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1.
研究柞蚕微孢子虫的孢壁蛋白组成和结构特点,有助于解明柞蚕微孢子虫在侵染过程中与蚕体细胞的互作机制。分别采用煮沸法和Laemmli法分离提取柞蚕微孢子虫总蛋白和孢壁蛋白,回收30kD左右的蛋白条带进行液质联用离子阱电喷雾质谱分析,获得的短肽序列经Mascot在线检索工具进行蛋白同源序列比对,共鉴定出27种具有功能注释的蛋白,有3种注释为孢壁蛋白。其中获得了与家蚕微孢子虫孢壁蛋白8(NbSWP8)高度同源的柞蚕微孢子虫孢壁蛋白8(NaSWP8)的基因全长序列。序列分析表明NaSWP8与NbSWP8的氨基酸序列相似性达到90%,且均具有特征性的肝素结合基序,二者的编码基因核苷酸序列的非同义替换率和同义替换率比值(dN/dS)明显小于1,表明孢壁蛋白8基因在2种蚕类微孢子虫中受到纯化选择压力的作用,基因的功能相对稳定。 相似文献
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柞蚕微孢子虫3种孢壁蛋白的提取与鉴定 总被引：1，自引：1，他引：0
在微孢子虫侵染宿主的过程中,孢壁蛋白扮演着重要的角色。分别采用沸水浴法、SDS法从柞蚕微孢子虫(Nosema per-nyi,Np)孢子中提取孢壁蛋白以及利用发芽后的孢子壳提取孢壁蛋白,对提取的孢壁蛋白进行SDS-PAGE分析和质谱鉴定。结果显示,将发芽后的孢子壳以沸水浴法提取孢壁蛋白最为有效,但操作复杂,部分孢壁蛋白损失严重。初步鉴定从发芽后的孢子壳中提取的编号为P35、P32和P29的3种蛋白属于柞蚕微孢子虫孢壁蛋白,蛋白分子质量分别为35、32、29 kD,其中孢壁蛋白P32的含量最丰富,P35和P29的含量相对较低。根据相应肽指纹图谱预测孢壁蛋白P32的一级结构类似核孔蛋白,可能与孢壁的选择透过性有关,而P35与VASA2n蛋白的一级结构类似,因此有可能与柞蚕微孢子虫的繁殖有关。 相似文献
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《蚕业科学》2017,(1)
选择家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)表面蛋白质谱数据库中新发现的假定表面蛋白NBO_33g0013进行研究,了解该蛋白质的功能及是否参与微孢子虫对宿主细胞的侵染过程。预测该蛋白质分子质量为26.1 k D,等电点为4.59,其序列N端具有信号肽,无跨膜螺旋结构,含3个N-糖基化位点,无O-糖基化位点,不具有典型的功能结构域,与柑橘凤蝶微孢子虫(Papilio xuthus)的一个假定蛋白序列相似度达到93%。以家蚕微孢子虫CQ1分离株的基因组DNA为模板克隆该蛋白质的编码基因,构建重组表达载体进行该蛋白质的原核表达,并制备获得多克隆抗体,通过间接免疫荧光分析确证该蛋白质定位在家蚕微孢子虫孢子表面。经体外细胞感染实验初步分析,尚未发现该蛋白质参与了微孢子虫孢子对宿主Bm E细胞的粘附过程,推测该蛋白质可能为家蚕微孢子虫孢壁的结构组成型蛋白质,在孢壁的构架形成中发挥作用。 相似文献
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家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)孢壁蛋白提取方法的优化研究 总被引：2，自引：2，他引：0
分别用SDS法、煮沸法、碱溶法和Brosson法,提取家蚕微孢子虫孢壁蛋白,并对孢壁蛋白及处理后的孢子形态进行比较研究。结果表明,不同方法处理后的孢子形态均保持完整,SDS处理后孢子为短杆状且明显变得粗壮,煮沸处理后孢子变小呈梭形,其他方法处理的孢子均有膨胀现象。SDS-PAGE检测显示,SDS法提取的孢壁蛋白出现3条明显的主带,煮沸法提取的孢壁蛋白出现5条明显的主带,0.1 mol/L KOH提取的孢壁蛋白出现2条主带;而Brosson法提取的孢壁蛋白呈现出20~30条带,体现了家蚕微孢子虫孢壁蛋白组成的复杂性,并适合于孢壁蛋白质组学的研究。 相似文献
