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1.
为研究云南半细毛羊毛囊干细胞（hair follicle stem cells,HFSCs）的生物学特性,采用组织块法分离培养云南半细毛羊HFSCs,并对其细胞形态、生长动力学、冷冻与复苏、染色体核型等生物学特性进行分析.结果表明：HFSCs为贴壁生长,体积小,核质比高,呈典型的铺路石状,在显微镜下折光性强、胞体透亮.细胞生长曲线为“S”型.冻存前细胞活率98.2％,复苏后细胞活率96.4％.染色体中正常二倍体数目2n=54,其中,长染色体中有3对为中着丝点染色体,23对为端着丝点染色体,X染色体为最大的近端着丝点染色体,Y染色体为最小的亚中着丝点染色体.所得细胞呈现典型的HFSCs特征,细胞活性好,细胞系为稳定的二倍体细胞系. 相似文献
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为检测云南半细毛羊毛囊干细胞（hair follicle stem cells,HFSCs）是否受到微生物污染,为后续的诱导分化等研究奠定基础.用培养法检测细菌、真菌污染;利用荧光染色剂Hoechst33342检测支原体污染.结果表明：实验组细胞和阴性对照中均没有发现细菌污染,实验组中有25％的细胞受到霉菌污染;实验组细胞经Hoechst33342荧光染色后,仅细胞核显色,细胞表面及细胞周围干净、清晰,无荧光小点.说明云南半细毛羊HFSCs没有细菌、支原体污染,仅有25％细胞受到霉菌污染.霉菌孢子对环境的耐受力很强,普通的消毒液很难清除,所以对操作环境带来严重危害. 相似文献
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《中国草食动物科学》2015,(6)
采用2种不同方法检测云南半细毛羊毛囊干细胞(hair follicle stem cells,HFSCs)凋亡情况,为后续的诱导分化研究奠定基础。利用凯基TUNEL-细胞凋亡原位检测试剂盒和Annexin V-EGFP/PI标记结合流式细胞仪检测HFSCs凋亡。结果:凯基TUNEL-细胞凋亡原位检测试剂盒检测表明,第2代细胞凋亡率6.0%,第6代细胞凋亡率6.5%;Annexin V-EGFP/PI标记结合流式细胞仪检测表明,第2代细胞凋亡率0.24%,第6代细胞凋亡率0.80%。说明云南半细毛羊HFSCs细胞生长状态很好。随着传代次数的增加,细胞凋亡率有所上升。 相似文献
4.
试验旨在对细毛羊毛囊干细胞的分离培养方法进行初步研究,建立细毛羊毛囊干细胞体外培养体系。采用两步酶消化法、机械分离法和两步酶消化法+机械分离法3种方法分离培养细毛羊毛囊干细胞,通过测定毛囊干细胞的数量、克隆形成率及毛囊干细胞的增殖能力等综合评估3种培养方法的优劣,寻求既能方便获得大量毛囊干细胞,又能减少其分化的理想培养条件。倒置显微镜下观察3种培养方法获得的细胞均为铺路石状,均表达角蛋白K19和整合素β1,表明成功获得细毛羊毛囊干细胞,建立体外培养体系。采用"两步酶消化法和机械分离法"相结合的方法获得毛囊干细胞体外培养效果最优。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2017,(19)
为了研究敖汉细毛羊毛囊细胞的培养方法,建立敖汉细毛羊毛囊细胞系,保存毛囊细胞便于后续细胞水平毛囊相关基因的深入研究,试验采用胰蛋白酶消化法对初生40日龄以内的敖汉细毛羊皮肤组织进行原代培养,通过原代培养、细胞传代、冷冻保存、复苏等方式成功分离并纯化出敖汉细毛羊毛囊细胞,然后对细胞进行了形态学观察,冻存、复苏活力检测,生长动力学分析,核型分析和微生物污染检测等分析。结果表明:原代毛囊细胞经胰蛋白酶消化及差速离心分离培养出毛囊细胞,冻存前细胞活力为94.19%,冻存1个月复苏后细胞活力为91.96%。细胞生长呈S型,经历潜伏期、指数生长期和平台期三个阶段。细胞的细菌、真菌、病毒和支原体检测均为阴性。试验成功分离了敖汉细毛羊毛囊细胞并建立了敖汉细毛羊毛囊细胞系。 相似文献
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《中国畜牧杂志》2020,(8)
本研究旨在了解CD200基因与延边半细毛羊毛用性状的相关性,为延边半细毛羊群体育种奠定理论基础。实验选择相同条件下饲养的体重相近的10月龄雌性延边半细毛羊20只,首先测定延边半细毛羊的细度,然后根据NCBI中绵羊CD200基因(登录号:XM_012190412)的CDS区序列设计引物,通过RT-PCR扩增并克隆CD200基因,采用生物信息学软件进行序列分析;通过免疫组化方法说明CD200在皮肤毛囊中的定位表达。结果显示:延边半细毛羊的羊毛纤维直径为(19.26±2.69)μm;实验成功克隆出CD200基因,长度为729 bp,编码242个氨基酸残基,预测到蛋白二级结构由α螺旋、延伸链、无规则卷曲构成,蛋白质三级结构为球形;免疫组化结果显示CD200在毛囊的外根鞘、毛囊干细胞及表皮层表达。本研究结果表明延边半细毛羊的羊毛细度较细,可用于细毛羊的育种;CD200可能参与调控羊毛细度的表达。 相似文献
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《中国家禽》2015,(7)
