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1.
为了获得高产中性蛋白酶芽孢杆菌菌株，试验从不同环境样本中分离细菌并进行16S rDNA序列鉴定，利用酪蛋白琼脂培养基对产蛋白酶菌株进行初筛、福林酚法检测中性蛋白酶活性，结合形态学和分子生物学鉴定对高产中性蛋白酶芽孢杆菌菌株进行分类鉴定，通过对培养时间、温度和pH值的调节，研究该菌株的酶学性质。结果表明：成功筛选出1株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)A1,该菌株具有较强产中性蛋白酶能力，中性蛋白酶活性为31.40 U/mL,所产中性蛋白酶的最适反应温度为50℃、最适pH值为7,在pH值=6～8时稳定性较好，对碱性环境有一定的耐受性，5.0 mmol/L的Ca2+和Mn2+对中性蛋白酶活性有显著促进作用(P<0.05),Zn2+和Fe2+对中性蛋白酶活性有抑制作用(P<0.05),Mg2+无明显作用。说明贝莱斯芽孢杆菌A1可以作为生产中性蛋白酶的备选菌株。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2020,(10)
为了筛选获得动物源产蛋白酶乳酸菌,开发新型微生态制剂以提高饲料利用率,试验选取新鲜健康鸡粪为样品,利用溴甲酚紫平板法筛选产酸菌,再通过酪蛋白平板法筛选产蛋白酶乳酸菌,对该菌进行形态学和16S rDNA分子生物学鉴定并分析其生长产酶规律和所产蛋白酶的酶学特性。结果表明,成功筛选到11株产蛋白酶乳酸菌,其中JF3-11所产蛋白酶活力最高,经形态学和分子生物学鉴定该菌为唾液乳杆菌,其所产蛋白酶的最适反应条件为60℃,pH值7.0,在中性条件下稳定性较好且具有一定热稳定性,Mg~(2+)、Mn~(2+)能够促进酶活,Zn~(2+)、Cu~(2+)对酶活具有抑制作用;在30℃、200 r/min条件下,培养至30 h其上清液中所产蛋白酶相对酶活可达到最高值100%(82 U/mL)。本试验成功从健康鸡粪中筛选获得一株产蛋白酶乳酸菌,对其所产蛋白酶特性的分析为其在饲料工业中的应用提供了理论基础。 相似文献
3.
试验从健康猪肠道中筛选得到一株高产蛋白酶的芽孢杆菌MY-6菌株,通过形态学观察、生理生化试验和糖醇发酵试验、16S rDNA序列扩增与比对、Biolog鉴定等方法鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌。并研究了蛋白酶活力与细菌生活周期的动态关系,pH、温度、金属离子和蛋白酶抑制剂对蛋白酶活力的影响及蛋白酶对不同底物的水解性能。结果显示,MY-6菌株蛋白酶的合成与其芽孢形成同步,均开始于对数生长期的前期,该菌株所产蛋白酶的最适作用条件为：40℃、pH 7.0,Ca2+和Mn2+对蛋白酶活力有明显的促进作用,PMSF能够完全抑制该蛋白酶的活力,说明该蛋白酶属丝氨酸蛋白酶,蛋白酶对鱼粉蛋白、大豆蛋白、玉米蛋白、酪蛋白的酶解物TCA可溶性肽含量分别为0.83、0.67、0.58和0.38 μmol/g。结果提示,解淀粉芽孢杆菌MY-6菌株可作为改善蛋白质消化的益生性芽孢杆菌的初步选择。 相似文献
4.
试验旨在对一株杜仲树皮内生菌贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)的内切纤维素酶(CMCase)进行产酶条件优化及酶学性质分析,为探究贝莱斯芽孢杆菌CMCase的相关特性提供参考依据。采用单因子试验设计,分别优化pH、接种量、温度、时间、碳源和氮源等发酵条件,并探讨温度、pH、底物专一性、金属离子及表面活性剂对CMCase的影响。结果表明,以玉米秸秆为碳源(30 g/L)、豆粕为氮源(30 g/L)、3%接菌量、pH 7.0的条件下37℃培养48 h,贝莱斯芽孢杆菌157的CMCase最高可达(5.14±0.18) U/mL。经CMCase酶学性质分析发现,贝莱斯芽孢杆菌157的最适酶反应温度为60℃,最适pH为5.0;温度稳定性试验发现,在40和50℃时,相对剩余酶活力均高于80%,随着温度的升高,酶活力逐渐降低,当温度高于55℃,相对剩余酶活力约为50%;pH稳定性试验发现,在pH 5.0～10.0之间耐受性良好,相对剩余酶活力均高于90%,随作用时间的延长,相对剩余酶活力变化不大。贝莱斯芽孢杆菌157 CMCase属于典型内切型纤维素酶。Na^+、Mg2+、Ca2+可促进贝莱斯芽孢杆菌157 CMCase酶活力,而Co2+、Hg2+、Fe2+、Cu2+和SDS抑制CMCase酶活力;表面活性剂Tween-80、Tween-20、Triton X-100对贝莱斯芽孢杆菌157 CMCase无影响。本试验通过对贝莱斯芽孢杆菌157进行产酶条件优化及CMCase酶学性质分析发现,贝莱斯芽孢杆菌157 CMCase具有产酶量高,耐受pH范围广的特点,在饲料添加剂、洗涤剂和造纸领域中具有一定的应用价值。 相似文献
5.
