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【目的】将透明颤菌血红蛋白(VHb)基因(vgb)在枯草芽孢杆菌中进行整合表达,提高β-半乳糖苷酶的产量。【方法】用枯草芽孢杆菌整合载体pA01和启动子P43构建vgb基因的整合表达载体pA-vgb,通过双交叉整合方式,将vgb基因整合到枯草芽孢杆菌DB104:bga的染色体上,构建枯草芽孢杆菌DB104:vbga。采用PCR和Southern blot对DB104:vbga进行检测,并通过发酵摇瓶试验研究VHb对β-半乳糖苷酶产量的作用。【结果】PCR与Southern blot检测结果表明,枯草芽孢杆菌DB104:vbga中vgb基因整合位置正确,且表达的VHb蛋白具有生物学活性。摇瓶试验结果表明,在转速250 r/min条件下,枯草芽孢杆菌DB104:vbga与DB104:bga的β-半乳糖苷酶活性无显著差异;在150 r/min的限氧条件下,vgb基因的表达促使DB104:vbga的β-半乳糖苷酶活性较DB104:bga提高了14.9%。【结论】vgb基因可用于提高枯草芽孢杆菌目的蛋白的产量。 相似文献
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白掌根腐病生防菌的筛选与鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
采用对峙培养法,从土壤中筛选出对白掌根腐病菌有拮抗作用的2株细菌菌株C3和S1;通过盆栽防治试验,结果显示2株拮抗细菌C3和S1对白掌根腐病的防效分别为55%和50%;通过16Sr DNA序列分析,拮抗细菌菌株C3和S1与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的序列相似性达99%;通过构建系统发育树,菌株C3与枯草芽孢杆菌在同一分支上,而菌株S1不在同一分支上。因此,初步将拮抗细菌菌株C3和S1分别鉴定为枯草芽孢杆菌和芽孢杆菌(Bacillus sp.)。 相似文献
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一株芽孢杆菌16S rRNA的基因序列测定和系统进化分析 总被引：1，自引：0，他引：1
从河南黄河稻区土壤中分离出一株具有较强稻瘟病菌拮抗活性的芽孢杆菌菌株BS501,经过形态观察、生理生化特性检测和电镜技术,确定其为芽孢杆菌属细菌,为进一步确定其分类学地位,扩增了 BS501基因组的16S rDNA.并将测序结果提交GenBank数据库(登录号:FJ755787).利用BLAST软件将该序列与枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等芽孢菌属细曲及大肠杆菌16S rDNA序列进行同源性比对.系统进化树表明,BS501与芽孢菌属细菌存进化关系上组成一个大的分支,与枯草芽孢杆菌最为接近,与大肠杆菌较远.同源性分析表明该序列与枯草芽孢杆菌PRE23同源性达99%,证实该菌株的分类学地位为枯草芽孢杆菌. 相似文献
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枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体的构建及木聚糖酶基因的表达 总被引：1，自引：0，他引：1
构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体并用菌体自身信号肽引导表达外源木聚糖酶基因,为枯草芽孢杆菌木聚糖酶高效分泌表达系统的建立奠定基础。利用基因工程的原理和方法,将壮观霉素抗性基因(spec)与短小芽孢杆菌的木聚糖酶基因(xynA)克隆到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭表达载体GJ148上,构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体pYG,将枯草芽孢杆菌信号肽Epr克隆到已构建载体上,以枯草芽孢杆菌WB700为表达宿主,引导木聚糖酶基因进行表达。最终成功构建枯草芽孢杆菌信号肽筛选载体pYG,将枯草芽孢杆菌信号肽Epr克隆到pYG上,在WB700中引导并表达木聚糖酶基因。试验证明信号肽筛选载体可以成功构建,在克隆入信号肽后可成功表达木聚糖酶基因,为信号肽的系统性筛选和木聚糖酶高效表达提供依据。 相似文献
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为获得猪呼吸系统的益生菌,以对疾病具有较强抗性的从江香猪为对象,从肺组织中分离到1株细菌Bp-1并对其进行形态学观察和生理生化特性鉴定,经克隆测序分析16SrDNA核苷酸序列和二级结构的相似性,利用琼脂扩散法和混菌拮抗培养法研究Bp-1对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和猪链球菌3种致病菌的抑制作用。结果表明:菌株Bp-1与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)位于同一分枝,相似性达100%;与已知枯草芽孢杆菌菌株168的16SrRNA可变区二级结构相比无明显差异,因此将Bp-1鉴定为枯草芽孢杆菌。枯草芽孢杆菌Bp-1的液体培养物对3种致病菌均有抑制作用;对大肠杆菌的拮抗作用较强,对金黄色葡萄球菌的拮抗作用较弱。枯草芽孢杆菌Bp-1可作为猪呼吸系统的益生菌对其深入研究。 相似文献
