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1.
应用ＬＢ培养基３７℃、１５０ｒ／ｍｉｎ振荡培养１７小时,室温４０００ｒ／ｍｉｎ,离心３０分钟,收集沉淀菌体,用ＰＢＳ离心洗涤一次,沉淀物重悬于适量的ＰＢＳ中。三等分菌体悬浮液分别用超声波、冻融、热休克等方法处理后,室温８０００ｒ／ｍｉｎ离心３０分钟,取上清液加入饱和硫酸铵４℃过夜,沉淀蛋白经透析,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０过柱纯化。应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、凝胶扫描测定Ｋ８８、Ｋ９９蛋白的分子量及浓度,双向免疫扩散、ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ试验测定其抗原性。结果表明,热休克法分离纤毛抗原是最好的方法,从Ｃ株Ｅ株分离得到的纤毛抗原,在分子量大小及对单抗亲和反应能力方面没有明显的差异。 相似文献
2.
本研究酸脱毛法,将供试工程菌物进行脱毛,提取制备表达蛋白,并对酸脱毛法的最适ＰＨ值、最佳温度、最佳时间进行探讨,ＳＤＳ＿ＰＡＧＥ分析结果证明,酸脱毛法脱牧场来２、脱毛温度为６０℃、脱毛时间为３０分钟时,表达蛋白分离提取的效果最佳。对提取蛋白进行琼扩,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析,结果表明所提取蛋白具有较高的抗原活性,并能被Ｋ８８Ｋ９９单克隆抗体所识别。 相似文献
3.
对几种提纯弓形体抗原的方法进行了比较。结果,分别经５０００ｒ、１００００ｒ、１５０００ｒ／ｍｉｎ离心３０分钟的粗抗原,用于检测弓形体抗体的Ｐ／Ｎ值依次为５．０５、５．６０、６．４３。用１００００ｒ／ｍｉｎ３０分钟处理的粗抗原（Ｒ１００００）,经凝胶柱层析分离洗脱,呈现２个蛋白峰（Ｆ１、Ｆ２）,经免疫学测定,其主要的抗原活性部分存在于Ｆ１中。Ｒ１００００抗原用５０％硫酸铵沉淀（Ｓ５０）的蛋白质得率达 相似文献
4.
弓形体抗原的纯化与分析 总被引：1，自引：0，他引：1
对几种提纯弓形体抗原的方法进行了比较。结果,分别经５０００ｒ、１００００ｒ、１５０００ｒ／ｍｉｎ离心３０分钟的粗抗原,用于检测弓形体抗体的Ｐ／Ｎ值依次为５．０５、５．６０、６．４３。用１００００ｒ／ｍｉｎ３０分钟处理的粗抗原（Ｒ１００００）,经凝胶柱层析分离洗脱,呈现２个蛋白峰（Ｆ１、Ｆ２）,经免疫学测定,其主要的抗原活性部分存在于Ｆ１中。Ｒ１００００抗原用５０％硫酸铵沉淀（Ｓ５０）的蛋白质得率达６４％;用７０％硫酸铵沉淀（Ｓ７０）的蛋白质率为３５％。Ｒ１００００与Ｆ１、Ｆ２、Ｓ５０、Ｓ７０５个抗原,经ＥＬＩＢ后用高免兔血清识别的条带数：Ｆ１和Ｆ２各１条、Ｓ５０Ｚ条、Ｓ７０和Ｒ１００００各３条。除Ｆ２之外,３９～４０ＫＤ为４种抗原的共同反应区带。用上述５种抗原致敏反应检测弓形体抗体,以Ｓ５０具有更高的敏感性和特异性。 相似文献
5.
在人工感染ＩＢＤＶ鸡的腔上囊组织液中加入氯仿，经４０００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，除去腔上囊组织蛋白，然后用硫酸铵沉淀病毒。提纯后的病毒颗粒直径为６０ｍｎ左右，无囊膜。用紫外分光度计测定，病毒蛋白含量为４．０ｍｇ／ｍＬ；用琼脂扩散试验检测，其效价为１：１６；用ＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ诊断盒检测，其效价为１：３２０。 相似文献
6.
本试验用Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液（Ｔ）、ＰＢＳ缓冲液（Ｐ）、生理盐水（Ｓ）和２Ｍ尿素ＰＢＳ缓冲液（Ｕ）以热处理的方法提取大肠杆菌Ｋ９９和Ｆ４１菌毛抗原,并用硫酸铵盐析纯化Ｋ９９以及用１Ｎ醋酸滴定和氯化镁沉淀分别纯化Ｆ４１。根据ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳和蛋白质含量测定结果,四种缓冲液对Ｋ９９的提取量依次是Ｕ〉Ｓ〉Ｐ,而Ｔ检不出Ｋ９９;对Ｆ４１的提取量依次是Ｕ〉Ｔ〉Ｐ〉Ｓ。Ｋ９９纯化后取得了满意的纯化结果, 相似文献
7.
