表达量与牛精子抗冻性的关系 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】探索热应激蛋白90（HSP90）表达量与牛精液冷冻-解冻后品质的关系。【方法】采用假阴道法采集身体健康、年龄2～4岁的9头荷斯坦奶牛精液（编号1～9）,测定新鲜精液指标（活力、形态、活率和密度）,评定其品质,合格的精液样品经过冷冻解冻后检测其精子活率、质膜完整率和顶体完整率,并根据冻后品质将其分为HFTs(High freezing resistance teams)和LFTs（Low freezing resistance teams) 2组,对精子HSP90蛋白进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳和Western blot检测,分析其表达量与精子抗冻性的关系。【结果】不同牛个体精液冻后品质相差较大。SDS-PAGE电泳结果显示,HFTs组的分子质量约为90 ku的蛋白表达量显著高于LFTs组（P＜0.05）,经Western blot分析,该蛋白为HSP90。HSP90蛋白表达量与冷冻-解冻后的牛精子品质呈明显正相关,其与精子活率、顶体完整率、质膜完整率的相关系数分别为0.364,0.447和0.402。【结论】HSP90蛋白表达量可以作为判断牛精子抗冻性的指标之一。 相似文献
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In order to prolong semen preservation and improve pregnancy rate, semen freezing was studied with German shepherd dogs for experimental animals. The semen of four dogs was collected 40 times in four d... 相似文献
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中国红豆杉种子超低温保存技术研究 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】探索中国红豆杉种质资源的超低温保存技术,为红豆杉种质资源的开发利用提供支持。【方法】采用多重单因素试验法,将中国红豆杉种子前处理后,采用9种不同的冷冻保护剂处理,之后分别进行0 ℃冷浴静置、25 ℃室温0.6 MPa抽真空和冰浴250 W超声波处理,处理时间分别为0,5,10和15 min;然后按照4种不同的冷冻方式投入液氮中冷冻保存,保存结束后分别采用37 ℃水浴快速、20 ℃流动自来水、5 ℃慢速和25 ℃室温静置进行解冻,最后探讨了在较优的3种冷冻保护剂条件下保存时间对红豆杉种子活力的影响。以氯化三苯基四氮唑（TTC）还原法测定冷冻保存后种子的活力。【结果】冷冻保护剂、保护剂处理方式和处理时间、冷冻方式、解冻方式、保存时间均对超低温冷冻保存后的红豆杉种子活力具有明显影响。9种冷冻保护剂中较优的是体积分数8%二甲基亚砜（DMSO）、体积分数5%乙二醇和PVS-4,冻存后中国红豆杉种子TTC还原量分别为（2.679 7±0.255 6）、（2.290 4±0.040 7）和（2.055 5±0.009 9） mg/g;冰浴250 W超声波处理10 min的效果最好,TTC还原量为（2.143 1±0.098 6） mg/g;4种冷冻方式中－20 ℃预冻1 h后投入液氮保存红豆杉细胞活性相对较高,TTC还原量为（2.454 4±0.069 5） mg/g。37 ℃水浴快速解冻后细胞活力更高,TTC还原量为（2.469 7±0.022 1） mg/g。【结论】红豆杉种子的最佳超低温保存技术条件为：采收后的新鲜种子干燥后于5 ℃条件下放置9个月打破其休眠,然后机械去掉种子硬壳,用蒸馏水浸泡12 h,脱去种子内皮,在无菌条件下用体积分数75%酒精消毒30 s,无菌水冲洗2～3次,沥干,移入冷冻管中,加入体积分数8% DMSO冷冻保护剂,封口,于冰浴250 W超声波条件下浸泡处理10 min,于-20 ℃预冻1 h后置于液氮中冷冻保存72 h,然后在37 ℃水浴中快速解冻。在此条件下,中国红豆杉种子活力最高,TTC还原量可达（2.469 7±0.022 1） mg/g,而且同等条件下,选用PVS-4冷冻保护剂更有利于红豆杉种子的超低温长期（1个月以上）保存。 相似文献
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添加剂在猪精液冷冻保存中的应用 总被引：1，自引：1，他引：0
猪精液的冷冻保存显著影响猪精子的运动学参数,损伤精子质膜、顶体和DNA完整性,降低解冻后精子活率和受精能力.近年来,在以甘油和蛋黄作为冷冻保护剂的基础上,为了有效降低冷冻-解冻对精子的损伤,提高解冻精液的受精能力,研究人员将OEP、抗氧化剂(甲基黄嘌呤、丁羟基甲苯、谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、褪黑素和维生素E等)、2-羟丙基β环糊精以及透明质酸等物质作为添加剂应用于猪精液的冷冻保存,结果表明这些物质在保护精子质膜和顶体完整性,提高解冻后精子活力、活率和受精能力等方面均有显著作用. 相似文献
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马鹿粪便样品保存方法对DNA提取质量的影响 总被引：4，自引：0，他引：4
采用冷冻法采集、保存马鹿粪便DNA样品,并将冷冻保存、乙醇浸泡保存和干燥后保存的样品进行DNA提取测试、比较分析。结果表明,采用冷冻保存法保存的马鹿粪便样品DNA提取的质量明显优于酒精浸泡和干燥保存方法,此方法采集和保存简单,试验省时、经济,可应用于寒冷地区冬季各种动物的粪便取样。 相似文献