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应用ELISA和AGP检测鸡白血病病毒的比较 总被引：4，自引：2，他引：2
应用ＥＬＩＳＡ和ＡＧＰ检测羽随和蛋清中鸡白血病病毒ＡＬＶ，样品采用同一品系的普通原种鸡群。当用此二种方法同时检测同一种样品中ＡＬＶ的群特异性抗原时发现，ＥＬＩＳＡ的阳性率高于ＡＧＰ，ＥＬＩＳＡ显示出较高的敏感性。当同时用ＡＧＰ检测羽髓样品和用ＥＬＩＳＡ检测蛋清样品来鉴定同一鸡群中潜在的ＡＬＶ感染母鸡时，结果表明ＥＬＩＳＡ的阳性率高于ＡＧＰ，而且有一定比例的ＡＧＰ阳性鸡用ＥＬＩＳＡ检测时为阴性，因此 相似文献
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Dot-ELISA检测减蛋综合征病毒的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
将辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）直接标记到ＭｃＡｂ（ＩｇＧ）上，建立了检测减蛋综合征（ＥＤＳ７６）病毒的ＤｏｔＥＬＩＳＡ方法，可敏感、特异、及早、快速地检测细胞培养物和实验感染鸡样品中的病毒抗原，某发病鸡场的泄殖腔拭子样品的阳性率为４３３３％（１３／３０）。 相似文献
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应用酶标ＳＰＡ抑制染色法（ＰＰＡＩ）对ＲＰＶ及相关各种样品进行了检测，并与ＨＡ／ＨＩ进行了比较。本法检测已知阳性粪便样品的效价比ＨＡ高３倍，检测ＲＰＶ细胞培养物的效价比ＨＡ高５倍，能检出少至８０．８ｎｇ／ｍｌ的病毒抗原。应用ＰＰＡＩ、ＨＡ／ＨＩ对来自不同地区２５１份可疑粪样的检测结果表明：ＰＰＡＩ平均检出率为６９．７％，ＨＡ／ＨＩ平均检出率为４６．６％。ＰＰＡＩ比ＨＡ／ＨＩ高２３．１％，与ＨＡ／Ｈ 相似文献
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鸡传染性喉气管炎王岗株病毒（ＩＬＴＶ）经ＳＰＦ鸡肾细胞增殖，差速离心及蔗糖密度梯度离心纯化，电镜观察。以纯化的病毒４次免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，按常规方法进行细胞融合，采用有限稀释法克隆，经ＥＬＩＳＡ筛选出３株（８Ｅ２、１３Ｇ６、９Ｃ４）分泌抗ＩＬＴＶ特异ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞。特异性试验表明它们与鸡的传染性支气管炎、痘病毒、新城疫病毒、马立克氏病病毒、白血病病毒及鸡肾细胞均无交叉反应。在获得的三株单抗建立单抗夹心－ＥＬＩＳＡ法基础上，首次建立了快速检测喉气管炎感染的ＥＬＩＳＡ试剂盒，对ＩＬＴＶ纯病毒的最小检出量为３１．０ｎｇ／ｍｌ病毒蛋白。以该试剂盒对黑龙江省哈尔滨地区、辽宁省沈阳、大连地区、山东省济南及上海等地６５６５份喉部株拭样品进行检测，共检出阳性１１５４头份。对部分ＥＬＩＳＡ阳性和阴性样品进行平行病毒分离，结果阳性符合率为１００％（１１２／１１２），阴性符合率为９５％（３８／４０）。研究表明，该试剂盒特异性强，重复性好。该方法的建立为鸡群疫病监测，免疫鸡群抗体水平检测提供了新的可靠方法。 相似文献
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应用ELISA双抗体夹心法检测传染性法氏囊病免疫器官病毒抗原… 总被引：2，自引：0，他引：2