经半固体诱导，用Ｍ－肉汤培养沙门氏菌，离心收集细菌，将其悬浮于ＰＨ２．０溶液中，室温缓慢振荡３０分钟．再经差速离心取上清液用１ＮＮａＯＨ溶液调ｐＨ至７．２左右。经硫酸铵沉淀，过ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－３００柱，收集第一峰。电镜观察、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等电聚焦试验及ＥＬＩＳＡ试验结果均表明提纯的鞭毛蛋白纯度高。 相似文献
8.
沙门氏菌鞭毛蛋白的提纯与鉴定 总被引：4，自引：0，他引：4
经半固体诱导，用Ｍ－肉汤培养沙门氏菌，离心收集细菌，将其悬浮于ｐＨ２．０溶液中，室温缓慢振荡３０分钟，再经差速离心取上清液用ＮａＯＨ溶液调ｐＨ至７．２左右，经硫酸铵沉淀，过Ｓｅｐｈａｃｒｙ１ Ｓ－３００柱，收集第一峰。电镜观察、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，等电聚焦试验及ＥＬＩＳＡ试验结果均表明提纯的鞭毛蛋白纯度高。 相似文献
9.
中国黑白花奶牛混合鲜乳，高速离心脱脂后以５０～１００℃加热或磁化１５分仲，测定乳中三种酶活力，并采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ观察乳蛋白组成变化，结果表明：经７Ｏ℃以上热处理后牛乳中碱性磷酸酶（ＡＫＰ）基本失活，乳过氧化物酶（ＬＰ）和纤溶蛋白酶（Ｐｌａｓｍｉｎ）相对较稳定，需８０℃以上加热，磁化处理对乳中酶活力影响不一致，脱脂乳经磁化后三种酶活力稍有提高，磁化底物使纤溶蛋白酶活力增加６０％以上。磁化处理对乳３０℃保温２０小时后滴定酸度影响不显著。牛乳中白细胞内ＡＫＰ比活力为０．０２４单位／毫克蛋白，ＬＰ比活力为５．５６单位／毫克蛋白，极显著低于乳中酶的比活力，表明它们不是乳中ＡＫＰ和ＬＰ的主要来源。乳蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明，８０℃以上加热使乳牛α－乳清蛋白、β－乳球蛋白发生部分聚合，并对酪蛋白（ＣＳＮ）产生一定影响。磁化后乳中ＣＳＮ同热处理后乳ＣＳＮ电泳特性有相似之处，可能ＣＳＮ空间结构发生了变化。 相似文献
10.
仔猪腹泻源大肠杆菌贵州株K88菌毛研究 总被引：12，自引：0，他引：12
通过玻片凝集试验、抗Ｄ－甘露糖微量血凝试验（ＭＲＭＨ）、离体细胞粘附试验、菌体蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和免疫印迹、质粒ＤＮ民泳等。分析了仔猪腹泻源大砀杆菌贵州株（４０９－１１）所产Ｋ８８菌毛的血凝谱、对肠上皮细胞粘附特性、菌毛蛋白单位分子量,并对其Ｋ８８基因进行了初步定位。结果表明：其所产Ｋ８８菌毛的血凝谱能凝集豚鼠和允许红细胞;能介导细菌粘会于仔猪离体肠上皮细胞,这种粘附作用 相似文献
11.
本试验用差束离心和非线性蔗糖密度梯度离心法从感染雏鸡血浆中分离和提纯了禽成髓细胞性白血病病毒（ＡＭＶ）。并以ＳＤＳ法裂解病毒，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析ＡＭＶ结构蛋白成分，最后选用（ＬＫＢ）水平板式电泳系统，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ比较大量地分离提纯了Ｐｇａｇ２７。用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和琼脂扩散试验检验其抗原活性，并且用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量和纯度。结果表明，提纯的病毒蛋白具有抗原活性，且达到电泳纯。 相似文献
12.
弓形虫病免疫的研究：弓形虫排泄分泌抗原制备及其对怀孕母羊免疫效… 总被引：3，自引：0，他引：3
弓形虫ＧＪＳ株速殖子通过传代细胞（ＢＨＫ－２１）培养，制备排泄分泌抗原（Ｅ／ＳＡ），蛋白含量为２．０９５ｍｇ／ｍｌ；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳分析显示２１条区带，分子量在１８～１２０ＫＤ，其中６８ＫＤ为主带，次带７条。用Ｅ／ＳＡ与佐剂（Ｍ－２０６）制备Ｅ／ＳＡ疫苗，对３０只（２公，２８母）弓形虫血检抗体阴性，混群自然交配５０天的适龄健康绵羊随机分组进行免疫，间隔２０天再加强免疫１次。第１组于混群后８ 相似文献
13.