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家蚕微孢子虫孢壁蛋白SWP25、SWP30、SWP32的表达谱分析 总被引：1，自引：1，他引：0
研究家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)的孢壁蛋白对于揭示家蚕微孢子虫感染宿主的分子机制具有重要意义。对已完成精细定位的家蚕微孢子虫孢壁蛋白SWP25、SWP30、SWP32在家蚕中肠组织中的表达谱进行了分析。RT-PCR结果表明,SWP32在感染后24 h就可以检测到其转录本,SWP25、SWP30的转录本在感染后36 h可检测到,提示SWP32可能在孢子裂殖体阶段就需要发挥作用;3种孢壁蛋白在感染3 d后其转录本均达到较高水平,并在感染过程中持续保持,在感染后第10天仍能明显检出。3种孢壁蛋白在感染3 d后转录本量明显增加的现象与家蚕微孢子虫的生活史相符合,即:孢子母细胞在此阶段迅速增加并向成熟孢子转化,成熟孢子的孢壁在这一时期形成。3种孢壁蛋白的表达能在感染早期阶段的家蚕中肠组织中被检出,为进一步探讨3种蛋白的功能提供了线索,也为开发基于这3种蛋白的分子生物学及免疫学特异性的家蚕微粒子病早期诊断技术提供了理论依据。 相似文献
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《蚕业科学》2015,(4)
建立灵敏、特异、稳定的柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi)表面蛋白分离鉴定技术,对研究其侵染机制和早期检测技术非常重要。采用生物素Sulfo-NHS-SS-biotin能特异性标记柞蚕微孢子虫的表面蛋白;经生物素标记后的微孢子虫用0.01 mol/L NaOH和2%SDS的混合液裂解结合超声波破碎的方法能提取到更多的微孢子虫总蛋白质;用30%乙腈和70%甲酸配合沸水浴处理可有效洗脱微孢子虫表面蛋白。对得到的柞蚕微孢子虫表面蛋白检测样品进行LC-MS/MS质谱鉴定,共获得了8个假定的表面蛋白,其中分子质量为26.6 k D(Np SWP12)、25.7 k D(Np SWP26)、32.0 kD(Np SWP30)的3个假定蛋白经间接免疫荧光分析确证为定位在孢子表面的蛋白质。序列分析显示,NpSWP12、NpSWP26、NpSWP30与家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)孢壁蛋白NbSWP12、NbSWP26、NbSWP30的氨基酸序列相似度分别为100%、93%、79%,其中Np SWP26无N-糖基化位点和O-糖基化位点,但C端具有介导孢子粘附宿主细胞的肝素结合基序。分离鉴定的3个表面蛋白可以作为柞蚕微孢子虫侵染机制研究和早期检测的靶标蛋白。 相似文献
8.
家蚕微孢子虫孢子壁坚厚不易破碎,并对许多化学物质有很强的抵抗性,使用常规的核酸和蛋白抽提方法效果不够理想。研究建立玻璃珠破碎法快速制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法,采用琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE分析所得DNA的完整性和所得总蛋白的差异性,并对提取蛋白进行双向电泳试验。结果表明:使用玻璃珠破碎法对微孢子虫孢子壁的破碎率可达到90%以上,基因组DNA得率约为7.65 fg/粒,总蛋白得率约为788.3 fg/粒,均显著高于常用的发芽法和液氮冻融研磨法的得率。双向电泳结果显示玻璃珠破碎法能有效提取家蚕微孢子虫总蛋白,经考马斯亮蓝染色可检测到约350个蛋白点,蛋白信息丰富,可进一步用于质谱分析。 相似文献
9.