本试验通过筛选瘤胃环境中具产酶抑菌活性的芽孢杆菌,为开发功能型饲用微生态制剂奠定基础。采用可培养的方法从健康高产奶牛瘤胃液中分离芽孢杆菌,并测定其产酶能力及抑菌活性,同时对筛选到的功能菌株进行生理生化和分子生物学鉴定。结果显示：从健康高产奶牛瘤胃液中筛选出一株芽孢杆菌BX1-12,其产纤维素酶、蛋白酶及α-淀粉酶活力分别为27.33、137.54 U/mL和1450.53 U/100 mL,同时该菌具广谱抑菌效果,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和伤寒沙门氏菌的抑菌圈直径分别为13.62、23.21 mm和25.97 mm。结合Biolog生理生化实验及16S rRNA序列分析,鉴定该菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。综上,从健康高产奶牛瘤胃液中分离得到的这株枯草芽孢杆菌BX1-12,具有产多种酶活及广谱抑菌的能力,是一株良好的用于奶牛微生态制剂的候选菌株。
[关键词] 奶牛瘤胃液|饲用芽孢杆菌|枯草芽孢杆菌|产酶抑菌活性 相似文献
6.
《饲料工业》2016,(18)
研究旨在通过定向筛选获得能够产纤维素酶的芽孢杆菌。试验从生境中筛选到产纤维素酶较高的一株芽孢杆菌,通过菌株形态学和分子生物学对菌株进行了鉴定,并对这株菌的耐模拟肠液性、产酶特性和抑菌能力进行评定。结果显示,所筛选的芽孢杆菌B13为解淀粉芽孢杆菌,产纤维素内切葡聚糖酶酶活为7.31 U/ml,纤维素外切葡聚糖酶酶活为5.26 U/ml,木聚糖酶酶活为32.46 U/ml,能够产淀粉酶和蛋白酶,耐模拟胃液能力较强,而耐模拟肠液能力较弱,不能产生抗金黄色葡萄球菌的物质。结果提示,本试验筛选到的解淀粉芽孢杆菌B13能够产生纤维素酶并具有良好生物学特性,为降低粮食加工副产物中纤维素含量、提高其利用率提供了参考。 相似文献
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试验旨在筛选1株产阿魏酸酯酶的芽孢杆菌,研究其发酵玉米皮的效果。采用十字划线法和平板扩散法对产阿魏酸酯酶菌株进行初筛,结合酶活力测定进行复筛,将筛选得到的菌株利用形态学观察、分子生物学鉴定以及生理生化特征试验确定种属关系。发酵玉米皮试验设4个处理组,对照组(C组)玉米皮添加等量蒸馏水发酵,T1组玉米皮添加2 U/g FW纤维素酶发酵,T2组玉米皮添加5×106 CFU/g FW的筛选菌株发酵,T3组添加2 U/g FW的纤维素酶与5×106 CFU/g FW筛选菌株发酵,每组5个重复,室温发酵15 d。结果显示,研究筛选得到12株产阿魏酸酯酶的菌株,其中菌株A30酶活力最高,为177.1 U/L。经鉴定,菌株A30为解淀粉芽孢杆菌。菌株A30能够提高发酵玉米皮的芽孢杆菌活菌数,对乳酸菌、霉菌活菌数以及物料pH值无影响,该菌株与纤维素酶协同处理对发酵玉米皮中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)、半纤维素和纤维素的降解率均高于其他处理组。研究表明,解淀粉芽孢杆菌A30在玉米皮发酵过程中,能够与纤维素酶协同作用,显著提高纤维素降解率,改善饲... 相似文献
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为了从自然界和动物消化道内筛选能产高效蛋白酶的有益菌株,试验采用酪蛋白平板法从鸡粪中筛选出一株产蛋白酶的菌株JF,根据形态学鉴定、16S r DNA核酸序列分析,并对该菌所产蛋白酶粗酶液的酶学特性进行分析。结果表明:筛选出的菌株属于短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus);该菌株的酶学特性,最适反应温度为60℃,最适pH值为9. 0,属于中温弱碱性蛋白酶; 30℃时仍能保持73. 0%的相对酶活性,具有一定低温酶的特性; Mn2+对此酶具有极显著促进作用(P0. 01),而Zn2+、乙二胺四乙酸(EDTA)对此酶具有极显著抑制作用(P0. 01)。 相似文献
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A Bacillus strains,MY-6 strain which secreted high amount of protease was isolated from healthy pig's intestines,and it was identified as Bacillus amyloliquefaciens by the methods of morphological observation, biochemical tests,16S rDNA sequence amplification and comparison, biolog identification. In order to get an initial understanding of the enzymatic properties of its protease, the dynamic relationship between protease activity and bacterial life cycle, effects of pH,temperature,metal ions and inhibitors on protease activity,and the protease hydrolysis of different substrates