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本研究旨在探明褐黄血蜱卵内蛋白组分,揭示蜱胚胎发育中的关键营养物质,为筛选可干扰胚胎发育的抗原分子奠定基础。采用液相色谱-串联质谱法对新鲜褐黄血蜱的卵蛋白成分进行分析,基于该蜱的唾液腺转录组翻译文库、中肠转录组翻译文库和Uniprot数据库对各蛋白成分进行鉴定。结果显示:从褐黄血蜱卵黄蛋白提取液中检出特异性肽段221条,由此鉴定蛋白53种,其中高可信蛋白12种,能够确定的功能蛋白有肌动蛋白(actin)和卵黄蛋白原Ⅱ(vitellogenin 2,Vg-2),且Vg-2与卵黄蛋白(vitellins, Vn)一级结构相同。蜱卵原生质所含蛋白较少;Vg-2是蜱卵内存在的唯一一种卵黄蛋白原。 相似文献
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【目的】 探明褐黄血蜱卵蛋白成分及其在胚胎发育过程中的作用，为筛选抗蜱生殖疫苗分子奠定基础。【方法】 提取褐黄血蜱孵化0、7、14、21 d的卵蛋白，以过滤器辅助样品制备（filter-aided sample preparation，FASP）法酶解卵蛋白，液相色谱-串联质谱法（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）分离、检测酶解特异性肽段，搜索该蜱中肠转录组文库鉴定卵原生质中的蛋白，登录NCBI对各蛋白进行注释；以Maxquant计算各蛋白的iBAQ （intensity-based absolute quantification）和非标记定量（Label-free quantification，LFQ），分析各蛋白在不同孵化时间的相对丰度及其增减，并对高可信蛋白序列进行GO功能富集分析。【结果】 本研究共检出特异性肽段1 044条，由此鉴定多肽291种，其中高可信的（unique peptides≥2）112种，但仅39种有相关文献。基于文献，按照功能将39种蛋白归类于酶、酶抑制剂、转运蛋白、热休克蛋白、细胞骨架蛋白及未知蛋白6类；酶、酶抑制剂、转运蛋白、热休克蛋白都有家族蛋白共存的情况。定量分析显示，在新产褐黄血蜱卵中，丰度最高的是Contig14782，其次为Contig6575。至孵化结束时，在20种高丰度蛋白中，1种（Contig2242）显著升高（P<0.05），14种显著下降（P<0.05），5种增减不显著。GO功能富集分析表明，本次鉴定的高可信蛋白主要定位于胞外区域，参与免疫调节过程，发挥结合蛋白质和RNA的作用。【结论】 褐黄血蜱卵蛋白成分复杂、种类众多，包括酶、酶抑制剂、转运蛋白、热休克蛋白、细胞骨架蛋白等，其中酶是最多的一类。在孵化期间，绝大多数蛋白酶和酶抑制剂丰度显著下降。 相似文献
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本研究旨在探明4个时间段褐黄血蜱（采自刺猬体表）中肠蛋白质成分,揭示参与血餐消化的蛋白种类及其含量变化规律。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）对采集于刺猬体表的4个时间段褐黄血蜱的中肠蛋白组成分进行检测。基于该蜱的唾液、中肠转录组翻译文库及Uniprot数据库,利用软件Mascot 2.2对所获肽段及蛋白质进行鉴定。结果显示：在褐黄血蜱中肠蛋白提取液中共检测出特异性肽段3 046条,鉴定303种蛋白,其中271种为高可信蛋白;在所有的高可信蛋白中,23种含量较为丰富,125种在后期消化阶段（第2至第4阶段）的含量为0,123种的含量发生不同程度的变化（24种蛋白的含量变化明显,其中12种含量上升明显,12种含量下降明显）。确定148种高可信蛋白来自于刺猬血清,推断24种可信蛋白可能参与蜱虫对血餐的消化。 相似文献
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为获得豪猪MITF-M转录本序列,并对其进行生物信息学分析,试验首先将人工饲养豪猪的耳廓皮肤组织样本提取总RNA后进行无参转录组测序,对获得的所有MITF转录本通过序列比对分析筛选豪猪MITF-M转录本序列,然后采用生物信息学在线软件对豪猪MITF-M基因编码蛋白的理化性质、氨基酸组成、亚细胞定位、二级结构、三级结构、信号肽和跨膜区域进行预测和分析,最后分析豪猪与大鼠、鸡、绵羊等9个物种MITF-M蛋白的同源性,并采用邻接法构建MITF-M蛋白的系统进化树。结果表明：获得豪猪MITF-M转录本序列(已上传至GenBank,登录号为MW84037),序列全长为4 772 bp,含9个外显子,CDS长度为1 260 bp(229～1 488 bp),编码419个氨基酸。豪猪MITF-M蛋白化学分子式为C2010H3263N585O652S26,共由6 536个原子组成;相对分子质量为46 890.11;理论等电点为5.82,为酸性蛋白质;脂肪氨基酸系数为79.64,不稳定指数为69... 相似文献