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枯草芽孢杆菌启动子序列在大肠杆菌中的克隆及序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
根据GenBank中枯草芽孢杆菌的P43启动子基因序列,设计合成了一对引物.用PCR方法钓取枯草芽孢杆菌AS.1655菌株的启动子基冈,PCR产物经琼脂糖凝胶回收纯化后,连接到pMD18T-simple载体上,进行序列测定.测序结果表明:枯草芽孢杆菌AS.1655菌株的启动子全长427 bp,由两个叠加的启动元件组成,分别为σ55和σ37RNA聚合酶识别的位点.与GenBank中的其他序列比较发现核苷酸的同源性为99.5%,氨基酸的同源性为98.6%,说明枯草杆菌P43启动子的基因序列高度保守. 相似文献
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《南京农业大学学报》2014,(6)
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168菌株基因组中含有编码surfactin合成酶系的srfA操纵子,却不产抗菌肽surfactin。运用同源重组的方法将外源的有活性的sfp基因(编码4'-磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶)整合入B.subtilis 168中,将其改造为产surfactin的菌株。通过分析多株枯草芽孢杆菌和解淀粉液化芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的sfp基因,从基因的上、下游找出较为保守的区域,设计引物,从枯草芽孢杆菌Nja-9中扩增sfp基因,将获得的sfp基因与P43启动子和终止子相连,构建了sfp基因表达框,并连接于枯草整合质粒pDG1730上,最终构建了枯草芽孢杆菌整合质粒pST-1730,利用pST-1730本身的淀粉酶E基因与B.subtilis 168菌株的基因组DNA进行同源重组整合,获得了产surfactin的重组菌株B.subtilis121。本研究为surfactin合成酶基因的改造和分析奠定了基础。 相似文献
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为了确定枯草芽孢杆菌224(Bacillus subtilis 224,BS224)的溶血基因或引起溶血的主效基因,以枯草芽孢杆菌224基因组DNA为模板,用PCR方法分别扩增yplQ基因上游约1.0 kb和yplQ基因下游0.5 kb两段DNA序列,并以携带新霉素抗性基因的重组质粒pMD18-T-neo为骨架,构建基于yplQ基因位点的基因阻断质粒pMD18-T-neo-yplQ,线性化后电转化至枯草芽孢杆菌224,通过新霉素抗性平板得到36个neor抗性转化子,基因组PCR鉴定和核苷酸测序证明,确定yplQ18为yplQ基因缺失菌株,将其接种到5%的绵羊血琼脂平板上进行溶血性检测,仍能引起溶血。结果表明,单独敲除枯草芽孢杆菌224染色体上yplQ基因对菌株的溶血性无影响或影响不大。 相似文献
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通过形态特征、培养条件及生理生化指标,结合16SrDNA分子序列测定,对黄瓜白粉病生防菌H1、H2进行了鉴定.结果表明:生防菌H1、H2的形态特征及22项生理生化指标与枯草芽孢杆菌相符;生防菌H1、H216SrDNA序列与Genbank数据库中枯草芽孢杆菌的相似性高于99.5%,因此,H1、H2均为枯草芽孢杆菌亚种(Bacillus subtilis subsp.ubtilis).综合上述结果,最终确定生防菌H1、H2为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis). 相似文献
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为探明笔者所在研究室前期从水稻不同生境中分离到的9株芽孢杆菌对水稻种子萌发、幼苗生长的影响,本研究以种子发芽率、幼苗建成(苗长、鲜质量)为指标,结果表明除了枯草芽孢杆菌BGW9,其余芽孢杆菌对提高种子发芽率差异不显著;枯草芽孢杆菌BT16、高地芽孢杆菌BYW11、蜡质芽孢杆菌JGN15、地衣芽孢杆菌JJN9能显著促进幼苗生长,而枯草芽孢杆菌BT6、蜡质芽孢杆菌JJN2、高地芽孢杆菌BYW11、枯草芽孢杆菌BGW9能显著提高幼苗鲜质量.在离体叶片上接种稻瘟病病菌评价其抗病性,研究发现高地芽孢杆菌BJW25、高地芽孢杆菌BYW11、蜡质芽孢杆菌JJN2、枯草芽孢杆菌BGW9的防治效果可达92％以上.根据促进水稻幼苗生长及稻瘟病防治综合测评,高地芽孢杆菌BYW11、枯草芽孢杆菌BGW9可作为防病促生菌进一步研究,为芽孢杆菌后续开发成生物肥料、生防菌剂提供理论基础. 相似文献
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为研究蜡样芽孢杆菌基因的转录调控特征,通过鸟枪法和蓝白斑筛选,获得57个蜡样芽孢杆菌启动子片段,并以β-半乳糖苷酶为报告基因,比较了这些启动子片段在大肠埃希菌中的转录活性。对转录活性较高的4个启动子克隆片断进行测序、序列比对、特征分析,发现这4个克隆序列具有启动子元件、核糖体结合序列特征,其中2个克隆序列在枯草芽孢杆菌也表现出活性,表明兼有蜡样芽孢杆菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌RNA聚合酶σ因子序列识别特征。 相似文献