were investigated. The results showed that,the protease synthesis of MY-6 strain was synchronized with its spore formation which began in the early stage of the exponential growth phase. The optimum conditions for the protease was 40℃ and pH 7.0,Ca2+ and Mn2+ had a intensive effects on the protease activity, PMSF could completely inhibit the activity of protease, indicating that the protease was a serine protease.The content of TCA soluble peptides for protein hydrolyzate fish protein, soybean protein, corn protein and casein was 0.83,0.67,0.58 and 0.38 μmol/g,respectively. In conclusion,Bacillus amyloliquefaciens MY-6 strain could be used as an initial selection of probiotic Bacillus to improve protein digestion. 相似文献
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瘤胃厌氧真菌木聚糖酶基因的表达与酶学特性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
旨在表达来源于瘤胃厌氧真菌基因组的4个木聚糖酶基因A、C、D和F,并比较分析其酶学特性。首先根据大肠杆菌基因编码偏好,合成可在大肠杆菌中表达的木聚糖酶基因序列,然后采用同源重组的方法将各序列分别插入载体pET-28a中,在大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中异源表达,并研究其酶学特性,结果成功表达出来源于厌氧真菌的4个木聚糖酶基因。测定其酶学性质发现,4种木聚糖酶的反应最适pH值均为8.0;木聚糖酶D的反应最适温度为37℃,其余3种木聚糖酶的反应最适温度均为45℃;4种木聚糖酶具有广泛的温度稳定性和pH稳定性;金属离子Ca2+、Mg2+、Mn2+显著促进木聚糖酶活性(P<0.05),而Zn2+则有明显的抑制作用(P<0.05);4种木聚糖酶降解山毛榉木聚糖的能力显著高于其他底物(P<0.05)。本研究成功表达了4种来源于厌氧真菌的木聚糖酶,其良好的温度和pH稳定性具有潜在的工业应用价值。 相似文献
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This experiment was conducted to isolate and identify a strain of Bacillus coagulans from the soil at the bottom of the pond, and study its probiotic properties. A strong acid producing bacillus was isolated from the soil at the bottom of the pond and identified as Bacillus coagulans through the physiological and biochemical characteristics and 16S rDNA sequence analysis. The strain had high tolerance to the simulated gastric juice (pH 2.5, 12 h of incubation, survival rate was 71.9%) and simulated intestinal fluid (bile salt concentration 0.3%, 12 h of incubation, survival rate was 84.4%) and had high antibacterial activity to E.coliK88, E.coliK99, S.agalactiaeand A. hydrophila. It could degrade nitrite effectively and the degradation rate was 96.80% in 48 h. Two hundred and seventy AA broilers aged 1 day were randomly allocated into 3 groups. Diets were added 0 (group Ⅰ), 1.0×106 (group Ⅱ) and 1.0×107 CFU/g (group Ⅲ) Bacillus coagulans NJ102, respectively. The experiment lasted for 42 d. The average daily gain and final body weight of