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青海血蜱不同发育阶段蛋白分析 总被引：2，自引：0，他引：2
考虑到不同发育阶段蛋白多肽及抗原特性方面的差异,本实验利用SDS-PAGE和Westernblotting对青海血蜱的卵、幼蜱、若蜱、成蜱的蛋白进行了分析。SDS-PAGE结果显示,卵出现了7条主带,幼蜱出现了16条主带,若蜱出现了14条主带,成蜱出现了12条主带。它们的蛋白多肽在数量、含量和分子量上存在差异,共同带只有4条,但相邻发育阶段之间的共同带较多。用感染羊血清和免疫羊血清作免疫印迹时,感染羊血清在分子量5.6万处有明显的反应带,免疫羊血清在分子量9.7万处有明显的反应带。 相似文献
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为了解蜱血液消化特征,通过耳袋饲养法分别收集镰形扇头蜱雌性成蜱吸血d4、d8的粪便。提取粪便蛋白质,进行SDS-PAGE和LC/MS-MS分析。用非标定量分析蛋白组学技术对蜱不同吸血时段粪便进行差异蛋白质表达谱分析。结果共鉴定蜱源肽段数628个、蛋白质总数196个;鉴定兔源肽段数6173个、蛋白质总数659个。对组间差异蛋白分析发现,除一些未知蛋白外,其中蜱源蛋白主要是热休克蛋白、免疫蛋白相关亚基和一些蛋白酶类等。兔源差异蛋白主要为一些凝血因子、糖蛋白,以及一些物质和能量的消化与合成的相关酶类,如兔丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶、三磷酸肌苷焦磷酸酶、S-(羟甲基)谷胱甘肽脱氢酶等。本研究中的粪便蛋白质组反应了蜱血液消化过程的复杂性,丰富了蜱消化方面的研究数据,同时为抗蜱疫苗研究提供了一个思路。 相似文献
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《黑龙江畜牧兽医》2018,(23)
为了探讨褐黄血蜱体内半胱氨酸蛋白抑制剂(cystatin)蛋白及其编码基因的情况,试验基于褐黄血蜱唾液腺转录组数据库中搜索的注释为cystatin的contig_43533序列设计引物,RACE扩增其5′端和3′端,拼接获得cDNA全长,利用生物信息学软件进行分析;以饱血褐黄血蜱雌成虫全蜱总cDNA为模板,扩增cystatin-ORF,构建重组表达载体,原核表达、纯化制备cystatin重组蛋白。结果表明:褐黄血蜱cystatin cDNA全长635 bp,包含396 bp的开放阅读框架,编码一个含131个氨基酸残基的蛋白,原核表达可获得褐黄血蜱cystatin重组蛋白。说明褐黄血蜱cystatin蛋白能在大肠杆菌内以可溶性形式稳定表达。 相似文献
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寄生在犬体的蜱除叮咬吸血并分泌毒素引起“蜱麻痹症”外，还能传播多种自然疫源性疾病，危害极大，９５￣９８年，我们对华南地区七个军警犬队（基地）及部队养犬单位的犬和部分家犬的体表寄生蜱进行了初步调查，并开展了综合防治，共彩集犬体寄生蜱３０００余只，经鉴定，隶属３属６种。计有：血红扇头蜱、微小牛蜱、长角血蜱，台湾血蜱，豪猪血蜱。其中血红扇头蜱为广西硬蜱新记录，长角血蜱为广东硬蜱新记录。所调查７个单位的军 相似文献
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根据GenBank中的长角血蜱丝氨酸蛋白酶抑制荆(Haemaphysalislongicornis serine proteinase inhibitor-2,HLS2)基因序列设计特异性引物,以长角血蜱饥饿成蜱总RNA为模板,经RT-PCR扩增出1164 bp的HLS2DNA片段.将其与pET-30a载体连接,构建pET-30a-HLS2表达载体,转化JM109大肠杆菌,筛选阳性克隆,经双酶切鉴定及测序分析后转化到E.coli BL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析.优化表达条件后纯化融合蛋白,用Western blotting鉴定其抗原性.结果表明,获得的HLS2 DNA片段与GenBank中的HLS2(序列号AB162827)序列的同源性为98%.构建的pET-30a-HLS2表达载体在大肠杆菌中表达了约为47 000的HLS2融合蛋白,主要以包涵体形式存在,IPTG终浓度为1.0 mmol/L、28℃诱导7 h后融合蛋白的表达量最高.Western blotting显示该融合蛋白可与兔抗长角血蜱阳性血清反应. 相似文献