微孢子虫(microsporidia)长期专性细胞内寄生,其基因组表现出显著的减缩性。利用家蚕微孢子虫(Nosema bomby-cis)基因组数据库探究在其显著减缩的基因组中是否有编码序列发挥调控序列的作用,结果发现在DNA转录调控中发挥重要作用的细胞分裂周期蛋白(cell division cycle protein)的N端编码序列具有典型的真核生物启动子序列特征。设计引物扩增该基因N端590 bp包含启动子基序的序列(C启动子序列),将该启动子序列克隆到载体启动子(MET25-P)被终止序列(CYC1-T)替代的pUG35载体上,构建由该启动子序列启动下游绿色荧光蛋白(GFP)表达的克隆载体ΔpUG35-CYC1-T-C-yEGFP-CYC1-T,并将其电击转化酿酒酵母CEN.PK2菌株,经筛选及诱导培养后,在荧光显微镜下观察到酵母中有GFP表达,证实了家蚕微孢子虫细胞分裂周期蛋白的N端编码序列包含具有启动子活性的序列,表明家蚕微孢子虫基因组减缩后,部分编码序列可能扮演了调控序列的角色。研究结果也为微孢子虫启动子的活性验证提供了一个简便的途径。 相似文献
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微孢子虫侵染研究进展 总被引：4，自引：0，他引：4
微孢子虫种类繁多,侵染寄主过程十分复杂,pH值、离子种类及浓度、温度、射线等都能激活孢子发芽侵入寄主.近年来微孢子虫侵染机理研究已从激活因子推进到孢子生理生化的研究.研究表明:微孢子虫孢内糖类物质浓度的变化与孢子内压升高,诱发极丝的弹出密切相关;同时,微孢子虫孢子的表面蛋白、极膜和极管蛋白(PTP)在孢子侵染寄主过程中扮演着重要角色. 相似文献
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家蚕微孢子虫全基因组分析支持微孢子虫与真菌的亲缘关系 总被引：1，自引：1，他引：0
微孢子虫(microsporidia)是一类细胞内专性寄生的单细胞真核生物,虽然分子生物学的研究证据表明其与真菌(fun-gi)存在亲缘关系,但这些证据均是基于单个或少数几个基因构建系统进化树而得出的。利用家蚕微孢子虫全基因组数据,采用基于基因同源性的Darkhorse基因组统计方法,鉴定家蚕微孢子虫基因组中每个基因的来源谱系,并通过全基因组谱系可能性指数(lineage probability index,LPI)分析微孢子虫与其他物种的亲缘关系。结果表明家蚕微孢子虫与其他微孢子虫的LPI加权平均值为0.93,具有最近的亲缘关系,与真菌界的LPI加权平均值为0.65,与原生生物界的LPI加权平均值为0.38。由此证明微孢子虫与真菌存在着更近的亲缘关系,微孢子虫门属于真菌界而非原生生物界。 相似文献
12.
Maria Anete LALLO Lidiana Flora VIDOTO DA COSTA Anuska Marcelino ALVARES-SARAIVA Paulo Ricardo Dell’Armelina ROCHA Diva Denelle SPADACCI-MORENA Fabiana Toshie de Camargo KONNO Ivana Barbosa SUFFREDINI 《The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science》2016,78(2):171-176
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Didier ES Stovall ME Green LC Brindley PJ Sestak K Didier PJ 《Veterinary parasitology》2004,126(1-2):145-166
Microsporidia are single-celled, obligate intracellular parasites that were recently reclassified from protozoa to fungi. Microsporidia are considered a cause of emerging and opportunistic infections in humans, and species infecting humans also infect a wide range of animals, raising the concern for zoonotic transmission. Persistent or self-limiting diarrhea are the most common symptoms associated with microsporidiosis in immune-deficient or immune-competent individuals, respectively. Microsporidian spores appear to be relatively resistant under environmental conditions, and species of microsporidia infecting humans and animals have been identified in water sources, raising concern about water-borne transmission. Sensitive and specific immunomagnetic bead separation and PCR-based methods are being developed and applied for detecting microsporidia in infected hosts and water sources for generating more reliable prevalence data. The most effective drugs for treating microsporidiosis in humans currently include albendazole, which is effective against the Encephalitozoon species but not against Enterocytozoon bieneusi, and fumagillin, which has broader anti-microsporidia activity but is toxic in mammals, suggesting a need to identify better drugs. Strategies to capture and disinfect microsporidia in water are being developed and include filtration, coagulation, chlorination, gamma-irradiation, and ozonation. 相似文献