利用ＩＢＤＶ高免血清ＩｇＧ作为包被抗体，成功地建立了双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ，对人工感染雏鸡免疫器官抗原动态分布进行了检测。结果表明，不同毒株感染雏鸡免疫器官病毒抗原含量不一致，持续时间也有差异。采用本方法共检测ＩＢＤ阳性样品２７５份，检出率为１００％，检测对照阴性样品２５份，结果均为阴性，比ＡＧＰ法检测率高４０％左右，灵敏度高１００￣２００倍。试验证明双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ可用于组织抗原分布的检测 相似文献
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微小双链ＲＮＡ病毒是最近从几种脊椎动物粪便中发现的病毒新成员。用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测一兔场兔的２１１份粪便样品，２３份（１１％）有病毒，用电镜和氯化铯等密度离心分析进一步证明粪样中存在生小双链ＲＮＡ病毒，给３只刚断奶的兔口纯化的病毒后，有２只排出病毒，其电泳谱与接种物一致，接种后第１３天排出病毒量最多，接鸣谢 排玩腹泻症状，接种兔的配对血清样口未检出抗体。 相似文献
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光敏生物素标记核酸探针检测A群轮状病毒的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
采用光敏生物素标记Ａ群轮状病毒（ＧＡＲＶ）全基因组ＲＮＡ，制备了ＧＡＲＶ群特异核酸探针，该探针与样品进行打点杂交，经亲和素－碱性磷酸酶（ＡＶ－ＡＰ）系统显色，可检出１００ｐｇ病毒ＲＮＡ序列。试验表明轮状病毒光敏生物素核酸探针具有特异，灵敏，稳定的特点，可用于ＧＡＲＶ的检测和进行基因相关性研究。 相似文献
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采用光敏生物素标记Ａ群轮状病毒（ＧＡＲＶ）全基因组ＲＮＡ，制备了ＧＡＲＶ群特异核酸探针，该探针与样品进行打点杂交，经亲和素－碱性磷酸酶（ＡＶ－ＡＰ）系统显色，可检出１００ｐｇ病毒ＲＮＡ序列。试验表明轮状病毒光敏生物素核酸探针具有特异、灵敏、稳定的特点，可用于ＧＡＲＶ的检测和进行基因相关性研究。 相似文献
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产蛋下降综合征（EDS－76）病毒DNA探针的制备及应用研究 总被引：2，自引：0，他引：2
用纯化的产蛋下降综合征（ＥＤＳ－７６）病毒（Ｈ９１毒株）悬液提取的核酸，经琼脂糖凝胶电泳只出现１条分子量较大、背景清晰的核酸带。用ＢａｍＨＩ酶消化产生４个片段，大小分别为１７ｋｂ、１０ｋｂ、４．０ｋｂ和２．０ｋｂ。将其中的２．０ｋｂ片段克隆进ｐＵＣ１８ＤＮＡ载体中，重组质粒ＤＮＡ用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记作为ＤＮＡ探针，在ｄｏｔｂｌｏｔ中该探针不与鹅胚尿囊液核酸抽提物、马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＤＮＡ、鸡传染性贫血病毒（ＣＡＶ）ＤＮＡ、ＳＰＦ鸡基因组ＤＮＡ等核酸反应，只与３株ＥＤＳ病毒（ＥＤＳ标准毒株ＡＶ－１２７、ＥＤＳＨ９１毒株和从健康鹅体中分离的ＥＤＳＹ８１毒株）ＤＮＡ呈阳性反应。人工感染产蛋母鸡和雏鸡后２４ｈ即可用该探针从泄殖腔棉拭子样品中检测出ＥＤＳ病毒ＤＮＡ，在感染后３５ｈ仍能从部分感染鸡样品中检出。对部分探针检测阳性鸡的泄殖腔棉拭子样品用ＳＰＦ鸡胚分离病毒，并用ＨＡ和ＨＩ试验检测分离病毒的特异性；在感染过程中，同时检测了血清中ＨＩ抗体的消长情况。结果表明，人工感染鸡排毒至少可以维持２个月左右，而且血清中ＨＩ抗体即使很高，也不能阻止感染鸡的排毒。 相似文献
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应用反转录—聚合酶链反应检测动物组织中的口蹄疫病毒 总被引：4，自引：0，他引：4