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【目的】筛选新型广谱有效的抑菌蛋白,为全面解析植物乳杆菌抑菌机制和开发新型抗菌制剂奠定基础。【方法】以植物乳杆菌GX20200417-1为研究对象,采用牛津杯法测定其抑菌活性,以低温离心和超滤法初步分离获得胞外蛋白并测定其抑菌活性,对胞外蛋白进行不同温度、pH及蛋白酶处理,研究抑菌蛋白理化特性,利用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)进一步分析鉴定植物乳杆菌代谢产物中的抑菌成分。【结果】植物乳杆菌GX20200417-1对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均具有良好的抑菌作用;发酵上清液在发酵24 h的抑菌能力最强;胞外蛋白的抑菌能力与发酵上清液相近;植物乳杆菌抑菌蛋白具有较好的耐热特性,与对照组相比,在20~80 ℃时抑菌活性均无显著变化(P＜0.05),在pH 6.0~8.0时抑菌活性最佳,对蛋白酶敏感;经LC-MS/MS鉴定分析,检测出5种可信度较高且与抑菌作用相关的蛋白质,分别是片球菌素pediocin PA-1、溶菌素(lysin)、聚酮合酶(polyketide synthase)、辅助蛋白(accessory protein)和LysM peptidoglycan-binding domain-containing protein,分子质量分别为5.348、7.348、8.348、6.348和19.662 ku;蛋白质功能分析结果表明,片球菌素pediocin PA-1与溶菌素主要通过破坏细菌细胞壁与细胞膜,从而达到抑菌效果。LysM peptidoglycan-binding domain-containing protein可识别含有N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)残基的肽聚糖,上调抗菌肽的表达;辅助蛋白主要参与细菌素的合成,聚酮合酶主要参与抗生素的合成,二者通过参与抑菌物质的合成间接发挥抑菌作用。【结论】本研究成功分离并鉴定植物乳杆菌GX20200417-1的5种抑菌蛋白;植物乳杆菌GX20200417-1可能通过其代谢产物中的多种抑菌蛋白协同发挥抗菌作用。 相似文献
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Two experiments were conducted to examine the ifluence of dietary proteins on parasite establishment and pathogenesis in Finn Dorset/Dorset Horn lambs infected with Haemonchus contortus. The lambs were introduced to high (169 g) or low (88 g crude protein (CP) kg−1 dry matter (DM)) protein diets at 3 months of age and infected 1 month later with 350 larvae kg−1 body weight (BW). Blood and faecal smaples were collected for analysis and body weights recorded weekly. In the first experiments some of the infected lambs were killed 6 weeks after infection and the remainder 5 weeks later. In the second experimental all the infected lambs were killed 4 weeks after infection.