为研究大围山微型鸡骨骼肌卫星细胞的体外纯化、培养、鉴定方法及其生物学特性,试验采用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶两步酶消化法结合差速贴壁技术分离纯化出云南大围山微型鸡骨骼肌卫星细胞,进行体外原代和传代培养。观察细胞各个阶段的形态,通过生长曲线、诱导分化等手段研究骨骼肌卫星细胞的增殖与分化能力,利用RT-PCR以及免疫细胞化学染色对所获得的细胞进行鉴定。结果显示:两步酶消化法适用于微型鸡骨骼肌卫星细胞的分离和获取,此法分离得到的微型鸡骨骼肌卫星细胞表达卫星细胞特异的标志基因Pax7。在生长培养基作用下,细胞增殖旺盛,经诱导分化后,细胞可融合成肌管。该试验方法对研究家禽骨骼肌细胞增殖、分化和骨骼肌生长、发育的细胞生物学机制具有一定科学意义。 相似文献
10.
试验旨在研究不同纤维直径的细毛羊皮肤组织中毛囊差异表达的蛋白质,探讨与羊毛细度相关的蛋白质功能。应用双向凝胶电泳技术建立细毛羊皮肤组织中毛囊差异表达蛋白质图谱;运用ImageMaster 2D Platinum软件检测细毛羊毛囊组织差异表达蛋白质;通过质谱鉴定技术和数据库比对等方法开展细毛羊皮肤组织毛囊特异性蛋白质分类和功能鉴定。结果成功鉴定出94个差异蛋白质,其中,相同年龄超细型细毛羊和细型细毛羊皮肤毛囊组织中有73个差异蛋白质;不同年龄的超细型细毛羊毛囊组织中有21个差异蛋白质。按功能属性划分得到了角蛋白、分子伴侣类蛋白、细胞骨架结构类蛋白、14-3-3蛋白、蛋白酶类、肌球蛋白、血清白蛋白和其他蛋白8类功能蛋白。结果提示,应用生物信息学技术分析这些差异蛋白与羊毛纤维直径的内在联系,为优质细毛羊的培育提供直接有效的基因资源信息,对提高羊毛品质具有重要的意义。 相似文献
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本研究旨在探讨日粮钙水平对空怀期云南半细毛羊各营养成分消化代谢的影响，为云南半细毛羊钙需要量的标准制定提供数据支撑。试验选取50只空怀期体况健康、体重接近、经产两胎的云南半细毛羊，随机分成5组，分别饲喂5种不同钙含量日粮（0.48%，0.67%，0.82%，1.00%和1.13%）。试验分为预试期（14 d）和正试期（30 d），在正式期第7天从每个试验组中随机选取5只羊，放入代谢笼进行为期7 d的消化代谢试验。试验结果表明，随着日粮钙含量的升高，空怀期云南半细毛羊的干物质采食量总体呈先下降后升高趋势（P>0.05）。各养分的表观消化率没有受到日粮钙含量的影响（P>0.05）。空怀期云南半细毛羊日粮钙水平越高，粪钙的排出量越大（P<0.05），排泄钙量也越大（P<0.05）。通过回归分析，由不同钙水平日粮对平均日增重的线性关系得出，空怀期云南半细毛羊的钙维持需要量为7.93 g/d（R2=0.5827）。摄入钙与沉积钙之间的线性回归分析表明，空怀期云南半细毛羊沉积钙最大值为3.64 g/d。综上所述，空怀期云南半细毛羊日粮钙水平的提高，对干物质采食量有一定的影响，而对各养分的表观消化率没有显著影响。空怀期云南半细毛羊粪钙和排泄钙随着日粮钙水平的提升而升高。不同日粮钙水平下空怀期云南半细毛羊摄入钙与日增重的相关性不大。 相似文献
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LIANG Jiachong OUYANG Yina LI Yinjiang LI Weijuan WANG Siyu XUE Bai HONG Qionghua 《中国畜牧兽医》2007,47(12):3944-3952
The study was conducted to investigate the effects of different dietary calcium levels on nutrient digestion and metabolism of Yunnan semi-fine wool sheep during the empty pregnant period,and to provide basis for formulating the standard of calcium requirement of Yunnan semi-fine wool sheep.Fifty Yunnan semi-fine wool sheep with healthy body condition,close body weight and 2 births were randomly allocated to 5 groups,which were groupsⅠ (0.44% calcium),Ⅱ (0.67% calcium),Ⅲ (0.82% calcium),Ⅳ (1.00% calcium) and Ⅴ (1.13% calcium).The experiment was divided into pre-trial period (14 days) and formal period (30 days).On the 7th day of the formal period,five sheep were randomly selected from each experimental