group Ⅱ and Ⅲ were significantly higher than that of group Ⅰ(P<0.05), and the feed weight ratio of the two groups were significantly lower than that of groupⅠ(P<0.05). There was no significant difference in average feed intake among three groups (P>0.05). It was found that the soil-derived Bacillus coagulans NJ102 from the bottom of the pond had a certain degree of resistance and potential probiotic ability, which could improve the growth performance of broilers and had the potential to be a microbial feed additive. 相似文献
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试验从萌发的花魔芋实生种子中筛选出一株产β-甘露聚糖酶的内生菌,对该菌株进行鉴定并研究所产β-甘露聚糖酶的酶学性质。采用透明圈法初筛,DNS法测酶活力,摇瓶发酵复筛获得产酶最高的菌株,利用16S rDNA序列分析对该菌株进行鉴定并对所产酶的基本酶学性质进行研究。结果显示,该高产β-甘露聚糖酶的内生菌株与路德维希肠杆菌（Enterobacter ludwigii）同源性达99%。所产β-甘露聚糖酶的最适温度为60℃,在30~50℃条件下较稳定;最适pH为6.0,在pH 4.0~9.0的条件下较稳定;Zn2+（117.84%）、EDTA（115.80%）、Cu2+（113.76%）对β-甘露聚糖酶有较强的激活作用,Mn2+（22.02%）对其有强烈的抑制作用;以魔芋粉为底物时,Km值为26.65 mg/mL。该菌摇瓶发酵72 h后,β-甘露聚糖酶酶活力达9.48 U/mL,具有良好的酶学性质,在动物饲料工业中具有广阔的应用前景。 相似文献
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试验旨在分离鉴定一株来源于池塘底泥的具有益生功能的凝结芽孢杆菌,并研究其益生性能。从自然池塘底泥分离得到一株产酸能力强的杆状细菌,通过生理生化特征分析和16S rDNA序列比对,鉴定分离菌为凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）。该分离菌株对大肠杆菌K88、大肠杆菌K99、无乳链球菌和嗜水气单胞菌有抑制作用;在pH 2.5的模拟胃液中处理12 h存活率为71.9%;在胆盐浓度为0.3%的模拟肠液中处理12 h,存活率为84.4%。该分离菌株可有效降解亚硝酸盐,48 h降解率达到96.80%。将270只1日龄AA肉鸡分成3个处理组,日粮分别添加0（Ⅰ组）、1.0×106（Ⅱ组）和1.0×107 CFU/g（Ⅲ组）剂量的凝结芽孢杆菌NJ102,试验期42 d。结果显示,Ⅱ、Ⅲ组肉鸡的平均日增重和终末体重显著高于Ⅰ组（P<0.05）,料重比显著低于Ⅰ组（P<0.05）,各组间平均日采食量差异均不显著（P>0.05）。结果表明,来源于池塘底泥的凝结芽孢杆菌NJ102有一定的抗逆性和益生能力,能改善肉鸡的生长性能,具备作为微生物饲料添加剂开发的潜力。 相似文献
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豆粕替代鱼粉对乌鳢肠道内产蛋白酶好氧菌组成及产蛋白酶能力的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
本试验通过对乌鳢肠道内产蛋白酶好氧菌株进行分离和培养,并测定其产蛋白酶能力,来评价豆粕替代鱼粉对乌鳢肠道好氧菌组成及产蛋白酶能力的影响。首先配制以脱脂鱼粉为主要蛋白质源的对照组(D1组)饲料,饲料中鱼粉添加量为55%;然后用豆粕替代对照组饲料中不同比例的鱼粉,配制2种试验组饲料,饲料中豆粕添加量分别为35%(D2组)和75%(D3组)。上述3种试验饲料分别投喂平均体重为(10.50±0.84)g的乌鳢幼鱼8周,每种试验饲料投喂3个重复,每个重复28尾鱼,试验在室内养殖系统中进行。结果显示:随着豆粕替代鱼粉比例的增加,乌鳢的终末体重、增重率和特定生长率显著降低(P0.05)。从3组乌鳢肠道内共分离出21株产蛋白酶好氧菌,其中,D1组为16株,D2组为19株,D3组为20株。以水解圈直径与菌株直径之比值(R/r值)表示产蛋白酶能力,豆粕替代鱼粉显著降低了菌株P1004和P1018的R/r值(P0.05),但显著增加了菌株P1009和P1012的R/r值(P0.05)。随着豆粕替代鱼粉比例的增加,菌株P1018的R/r值显著下降(P0.05)。对产蛋白酶能力最大的菌株P1009进行生理生化特征鉴定和16S r DNA序列分析,得出菌株P1009为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。本试验结果表明,乌鳢肠道内存在着丰富的产蛋白酶好氧菌,豆粕替代鱼粉对乌鳢肠道内产蛋白酶好氧菌数量和产蛋白酶能力产生了一定影响,乌鳢肠道内产蛋白酶能力最强的菌株P1009是铜绿假单胞菌,可以考虑将其作为益生菌开发的潜在菌种。 相似文献