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1.
应用聚全酶链反应（ＰＣＲ）对畜型和禽型两个融合基因ＨＢｓＡｇ／ＬＨＲＨ的５’端分别作了改造,切去了融合基因起始密码ＡＴＧ前一段非编码序列６１个碱基,将改造后的融合基因插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｅ １１ ＫＳ＾＋质粒中。琼脂糖凝胶电泳以及序列分析均表明改造和克隆成功。将改造后的融合基因克隆到含Ｔ７Ｐｒｏｍｏｔｅｒ强启动子的表达载体ｐＥＴ１５ｂ中,经异丙基硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导,在Ｅ．ｃｏｌｉＤＥ 相似文献
2.
目的：观察体外培养人胚鼻咽上皮（ＨＥＮＥ）被ＥＢ病毒（ＥＢＶ）感染后，ｃ－ｍｙｃ和ｐ５３表达的变化，以探讨ＥＢＶ和这些癌基因在鼻咽癌发生发展中可能起的作用，方法：体外培养的人胚鼻咽上皮用ＥＢＶ或ＥＢＶ加ＴＰＡ感染（简称Ｅ和ＥＴ组）分别用抗体补体免疫法（ＡＣＩＦ）和碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法（ＡＰＡＡＰ）检测ＥＢＶ核抗原（ＥＢＮＡ）及癌基因ｃ－ｍｙｃ和ｐ５３的表达。结果：体外培养１０例人胚鼻咽上皮细胞 相似文献
3.
奶牛类乙型肝炎病毒感染的诊断 总被引：1，自引：0，他引：1
河南省某奶牛场，采成年母牛血清２００份，鲜牛分，用ＥＬＩＳＡ法检测乙型肝炎“两对半”，阳性结果如下：牛血清ＨＢｓＡｇ７份，抗－ＨＢｓＡｇｌ份，抗－ＨＢｅ２份，抗－ＨＢｃ零份。１００份鲜牛奶阳性数：ＨＢｓＡｇ２份，抗－ＨＢｓ１０份，ＨＢｅＡｇ１份，抗－ＨＢｅ２，抗－ＨＢｃ零份。电镜观察到ＨＢＶ核心抗原阳性血清中有球形病毒颗粒。 相似文献
4.
从河南部分地区收集鸡血清３１２份，用ＥＬＩＳＡ法分别检测：（１）抗甲型肝炎病毒抗体－ＩｇＭ（ＨＡＶＩｇＭ）；（２）乙型肝炎病毒“两对半”；（３）抗丙型肝炎病毒抗体。其结果３１２份鸡血清抗ＨＡＶＩｇＭ和抗ＨＣＶＡｂ全部阴性。乙肝病毒“两对半”血清阳性数分别为：ＨＢｓＡｇ１８份，抗－ＨＢｓ１６份，ＨＢｅＡｇ１４份，抗－ＨＢｅ２份；抗－ＨＢｃ零份。 相似文献
5.
采用固相亚磷酸三酯法人工化学合成了人胰岛素样生长因子－Ⅰ（ｈｕＩＧＦ－Ｉ）基因的４条寡核苷酸 片段，再通过片段１、２与３、４末端互补配对和Ｋｌｅｎｏｗ酶促补平及酶切连接成为完整的ｈｕＩＧＦ－ＩＤＮＡ片段，用 ＥｃｏＲ Ｉ／ＰｓｔＩ酶切后克隆于 ｐＧＥＭ Ｔ－Ｅａｓｙ Ｖｅｃｔｏｒ，经测序证明所得 ＤＮＡ序列与设计的序列完全一致；选用植物 偏爱密码子校正了启始密码子ＡＴＧ下游的６个密码子，并在ＡＴＧ处增加Ｋｏｚａｋ序列后，插入ｐＢＩ１２１的ＢａｍＨＩ／ ＳａｃＩ位点，构建了以 ３５Ｓ为启动子的植物表达载体；以 Ｈｉｎｄ ＩＩ／ＥｃｏＲＩ切下“３５Ｓ－Ｋｏｚａｋ－ＩＧＦ－Ｉ－ＮＯＳ（ｔｅｒ．）”插入 ｐＣＡＭＢＩＡ２３００之Ｈｉｎｄ ＩＩ／ＥｃｏＲ Ｉ位点，构建成ｈｕＩＧＦ－Ｉ植物表达载体；通过ＣａＣｌ２直接转化法将表达载体导入农 杆菌ＥＨＡ１０５（Ｒｉｆ．ｒ），并以菌落原位杂交技术和 ＤＮＡ ｄｏｔ ｂｌｏｔ对重组农杆菌进行了筛选，所获得的重组农杆菌菌株为培育ｈｕＩＧＦ－Ｉ豆药用植物奠定了基础。 相似文献
6.