group and placed in separate metabolic cages for digestive and metabolic tests.The experimental results showed that:With the increase of dietary calcium content,the dry matter intake of Yunnan semi-fine wool sheep in empty pregnant period decreased at first and then increasing (P>0.05).The higher the dietary calcium level of Yunnan semi-fine wool sheep in empty pregnant period,the greater the excretion of fecal calcium (P<0.05),and the greater the excretion of calcium (P<0.05).Regression analysis showed that the calcium maintenance requirement of Yunnan semi-fine wool sheep in empty pregnant period was 7.93 g/d and R2=0.5827 according to the linear relationship between different calcium levels of diets and average daily gain.Linear regression analysis between calcium intake and deposited calcium showed that the maximum deposited calcium of Yunnan semi-fine wool sheep during empty pregnant period was 3.64 g/d.In conclusion,the increase of dietary calcium level of Yunnan semi-fine wool sheep during empty pregnant period had a certain effect on dry matter intake,but had no significant effect on the apparent digestibility of each nutrient.Fecal calcium and excreted calcium of Yunnan semi-fine wool sheep in empty pregnant period increased with the increase of dietary calcium level.Under different dietary calcium levels,the calcium intake level had little correlation with the daily gain of Yunnan semi-fine wool sheep in empty pregnant period. 相似文献
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【目的】 试验旨在解析鄂尔多斯细毛羊胚胎期次级毛囊诱导期形态发生过程中主要细胞类型的分子特征和分化过程。【方法】 对采集的3只鄂尔多斯细毛羊（胎龄87 d）体侧部（肩胛骨后缘处）的皮肤样本进行HE染色，鉴定毛囊的发育时期；部分皮肤样本经过混样后进行单细胞转录组测序（scRNA-Seq），应用t-分布随机近邻嵌入（tSNE）分析细胞簇，分别使用胶原Ⅰ型α1链（Col1a1）和角蛋白15（Krt15）鉴定真皮谱系细胞和表皮谱系细胞，并使用皮肤组织不同细胞的标记基因进行细胞类型分析；对测序数据进行拟时序分析，探究其分化过程中差异基因的表达；通过GO功能富集分析进一步验证基因的功能。【结果】 HE染色结果发现，鄂尔多斯细毛羊在胎龄87 d处于次级毛囊诱导期。通过scRNA-Seq在胎龄87 d的细毛羊体侧部皮肤细胞样品中获得10 603个细胞和18 704个基因的scRNA-Seq数据可用于下游分析。tSNE分析发现，皮肤组织中共有15个细胞簇；Col1a1和Krt15标记基因鉴定表明，真皮细胞和表皮细胞具有高度异质性。拟时序分析构建毛囊形态发生过程中真皮/表皮细胞谱系细胞的分化轨迹和基因动态表达图谱表明，在真皮谱系细胞由成纤维细胞（Fb）向成熟真皮聚凝物（DC）的分化过程中，多个不同阶段的标记基因FST重组蛋白（Fst）、抑制素亚基βα（Inhba）和转录阻遏物GATA结合1（Trps1）均在拟时序轨道上特异性表达，并富集了Wnt、Noggin和骨形态发生蛋白（BMP）等与毛囊形态发生相关的信号通路；在表皮谱系细胞分化过程中，基质和毛囊间表皮（IFE）的标记基因角蛋白10（Krt10）、同源基因C13（HOXC13）和音猬因子信号（SHH）在表皮谱系细胞拟时序轨道的2个分支上均特异性表达，且富集在细胞增殖和细胞黏附等相关通路。【结论】 在细毛羊次级毛囊诱导期，真皮谱系细胞由成纤维细胞分化至真皮聚凝物，表皮谱系细胞处于基质和毛囊间表皮细胞增殖分化阶段，结果可加深人们对细毛羊次级毛囊形态发生过程的了解，为鄂尔多斯细毛羊育种研究提供有力的理论和技术支持。 相似文献