The results showed that lambs on a low protein diet were less able to withstand the pathogenic effects of infection with 350 H. contortus larvae kg−1 BW than lambs given the higher protein diet. Thus mortality was greater in the low protein group and adverse clinical signs, such as inappetance, weight loss and oedema were osbserved more frequently. This group also had a more severe anaemia, hypoproteinaemia and hypoalbuminnaemia than the high protein group. In contrast, faecal egg counts, total daily faecal egg output and worm burdens were similar in all groups of infected lambs, indicating that the diets did not influence parasite establishment. 相似文献
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旨在筛选并鉴定与鸭C4结合蛋白（C4b-binding protein，C4BP）互作的鸭疫里默氏菌（Riemerella anatipestifer，R.anatipestifer）外膜蛋白。本研究将保存的R.anatipestifer复苏培养，提取外膜蛋白，以鸭C4BPα作为诱饵蛋白进行His pull-down及LC-MS/MS蛋白质谱鉴定，筛选与鸭C4BP可能发生互作的候选外膜蛋白；将各候选蛋白进行克隆、原核表达，免疫小鼠制备多克隆抗体，利用Far-western blot验证与鸭C4BP发生相互作用的R.anatipestifer外膜蛋白；针对候选蛋白及C4BPα各功能结构域进行克隆及原核表达，利用Far-western blot鉴定候选蛋白及与C4BP的相互作用位点；利用ELISA对补体因子C3b、C4b及C4BP在R.anatipestifer表面沉积情况进行测定，验证候选蛋白的功能。结果显示，经His pull-down及LC-MS/MS蛋白质谱分析，共筛选出3个与鸭C4BP发生相互作用的R.anatipestifer外膜蛋白，即ECE-1、SODs和Omp62；成功获得3个外膜蛋白多克隆抗体，ELISA检测3种多克隆抗体效价均超过1∶6 400，Western blot检测3种多克隆抗体可以与重组蛋白发生特异性反应；Far-western blot结果显示，仅ECE-1能够与C4BP发生相互作用，并且只有ECE-1全长能与鸭C4BP相互作用，而鸭C4BP与ECE-1的相互作用区域位于C4BPα的SCR 2和SCR 3；当健康鸭血清稀释度为3.125%时，ECE-1抗体能够显著促进补体因子C3b、C4b在R.anatipestifer表面的沉积作用（P<0.05），当健康鸭血清稀释度为6.25%时，ECE-1抗体能够显著抑制C4BP在R.anatipestifer表面的沉积作用（P<0.05）。本研究成功筛选并鉴定出1个与C4BP互作的R.anatipestifer外膜蛋白ECE-1，为进一步阐明R.anatipestifer免疫逃逸机制奠定了基础。 相似文献
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LI Delong GU Jiulong XU Xingsheng WANG Siyuan LIU Ting CHEN Sihuai GAO Jiye LI Jixiang 《畜牧兽医学报》1956,51(11):2825-2835
The purpose of this experiment was to screen and identify the outer membrane proteins of Riemerella anatipestifer (R. anatipestifer) interacting with duck C4b-binding protein (C4BP). The preserved R. anatipestifer was resuscitated, then the outer membrane proteins of R. anatipestifer were extracted and His pull-down and LC-MS/MS were conducted by using duck C4BPα as the bait protein, and the candidate outer membrane proteins that might interact with duck C4BP were screened out. The candidate proteins were cloned, prokaryotic expression was conducted and the