薛慧文 《甘肃农业大学学报》1998,33(1):9-12
用放射免疫分析方法测定了４５峰双峰驼血清样品中类人乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、乙型肝炎表面抗体（抗－ＨＢｓ）、乙型肝炎核心抗原（ＨＢｃＡｇ）、乙型肝炎核心抗体（抗－ＨＢｃ．ＩｇＭ）、乙型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）和乙型肝炎ｅ抗体（抗－ＨＢｅ）,结果仅检测到１例抗－ＨＢｓ阳性样品,总阳性率为２．１１％,其ＳＸ／ＮｃＸ＝１２．２３３。 相似文献
7.
用限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ,从克隆载体ｐＵＴＳⅡ中切出一个０．９８８ｋｂＴＳＰＧⅡ基因,经ＥｃｏＲＩ和ＢｓｔＸＩ酶切鉴定,同时表达载体也用相同的酶进行酶切,经琼脂糖凝胶电泳,分别回收ＴＳＰＧⅡ基因和ｐＳＶ·ＳＰＯＲＴⅠ表达载体,用Ｔ４ＤＮＡ连接酶定向连接,转化大肠杆菌感受态细胞,挑取重组子,经ＥｃｏＲⅠ,ＢｓｔＸⅠ和ＨｉｎｄⅢ酶切鉴定,构建了重组表达质粒ｐＳＶ·ＴＳⅡ． 相似文献
8.
应用ＥＬＩＳＡ技术对３０份羊血清，肌肉肝脏标本进行了ＨＢＶ－ＨＢｓＡｇ水平检测，结果血清阳性率２０％，肝脏阳性率１０％。表明羊体内含有ＨＢＶ－ＨＢｓＡｇ相似的类属抗原及相关抗体，提示对羊体内检出ＨＢＶ－ＨＢｓＡｇ应起重视，建议对羊开展乙肝的在ＨＢＣ与人ＨＢＶ的异同及关系，寻找ＨＢＶ动物模型． 相似文献
9.
家蚕核多角体病毒Lef—1和DA26基因的克隆及部分序列分析 总被引：2，自引：1，他引：2
ｌｅｆ－１和ＤＡ２６基因分别位于ｅｇｔ基因的上游和下游．从ｐＵＡｃ－ｅｇｔ中分离出ＥｃｏＲＩ－ＸｂａＩ１．１ｋｂ的ｅｇｔ基因片段，进行缺口平移标记，获得探针。与ＢｍＮＰＶＤＮＡ经ＨｉｎｄⅢ酶切、电泳、转移至ＮＣ膜的ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交，发现ＢｍＮＰＶＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢＤ片段呈阳性。从ＢｍＮＰＶ基因组中分离出１０．４ｋｂ的ＨｉｎｄⅢＤ片段，用ＥｃｏＲＩ酶切得到ＨｉｎｄⅢ－ＥｃｏＲＩ２．２ｋｂ、ＥｃｏＲＩ１．４ｋｂ和ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄⅢ６．８ｋｂ３个片段，分别克隆于ｐＵＣ１９中，命名为ｐＵＨＥ２．２、ｐＵＥ１．４和ｐＵＥＨ６．８。经双链测序并与ＡｃＮＰＶ相关基因序列进行比较，发现ｌｅｆ－１基因被克隆于ｐＵＨＥ２．２中，ＤＡ２６基因克隆于ｐＵＥＨ６．８中。从所测定的ｌｅｆ－１和ＤＡ２６基因的启动子及５＇端部分序列来看，它们在ＡｃＮＰＶ和ＢｍＮＰＶ之间有极高的同源性。 相似文献
10.