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To determine the occurrence of potentially human pathogenic microsporidia (Enterocytozoon bieneusi and Encephalitozoon spp.) in wild mice, we examined 289 East-European House Mice (Mus musculus musculus) and West-European House Mice (M. m. domesticus) trapped at 74 localities in an area across the Czech-German border. Microsporidia were detected at 33 localities, in 34% of M. m. musculus and 33% of M. m. domesticus examined specimens. Single-species infection was detected in 23 mice for E. hellem, 42 mice for E. cuniculi and 25 mice for E. bieneusi. No Encephalitozoon intestinalis positive animals were identified. Moreover, co-infections were detected in 6 animals; E. bieneusi co-existed with E. cuniculi or E. hellem in 3 mice. The natural infection of E. hellem has never been recorded in mice before. No differences were found by a statistical analysis of microsporidia occurrence between the House Mouse subspecies. Although the gender-dependent infestation of microsporidia was statistically supported in M. m. musculus, no significant differences were observed when the occurrence of microsporidia was estimated for all males and females irrespective of the House Mouse subspecies. The results of this report document the low host specificity of detected microsporidia species and imply the importance of synanthropic rodents as a potential source of human microsporidial infection. 相似文献
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微孢子虫作为一类专性细胞内寄生的真核生物,由于具有许多原核细胞的特征而被广泛研究,且作为人类新发的病原也越来越受到重视。在综述了近10年来国内外学者对微孢子虫蛋白质研究进展的基础上,评述了对微孢子虫蛋白质研究在分类和防治上的意义。 相似文献
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家蚕病原性微孢子虫的蛋白质化学性质的研究 总被引：6，自引：3，他引：3
抽提了微 孢子虫的总 蛋白和选择 性分离纯 化了主要 蛋白组 分。对 总蛋白 进行了 酸性 Ｐ Ａ Ｇ Ｅ、碱性 Ｐ Ａ Ｇ Ｅ、 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 和氨基酸组成分析，并对 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 结果进行了薄层扫描分析。发现每一样品总蛋白在 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 图谱上均分离出３０ 多条蛋白带，均有５ 条主带，但位置不同，各条蛋白带的相对含量不同。氨基酸组成分析结果中发现各种孢子总蛋白所含的氨基酸种类基本相同，均含有１６ 种氨基酸，但各种氨基酸的相对含量不同。对主要蛋白组分进行了 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 氨银染色法纯度鉴定、薄层扫描分析和氨基酸组成分析，发现彼此之间有共同点，但也存在一定的差异。 相似文献
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Dado D Izquierdo F Vera O Montoya A Mateo M Fenoy S Galván AL García S García A Aránguez E López L del Águila C Miró G 《Zoonoses and public health》2012,59(1):23-28
Several studies have demonstrated that the soil of public parks presents an important source of infection which has a significant impact on public health. Children are the main group affected by accidentally ingestion of contaminated soil. This study was performed in order to identify the presence of zoonotic parasites in dog and cat faecal and soil samples from public parks of Madrid, Spain. Six hundred twenty-five and seventy-nine soil and faecal samples (presumably from dogs and cats) respectively were collected from 67 parks. Intestinal parasites were identified in 27 parks (40.3%), which were contamined with Giardia sp. (19.4%), microsporidia (19.4%), Toxocara spp. (16.4%), Cryptosporidium sp. (6%), Entamoeba histolytica (3%) and Ancylostomidae (3%). Combinations of two or more intestinal parasites were found in 11 parks, and it was common to find Giardia and microsporidia together in samples. Intestinal parasites were detected in 18% (112/625) of soil samples. The most frequent parasite species found in the examined soil samples were Toxocara spp. (16.4%), followed by Giardia sp. (4.5%) and Strongyloides sp. larvae (3%). The zoonotic parasites found in the 79 faecal samples were Giardia sp. (17.7%), Cryptosporidium sp. (9%), E. histolytica (2.5%), Trichuris vulpis (1.3%), Toxascaris leonina (1.3%) and microsporidia spores (28%). Microsporidia characterization by amplification of DNA confirmed 10 samples as positive, eight for E. bieneusi and two for E. hellem by PCR. The role of those parasites in the environment are discussed. 相似文献