应用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测了猪和牛的扁桃体、淋巴结、脊髓、肌肉和蹄冠皮肤中的口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）。与接种乳鼠测毒法比较，该方法的灵敏度达０．１６ＬＤ５０￣０．３２ＬＤ５０病毒量。检测人工感染后７￣３５ｄ的猪组织样品７７份，２５份为阳性；接种乳鼠并盲传３代，乳鼠－间接血凝试验（ＩＨＡ）鉴定６份为阳性。检测人工感染后４￣７ｄ的牛组织样品５２份，２０份为阳性；接种乳鼠－ＩＨＡ鉴定 相似文献
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RT-PCR快速诊断禽流感 总被引：18，自引：0，他引：18
根据禽流感病毒ＮＰ基因的序列分析结果,设计了一对ＮＰ基因特异的引物。采用该对引物,不经病毒分离,直接从禽流感病毒感染鸡的气管、泄殖腔棉拭子和组织样品中提取核酸, ＲＴ～ＰＣＲ可以扩增出 ３２６ｂｐ的 ＮＰ基因片段。采用该技术对１４个亚型禽流感病毒标准参考株,４个亚型１２株国内分离野毒株,ＲＴ－ＰＣＲ检测的结果都呈阳性;对新城疫病毒、传染性法氏囊病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒以及减蛋综合症病毒,ＲＴ－ＰＣＲ扩增结果都呈阴性。禽流感病毒 Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ（Ｈ５Ｎ１）和 Ａ／Ａｆｒｉｃａｎ Ｓｔａｒｌｉｎｇ／Ｅｎｇｌａｎｄ（Ｈ７Ｎ１）实验感染鸡样品 ＲＴ－ＰＣＲ检测与鸡胚病毒分离阳性率分别为３４／４２、３２／４２; ２４／５５、２４／５５, 二者符合率大于９５％。 ＲＴ－ＰＣＲ最少可检测到１０ｐｇ的病毒核酸。对山东某地发病鸡场样品进行ＲＴ－ＰＣＲ检测,只用６个小时就可得出准确的诊断结果,证明ＲＴ－ＰＣＲ检测方法敏感特异,可用于禽流感的快速诊断。 相似文献
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利用ＩＢＤＶ高免血清ＩｇＧ作为包被抗体，成功地建立了双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ，对人工感染雏鸡免疫器官抗原动态分布进行了检测。结果表明，不同毒株感染雏鸡免疫器官病毒抗原含量不一致，持续时间也有差异。采用本方法共检测ＩＢＤ阳性样品２７５份，检出率为１００％，检测对照阴性样品２５份，结果均为阴性，比ＡＧＰ法检出率高４０％左右，灵敏度高１００～２００倍。试验证明双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ可用于组织抗原分布的检测，并且该方法具有特异性、高度敏感性，稳定性、快速性等优点，是一种实用的组织病毒检测方法。 相似文献
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禽流感RT-PCR诊断法的建立 总被引：5，自引：0，他引：5
根据禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｂｒｅｓｌｉｎ／１９０２（Ｈ７Ｎ７）株的血凝素（ＨＡ）基因参考序列设计合成一对Ｈ７ＨＡ特异引物,并应用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒ＲＮＡ,建立了逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＡＩＶＲＮＡ的方法。应用此法对鸡胚培养的ＡＩＶ尿囊液、ＳＰＦ感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒（ＮＤＶ）、传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）、传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合征病毒（ＥＤＳ－７６Ｖ）等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明,ＡＩＶ尿囊液ＲＴ－ＰＣＲ全部阳性,ＳＰＦ感染鸡粪便８７份,ＲＴ－ＰＣＲ检出６９份阳性,样品处理浓缩后琼脂扩散检出１１份,电镜检测了２３份样品,仅检出２份阳性。非特异性对照样品经ＲＴ－ＰＣＲ检测全部阴性。将ＡＩＶ感染鸡胚尿囊液作１０倍系列连续稀释,可检出稀释度为１０－２的病毒尿囊液。ＲＴ－ＰＣＲ最早检出时间为感染后第３天,而琼扩和电镜均是７天。该法具有高度的特异性和灵敏性,且节约时间（只需８小时左右）,可从分子水平上对ＡＩＶ进行早期快速诊断和流行病学调查 相似文献
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应用杆状病毒表达的重组核蛋白及单抗建立了竞争ＥＬＩＳＡ（Ｃ－ＥＬＩＳＡ），用于抗Ａ型禽流感病毒核蛋白抗体的检测。试验检测了７５６只鸡，１１２３只火鸡，７０７只鸸鹋和１２６１只鸵鸟的共３８４７个血清样品。与琼脂扩散试验（ＡＧＩＤ）对比，Ｃ－ＥＬＩＳＡ方法对上述四种血样的敏感性均为１００％；而与血凝抑制试验（ＨＩ）相比，则其敏感性在鸡、火鸡和鸸鹋为１００％。鸵鸟为９６．２％。经ＡＧＩＤ检测为阴性而Ｃ－ 相似文献
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应用单克隆抗体建立夹心ELISA检测EDS—76病毒 总被引：3，自引：1，他引：2
利用单克隆抗体建立夹心ＥＬＩＳＡ方法，对人工感染鸡带毒和排毒检测，表明第３天血、脾、输卵管带毒，第８天时各脏器几乎都带毒，第１４天仅输卵管、肾、肝检出病毒。第６天时鸡蛋带毒，泄殖腔排毒；直至１４天时仍带毒和排毒。夹心ＥＬＩＳＡ与ＨＡ、鸭胚接种相比较，在３６份样品中，ＨＡ检出１９份。ＥＬＩＳＡ检出２４份，鸭胚接种检出１２份。病毒在鸭胚和细胞上复制动态表明，２４小时后血凝试验和夹心ＥＬＩＳＡ都能检出病毒，随着时间延长，ＨＡ价和ＥＬＩＳＡ价（ＰＮ）继续上升，８４小时至９６小时到最高峰。在２４小时时，无血凝性，但ＥＬＩＳＡ检测为阳性，因此夹心ＥＬＩＳＡ可用于病毒检测。单抗夹心ＥＬＩＳＡ的建立为生产上提供了一种更简单、快速、灵敏、应用广泛的病毒检测方法。 相似文献
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用平板红细胞凝集（ＨＡ）试验对鸡产蛋下降综合症（ＥＤＳ－７６）病毒进行了快速定性检测，并与微量ＨＡ试验进行了对比。结果表明，当病毒ＨＡ滴度在５×２＾１２及其以上时，在１０－２５℃范围内于半分钟可与１０％鸡红细胞（ＲＢＣ）发生极明显的大片凝集。当病毒ＨＡ滴度在５×２＾１０以下时，则凝集片明显较小，且反应时间在２分钟以上。这种凝集现象可被ＥＤＳ－７６阳性血清特异性抑制。此法可用于对大批量样品中高效价病 相似文献
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肾型鸡传染性支气管炎病毒油佐剂灭活苗免疫抗体形成规律 总被引：3，自引：1，他引：2
以肾型鸡传染性支气管炎病毒油佐剂灭活苗免疫１５日龄ＡＡ鸡，采用间接血凝试验分别检测免疫后第５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０天的病毒抗体绘制成免疫抗体制成曲线，采用１５日龄无母源抗体ＡＡ鸡对比试验，分别检测肾型鸡传染性支气管炎病毒强毒株攻毒后不同时间的病毒抗体，绘制成抗体形成曲线，比较两曲线可知肾型鸡传染性支气管炎病毒油佐剂灭活苗免疫后第５天可检测到病毒抗体，抗体水平高峰期出现在免疫后第 相似文献