用ＥｃｏＲＩ酶切ＰＲ５Ｂ４质粒，采用“Ｖ”字形内槽电洗脱法回收约０．８０４Ｋｂ牛冠状病毒基因工程抗体４Ｈ１２／１Ｄ４单链基因片段，并将其插入载体质粒ＰＥＴ－１７ｂ的ＥｃｏＲＩ位点构成重组质粒ＰＥＴ－Ｄ４，将重组质粒转化ＤＨ５α感受态细胞，在ＩＰＴＧ的诱导下表达，细菌裂解物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳筛选，发现含ＰＥＴ－Ｄ４细菌经诱导新增一条约２８ＫＤα蛋白带，该蛋白带与设计基因工程抗体的大小相符，经光密度扫描，表达量约占菌体总蛋白的１４％ 相似文献
11.
从成熟的番茄果实中提取总ＲＮＡ,进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增合成乙烯形成酶ｃＤＮＡ,并将其克隆至载体Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ的ＥｃｏＲＶ位点,经限制酶谱分析,构建亚克隆进行全序列测定和序列分析。将所克隆基因以反义基因的形式定向重组到载体ｐＳＰＲＯＫ上,同时将带有完整启动子和终止子的标记基因ＢＡＲ基因引入ｐＳＰＲＯＫ中,最终获得表达乙烯形成酶反义基因和ＢＡＲ基因的植物表达载体ｐＢＡＲ－ＥＦＥ。 相似文献
12.
用ELISA法检测烟草种子带有赤星病菌（Alternaria alternata）的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
用烟草赤星病菌的悬浮液免疫家兔，得到效价为１：６４Ｏ的抗血清，按硫酸该沉淀法和ＤＥＡＥ纤维素离子交换柱层析法提取抗体球蛋白ＩｇＧ，用ＥＬＩＳＡ间接法进行试验，结果表明：辣根过氧化物酶标记羊抗兔结合物的最适稀释度为１：１００，最适抗体球蛋白ＩｇＧ的浓度为４～６μｇ／ｍＬ。该抗体球蛋白ＩｇＧ对来自吉林省内的５个市县的８个烟草赤星病菌株全部呈阳性反应．而对Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｃｕｕｃｕｍｅｒｉｎａ和Ａｌｔｅｒｎａｒｉａｐｏｒｒｉ则呈阴性反应，对种子分离得到的Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐ．和Ｐｈｙｌｌｏｓｔｉｃｔａｓｐ．等４种真菌及烟草野火病菌和Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｓｐ．均呈阴性反应，表明该抗体球蛋白ＩｇＧ的特异性很强。对７种不同浓度孢子悬液接种花器所获种子进行检测．均呈阳性反应，对来自３省６个品种１３份种子进行检测，８价呈阳性反应．５份呈阴性反应，与种子分高培养结果一致。用ＥＬＩＳＡ法检测烟草种子是否带有赤星病菌是一种快速而准确的方法。 相似文献
13.
某猪场乙型肝炎病毒感染的血清流行病学调查报告 总被引：1，自引：0，他引：1
于某大型养猪场随机抽样人血清１２０份，猪血清２０４份，分别进行乙肝病毒“两对半”检测。１２０份人血清阳性数：ＨＢｓＡｇ１９份，抗－ＨＢｓ３４人份；ＨＢｅＡｇ７人份，抗ＨＢｅ２６人份；抗－ＨＢｃ１７人份。其中ＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ，抗－ＨＢｅ的三阳性为５人份。２０４份猪血清阳性数：ＨＢｓＡｇ２４份，抗－ＨＢｓ３２份；ＨＢｅＡｇ１４份，抗－ＨＢｅ１份；抗－ＨＢｃ零份。 相似文献
14.