polyclonal antibodies were prepared by immunizing the mice. Far-western blot was conducted to verify the outer membrane proteins of R. anatipestifer interacting with duck C4BP. The clone and prokaryotic expression of functional domains of candidate proteins and C4BPα were conducted, and Far-western blot was used to identify the interaction sites between candidate proteins and C4BP. The deposition of complement C3b, C4b and C4BP on the surface of R. anatipestifer were detected by ELISA to verify the function of the candidate proteins. The results showed that a total of 3 outer membrane proteins of R.anatipestifer interacting with duck C4BP were screened out by His pull-down and LC-MS/MS, namely ECE-1, SODs and Omp62. The polyclonal antibodies of 3 outer membrane proteins were successfully prepared, the titers of 3 polyclonal antibodies were more than 1∶6 400 by ELISA, and the result of Western blot showed that 3 polyclonal antibodies could specifically react with corresponding recombinant proteins. The results of Far-western blot showed that only ECE-1 could interact with C4BP, and only the full length of ECE-1 could interact with duck C4BP, and the interaction region between duck C4BP and ECE-1 was located in SCR 2 and SCR 3 of C4BPα. Anti-ECE-1 antibody could significantly increase the C3b and C4b deposition on the surface of R. anatipestifer using 3.125% normal duck serum (NDS, P<0.05), while anti-ECE-1 antibody could significantly decrease the deposition of C4BP on the surface of R. anatipestifer using 6.25% NDS (P<0.05). The study successfully screened out and identified one outer membrane protein (ECE-1) of R. anatipestifer interacting with duck C4BP, which provide a basis to further study the mechanism of R. anatipestifer immune escape. 相似文献
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研究旨在探讨思州鸡骨形态发生蛋白15（BMP15）第1外显子多态性及其与蛋品质的相关性。采用PCR产物直接测序法检测思州鸡BMP15基因第1外显子测序,将测序结果用DNAStar软件校正;利用Excel 2007统计基因型频率数据,并进行卡方适合性检验;通过SPSS 18.0软件对BMP15基因不同基因型与思州鸡蛋品质间的关联性进行分析。结果显示,思州鸡BMP15基因第1外显子存在4个SNPs位点：397C/T、473A/G、603C/T和612C/T,均处于Hardy-Weinberg非平衡状态（P<0.05）;397C/T和603C/T位点的多态信息含量（PIC）分别为0.3488和0.3299,属于中度多态（0.25 < PIC < 0.5）,473A/G与612C/T位点的PIC分别为0.1527和0.2075,属于低度多态（PIC<0.25）。关联性分析结果表明,397C/T位点对思州鸡蛋白高度、哈氏单位、蛋黄重均有显著影响（P<0.05）;473A/G、603C/T位点对思州鸡蛋品质指标均无显著影响（P>0.05）;612C/T位点对思州鸡蛋长径有显著影响（P<0.05）,提示BMP15基因第1外显子对鸡蛋品质中蛋白高度、蛋长径具有较大的遗传效应。结果表明,BMP15基因可能是影响思州鸡蛋品质的基因之一,可作为思州鸡蛋白高度、蛋长径等蛋品质性状的分子标记。 相似文献