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本试验采用盆栽方法,设置不施肥(CK)、单施化肥(HF)、单施有机肥(OF)、有机肥+低量枯草芽孢杆菌(BOL)、有机肥+中量枯草芽孢杆菌(BOM)、有机肥+高量枯草芽孢杆菌(BOH)和单施枯草芽孢杆菌(BS)共7个处理,研究其对穿心莲生长、有效成分含量及根际土壤理化性质的影响。结果表明,各生长时期3个有机肥配施枯草芽孢杆菌处理穿心莲的地上部鲜重、叶面积、叶片数、根重、叶片叶绿素含量各指标值大多显著高于对照、单施化肥、单施有机肥、单施枯草芽孢杆菌各处理。3个有机肥配施枯草芽孢杆菌处理植株地上部的穿心莲内酯、新穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和穿心莲总内酯含量也均显著高于对照、单施化肥和单施有机肥处理。3个有机肥配施枯草芽孢杆菌处理根际土壤pH值和土壤全氮、有效磷、速效钾含量高于对照、单施化肥、单施有机肥和单施枯草芽孢杆菌处理,且大多差异显著。有机肥配施高量枯草芽孢杆菌处理(BOH)根际土壤蔗糖酶活性显著高于其它6个处理;3个有机肥配施枯草芽孢杆菌处理根际土壤过氧化氢酶活性显著高于对照、单施化肥、单施枯草芽孢杆菌处理,有机肥配施中量、高量枯草芽孢杆菌处理根际土壤过氧化氢酶活性也显著高于单施有机... 相似文献
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从南海红树林木榄(Bruguiera gymnorrhizo)根际土壤中分离到一株具有拮抗杉木致害菌尖孢镰刀菌萎蔫专化型SF2(Fusariumoxysporum f.sp.vasinfectum)活性的海洋细菌3728菌株,对分离菌株的形态特征、培养特征、生理生化特征和16S rRNA基因序列进行了系统的研究。发现细菌3728与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)序列相似性最高,达到100%,在系统进化树中与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis AJ276351)处于同一分支上,结合形态和生理生化分析结果,将其鉴定为枯草芽孢杆菌。 相似文献
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茄子黄萎病生防内生细菌Jaas ed1产生的抑菌物质特性初步分析 总被引：2，自引：0，他引：2
为充分挖掘利用茄子黄萎病生防内生枯草芽孢杆菌Jaas edl,对其产生的抑菌物质特性进行了初步研究.结果表明枯草芽孢杆菌Jaas ed1产生的挥发性物质对茄子黄萎病菌菌丝生长具有较强的抑制作用.另外,该菌株还具有产嗜铁素活性.对其抗生素生物合成基因进行PCR检测和序列分析,结果显示,枯草芽孢杆菌Jaas ed1内可检测到Bacillomycin D的部分合成基因bamD和bamC,Bacilysin bacD的部分合成基因bacAB(引物:BACAB-F1,BACAB-R1),序列与GenBank已登录的基因相似性分别高达98%、98%和99%. 相似文献
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对铜绿假单胞菌脂肪酶基因(Lip A)进行克隆,构建整合表达质粒pHSG398–16S–lip A,并在枯草芽孢杆菌pab02中整合表达。根据铜绿假单胞菌Lip A基因设计引物,扩增Lip A基因,并进行测序,构建整合表达质粒pHSG398–16S–lip A,转化枯草芽孢杆菌pab02,并对转化后的阳性菌株进行诱导表达。结果显示,成功从铜绿假单胞菌A05菌株中扩增到长1 092 bp的Lip A基因,该基因与铜绿假单胞菌Lip A基因(登录号为AB290342)的同源性高达98%;该基因共编码311个氨基酸(aa),包含26个aa组成的信号肽和285个aa组成的成熟肽;成功构建了整合表达质粒pHSG398–16S–lip A,并将Lip A整合到枯草芽孢杆菌pab02染色体上,获得了重组枯草芽孢杆菌pab02–lip A;SDS–PAGE分析结果表明,脂肪酶蛋白得到了有效表达,该蛋白的相对分子质量约为37 000。 相似文献
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【目的】确定枯草芽孢杆菌溶血相关基因yqxC的功能。【方法】采用PCR方法,扩增枯草芽孢杆菌溶血相关基因yqxC,构建GST融合表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。使用含体积分数5%绵羊血的琼脂平板,检测可溶性融合蛋白GST-YqxC的溶血活性。此外,采用RT-PCR检测yqxC基因在枯草芽孢杆菌中的转录情况。【结果】获得的可溶性融合蛋白GST-YqxC,在绵羊血琼脂平板上显示出较强的溶血活力;通过RT-PCR,检测到yqxC基因可以在枯草芽孢杆菌中转录。【结论】枯草芽孢杆菌yqxC基因编码蛋白YqxC有较强的溶血活性,且能够发生转录,yqxC很可能是引起枯草芽孢杆菌溶血的基因之一。 相似文献