尿激酶原基因cDNA在BHK21细胞中的表达 总被引：1，自引：0，他引：1
将人尿激酶原基因ｃＤＮＡ分别插入到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子和ｐＳＶ２ｎｅｏ的ＳＶ４０启动子下游,构建了重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ－２－ＵＫ分别将这两种表达质粒以脂质体载体法转染ＢＨＫ２１细胞。ＥＬＩＳＡ检测结果表明,ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ２－ＵＫ在哺乳动物细胞中能够表达,７２ｈ表达量分别为２８．７ｎｇ／ｍｌ和１３．５ｎｇ／ｍｌ。 相似文献
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本文作者构建了ｐＸＭ１和ｐＧＣＹ６两个质粒，其中质粒ｐＸＭ，含有高赖氨酸基因和ＧＵＳ报告基因，质粒ｐＧＣＹ６则由裂解多肽Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ｂ基因和ＧＵＳ基因组成。这两个基因均以ＣａＭＶ３５Ｓ作为启动子，以ＮＯＳ作为终止子。经纯化的质粒ＤＮＡ以ＰＥＧ法导入４个水稻品种：８９－２、Ｌａｃｃａｓｉｎ、Ｃｙｐｒｅｓｓ、台北３０９细胞悬浮系的原生质休中，组织化学检测结果表明，ＧＵＳ基因在原生质体、愈伤组织及 相似文献
16.
用携带植物抗病毒基因表达栽体ｐＢＴＵ的农杆菌转化油菜双低品种Ｈ０９０．Ｈ１６６，最大量转基因植株。栽体质粒ＰＢＴＵ上有卡那霉素抗性标记基因和ＣａＭ３５Ｓ启动子控制的芜菁花叶病毒ＴｕＭＶ－ｃｐ外壳蛋白基因，用品种Ｈ０９０和１６６的带柄子叶与携带载体质粒的农杆菌共培养后，将其转移到含有６－ＢＡ１－１０ｍｇ／ｌ的ＭＳ培养其中，７－１５天后又将其转移到含有６－ＢＡ１－１０ｍｇ／ｌ的ＭＳ加卡那霉素１０ｍｇ的 相似文献
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将人尿激酶原（Ｐｒｏ－ＵＫ）基因ｃＤＮＡ分别插入到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子和ｐＳＶ２－ｎｅｏ的ＳＶ４０启动子下游,构建了重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ２－ＵＫ,分别将这两种表达质粒以脂质体载体法转染ＢＨＫ２１细胞。ＥＬＩＳＡ检测结果表明,ｐｃＤＮＡ３－ＵＫ和ｐＳＶ２－ＵＫ在哺乳动物细胞中能够表达,７２ｈ表达量分别为２８．７ｎｇ／ｍｌ和１３．５ｎｇ／ｍｌ。 相似文献
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应用昆虫杆状病毒载体在昆虫细胞中表达乙肝表面抗原 总被引：1，自引：0，他引：1
人乙型肝炎病毒（ａｄｒ亚型）表面抗原Ｓ基因克隆到ＰｕＡＣ－５苜蓿尺蠖核型多角体病毒转移载体上，所构建的重组转移载体质粒与野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ共转染Ｓｆ－２１细胞，经空斑法筛选和纯化，得到了含ＨＢＶＳ基因的重组病毒ＡｃＮＰＶＳ．用放射免疫法测定了ＡｃＮＰＶＳ感染的Ｓｆ－２１细胞及其培养液中的ＨＢｓＡｇ，总表达量为１．２２μｇ／１０＾６细胞。 相似文献
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人乙型肝炎病毒（ａｄｒ亚型）表面抗原Ｓ基因克隆到ＰｕＡＣ－５苜蓿尺蠖核型多角体病毒转移载体上，所构建的重组转移载体质粒与野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ共转染Ｓｆ－２１细胞，经空斑法筛选和纯化，得到了含ＨＢＶＳ基因的重组病毒ＡｃＮＰＶＳ．用放射免疫法测定了ＡｃＮＰＶＳ感染的Ｓｆ－２１细胞及其培养液中的ＨＢｓＡｇ，总表达量为１．２２μｇ／１０￣６细胞． 相似文献
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利用低融点琼脂糖凝胶电泳，回收牛生长激素ｃＤＮＡ全序列，克隆于原核表达载体ＰＴ７７－７中Ｔ７启动子下游，转化大肠杆菌Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α，经分离，酶切分析，获得６个牛生长有质粒ＰＴＧＨ１－６，选取其中两质粒ＰＴＧＨ１１－２，转化Ｅ．ｃｏｌｉＫ８３＝ｐＧ１－２，４２℃诱导３０ｍｉｎ，收集，破裂菌体，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳检测，于２２ＫＤ处有一特异性蛋白带，经ＳｈａｍａｄｚｕＣＳ９３０扫描测定，其表达量 相似文献