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FU Xue-feng YANG Han-yulu SHI Gang XU Xin-ming ZHANG En-ping DI Jiang ZHANG Yan-hua HUANG Xi-xia TIAN Ke-chuan 《中国畜牧兽医》2016,43(4):879-891
The purpose of this paper was to study the differentially expressed proteins of hair follicles in skin tissue with different fiber diameter of Fine-wool sheep, and discussed the function of proteins related to wool fineness.The differentially expressed protein maps of Fine-wool sheep skin hair follicle were established by two-dimensional gel electrophoresis, and the differentially expressed protein spots were detected and analyzed by the ImageMaster 2D Platinum software, Fine-wool sheep skin hair follicle specific proteins were classified and functional identified by mass spectrum identification technology and database matching method.The results showed that 94 different proteins were successfully identified in Fine-wool sheep with different fiber diameter, including 73 different proteins between superfine wool sheep and Fine-wool sheep at the same age, and 21 different proteins of superfine wool sheep at the different age.According to the functional properties got eight kind of functional proteins, keratin, molecular chaperone protein, cytoskeleton protein, 14-3-3 protein, protease, myosin, serum albumin, other protein, respectively.These results indicated that the internal relation between the differentially expressed protein and the wool fiber diameter was analyzed by the bioinformatics knowledge, which would provide effective genetic resources information directly for high quality breeding of Fine-wool sheep, and had important practical significance for improving the quality of the wool. 相似文献
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试验旨在从新吉细毛羊皮肤组织表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)中筛选与毛囊发育相关基因并探讨其表达模式与羊毛细度的相关性。利用组装、比对软件Trinity与Blat对新吉细毛羊皮肤组织ESTs组装、注释进而筛选与毛囊发育相关基因,并通过实时荧光定量PCR相对定量方法以2-△△Ct值检测相关基因在不同绵羊个体中的表达规律。结果显示,从474条ESTs中筛选注释获得了4个与毛囊发育相关的角蛋白基因KRT27、KAP3.2、KAP11.1和KAP8.1;4个角蛋白基因在超细型细毛羊皮肤组织表达量极显著高于细型细毛羊的表达量(P<0.01);4个角蛋白基因表达量:KRT27 >KAP3.2 >KAP11.1 >KAP8.1。该研究为角蛋白基因在细毛羊转录水平上的研究提供了一定数据。 相似文献