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试验旨在研究卵钙蛋白-32（ovocalyxin-32,OCX-32）、卵清蛋白（ovalbumin,OVA）基因多态性与蛋品质性状的关联性,寻找与蛋鸡蛋品质性状相关的分子遗传标记。采用PCR-SSCP技术对海兰褐蛋鸡父母代中OCX-32、OVA基因的多态位点进行检测,使用SPSS 22.0软件将不同基因型与海兰褐蛋鸡蛋品质性状进行关联分析,并进一步在子代中验证,寻找优势基因型。结果显示,OCX-32基因第6外显子中检测到AA、BB和CC 3种基因型,2个突变位点,分别位于7 018和7 116 bp;OVA基因第5外显子中检测到AA、BC、BB 3种基因型,2个突变位点位于4 296和4 323 bp。关联分析结果表明,海兰褐蛋鸡父母代OCX-32基因AA基因型的蛋黄重极显著高于BB和CC基因型（P < 0.01）;海兰褐蛋鸡父母代OVA基因AA基因型的哈氏单位及蛋白高度极显著高于BC基因型（P < 0.01）,显著高于BB基因型（P < 0.05）,AA基因型蛋白重显著高于BC基因型（P < 0.05）。在子代中验证进一步确定了OCX-32基因的AA基因型为调控蛋黄重的优势基因型,OVA基因的AA基因型为调控哈氏单位、蛋白高度和蛋白重的优势基因型。综上所述,OCX-32及OVA基因对蛋品质性状有一定影响,可作为蛋鸡的分子育种标记。 相似文献
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为探讨犬弓首蛔虫（Toxocara canis，T.canis）软骨素蛋白多糖TcCPG1的表达特征及其与几丁质的结合方式，为犬弓首蛔虫软骨素蛋白多糖的功能研究提供依据，笔者克隆T.canis软骨素蛋白多糖1基因（Tc-cpg-1）并原核表达重组蛋白TcCPG1，采用镍柱亲和层析技术对重组蛋白进行纯化，并与几丁质进行结合试验；采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）进行Tc-cpg-1基因的转录水平的性别和组织差异表达分析。结果显示：Tc-cpg-1基因编码区（coding sequence，CDS）的长度为1 251 bp，共编码417个氨基酸；SDS-PAGE电泳结果显示重组蛋白TcCPG1以包涵体形式存在，相对分子质量大小约为70 ku；对表达条件进行优化后，以0.8 mmol·L-1 IPTG于16℃诱导14 h时可获得大量目的蛋白；利用镍柱亲和层析纯化可以获得具有较高纯度的目的蛋白，与几丁质进行结合试验，验证了重组蛋白TcCPG1能够与几丁质结合；通过qRT-PCR对Tc-cpg-1基因转录水平的组织差异性进行分析，发现Tc-cpg-1在雌虫中高量表达，尤其在雌虫的生殖组织中表达量最高，表明Tc-cpg-1可能参与了T.canis雌虫的生殖过程，推测TcCPG1可能通过与卵壳中几丁质的相互作用从而影响T.canis的胚胎和生殖发育过程。 相似文献
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不同发酵水分及菌酶协同发酵对豆粕品质的影响 《畜牧与饲料科学》2022,43(6):22-29
[目的]探讨不同发酵水分及菌酶协同发酵对豆粕品质的影响。[方法]①采用单因素试验设计，设置5个不同水分处理组，料水比分别为1∶0.4、1∶0.5、1∶0.6、1∶0.7、1∶0.8，每个处理组3个重复；使用复合益生菌（枯草芽孢杆菌∶酵母菌∶粪肠球菌=1∶1∶1）发酵豆粕，通过测定分析发酵豆粕表观特征、营养指标及活菌含量，确定最适料水比。②采用单因素试验设计，设置5个不同中性蛋白酶添加量处理组，添加量分别为0、100、200、400、800 IU/g，每个处理组3个重复，进一步测定发酵豆粕表观特征、营养指标、活菌含量及蛋白质亚基分布，确定最佳中性蛋白酶添加量。[结果]①不同料水比条件下，各处理组发酵豆粕粗蛋白水平无显著（P=0.074）差异，料水比为1∶0.6时粗蛋白含量最高，较发酵前提高了9.39%；随着初始发酵水分的提高，发酵豆粕pH值极显著（P<0.01）降低，乳酸含量及3种菌的存活量极显著（P<0.01）升高，1∶0.6组发酵后乳酸含量显著（P<0.05）高于1∶0.4组和1∶0.5组；复合菌的存活量在料水比为1∶0.8时最高，总量达到1.43×109 CFU/g。结合上述试验结果并考虑工业化生产条件，选择料水比为1∶0.6作为最适发酵水分开展后续试验。②在料水比为1∶0.6条件下，不同蛋白酶添加水平对各组发酵豆粕粗蛋白含量的影响不显著（P>0.05），但随着蛋白酶添加量的增加，小分子蛋白水平线性提升，在蛋白酶添加量为800 IU/g的处理组中，<30 kDa范围内的蛋白质水平高达65.56%，较未添加组小分子蛋白质含量提高2.61倍；发酵豆粕中3种菌的存活量随着蛋白酶添加量的增加而降低，100 IU/g处理组枯草芽孢杆菌和粪肠球菌的存活量极显著（P<0.01）高于200、400、800 IU/g处理组，酵母菌的存活量极显著（P<0.01）高于400、800 IU/g处理组。[结论]选择料水比为1∶0.6并在底物中添加100 IU/g的中性蛋白酶协同发酵可有效改善豆粕的品质。 相似文献