重组日本血吸虫中国大陆株28kuGST免疫刺激复合物对小白鼠的免疫试验 总被引：1，自引：0，他引：1
将体外重组的日本血吸虫中国大陆株２８ｋｕ谷胱甘肽－Ｓ－转移酶与免疫,刺激复合物（ＩＳＣＯＭ）结合制备了ｒＳｊ２８ＧＳＴ－ＩＳＣＯＭ。用含８５μｇ ｒＳｊ２８ ＧＳＴ的ｒＳｊ２８ＧＳＴ－ＩＳＣＯＭ及１００μｇ ｒＳｊ２８ＧＳＴ分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小白鼠,用常规ＥＬＩＳＡ检测体液免疫水平,以日本血吸虫大陆株尾蚴攻击后的减虫率表示免疫保护力。 相似文献
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大肠杆菌K99和F41菌毛抗原的不同缓冲液热处理提取方法比较的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
本试验用Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液（Ｔ）、ＰＢＳ缓冲液（Ｐ）、生理盐水（Ｓ）和２Ｍ尿素ＰＢＳ缓冲液（Ｕ）以热处理的方法提取大肠杆菌Ｋ９９和Ｆ４１菌毛抗原,并用硫酸铵盐析纯化Ｋ９９以及用１Ｎ醋酸滴定和氯化镁沉淀分别纯化Ｆ４１。根据ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳和蛋白质含量测定结果,四种缓冲液对Ｋ９９的提取量依次是Ｕ＞Ｓ＞Ｐ,而Ｔ检不出Ｋ９９;对Ｆ４１的提取量依次是Ｕ＞Ｔ＞Ｐ＞Ｓ。Ｋ９９纯化后取得了满意的纯化结果,Ｆ４１纯化后大量上样做电泳时仍有微细的污染带出现,而且氯化镁沉淀后造成Ｆ４１严重损失。Ｋ９９和Ｆ４１纯化前后的各个样品经超声波处理、０．５％脱氧胆酸钠处理和未处理的原液与自家因子血清做琼扩试验以及Ｋ９９和Ｆ４１做交叉琼扩试验,均具有良好的特异性,而且以超声波处理后的样品做琼扩试验效果最佳。 相似文献
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用亲和层析法提取大片吸虫谷胱甘肽转移酶的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为了探明大片吸虫谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ）的多肽组分和酶活力,以供今后进行ＧＳＴ的免疫原性和各种蠕虫ＧＳＴ的交叉免疫原性的研究,本试验首次用亲和层析法对大片吸虫ＧＳＴ进行提取,用ＳＤＳ—ＰＡＧＥ分析了大片吸虫ＧＳＴ的多肽组分,用１－氯－２,４－二硝基苯（ＣＤＮＢ）为底物测定了ＧＳＴ酶活力。电泳染色结果表明,大片吸虫ＧＳＴ至少有２条带,其分子量为２９．９～２４．５ＫＤ,其中主带２条,分别为２８．３、２６．２ＫＤ。酶活力测定结果表明,提取的ＧＳＴ可获得１０．４４μｍｏｌ／Ｌ／ｍｉｎ／ｍｇ以上的酶比活性。 相似文献
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不同禽鸟类传染性法氏囊病病毒分离物核酸及结构蛋白的比较 总被引：6，自引：0，他引：6
将从鸡、鸭和麻雀体内分离到的ＩＢＤＶ用ＳＰＦ鸡胚增殖，采用氯仿抽提，聚乙二醇沉淀和蔗糖密度梯度离心的方法纯化病毒，鉴定结果表明，这种方法可有效地将病毒与杂蛋白分开。用异硫氰酸胍－酚－氯仿－抽提一步法提取病毒ＲＮＡ，电泳分析表明，三种ＩＢＤＶ均由双节段ＲＮＡ组成，大、小基因片段的电泳迁移率毒株间无差异。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明，各ＩＢＤＶ的结构蛋白带谱相同，但各蛋白带的相对百分含量有差异，表明这些不 相似文献
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含绿脓杆菌外毒素A受体结合区重组蛋白的纯化 总被引：2，自引：3，他引：2
将表达含绿脓杆菌外毒素（ＰＥＡ）受体结合区基因的质粒ｐＥＴ－ＥＡＢ转化到大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中,经ＩＰＴＧ诱导表达了含ＰＥＡ受体结合区的重组蛋白（称ＰＥ３４）。ＰＥ３４主要以包涵体形式存在于大肠杆菌中,用溶菌酶－脱氧胆酸钠法结合超声波裂解法破碎细菌,离心制备包涵体。用２ｍｏｌ／Ｌ脲洗涤包涵体后,包涵体纯度可达７５％,在８ｍｏｌ／Ｌ脲存在条件下,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶滤过,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ离子交换层析纯化,获得ＳＤＳ－ＰＡＧＥ１条带的ＰＥ３４,纯度达９５．８％,得率为２４．５％。 相似文献
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ABC—Dot—ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒 总被引：4，自引：0，他引：4
建立了ＡＢＣ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的方法,其最佳反应条件是：包被液为０．０５ｍｏｌ／ＬｐＨ９．６的碳酸钠－碳酸氢钠缓冲液（ＣＢＳ）,免疫ＩＢＶ ＩｇＧ的最佳工作浓度为１：８０;抗原的最佳浓度为１：８００;封闭剂选用０．０１ｍｏｌ／Ｌ ｐＨ７．４含３０ｍＬ／Ｌ白明胶的ＰＢＳ,Ｂ－ＡｇＧ和ＡＢＣ－ＨＥＰ的最佳工作浓度为１：２００。用ＡＢＣ－ＨＥＰ的最佳工作浓度为１：２０ 相似文献