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利用PCR技术扩增了鹅细小病毒(Goose parvovirus , GPV)HG5/82株vp1基因5'端长662 bp的基因片段，将其克隆到pMD18-T Simple载体后，转化入大肠杆菌(Escherichia coli) DH5α细胞。筛选阳性质粒，并通过BamHⅠ和Hind Ⅲ将外源基因定向克隆到原核表达载体pPROEXTMHTb，所得的阳性重组质粒经序列测定，证明外源片段正确插入到pPROEXTMHTb的预期位置。将转入外源基因的工程菌经0.6 mmol/L IPTG诱导，SDS-PAGE电泳表明， 外源基因表达，融合蛋白分子量约为32 kD。通过薄层扫描分析显示，融合蛋白表达量占工程菌菌体总蛋白的22.8%。经诱导后的工程菌用6 mol/L盐酸胍裂解，再经超声处理后离心，用镍离子亲和树脂对裂解产物的上清进行纯化。纯化所得的融合蛋白免疫白兔，制备了兔抗鹅细小病毒结构蛋白的抗血清。Western blot结果表明，抗血清与表达的融合蛋白及亲本病毒的VP1和VP2都具有反应性。 相似文献
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刘光清;倪征;张玉颖;云涛;梁华丽;华炯刚;李双茂 《农业生物技术学报》2006,14(2):191-196
对中国兔病毒性出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus, RHDV)JX/97株的衣壳蛋白基因进行了克隆和测序。结果表明，该蛋白的核苷酸序列长度为1739 nt，推导的氨基酸序列为579 aa。利用分子生物学软件分析了该病毒与国内外22株RHDV的基因序列，结果显示，RHDV不同分离株之间的序列同源性几乎都在90％以上。衣壳蛋白基因的系统发生树分析结果表明，所选的RHDV参考毒株按照一定的遗传距离，可以分为4个基因群，基因群之间的距离有加大的趋势，表明RHDV受环境的影响有向不同方向演变的趋向，即RHDV在长期适应特定环境的过程中，有可能逐渐演变成各具特色的RHDV。 相似文献
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猪瘟兔化弱毒株E2蛋白A/D抗原区基因的原核表达 总被引：1，自引：2，他引：1
通过RT—PCR扩增了编码猪瘟病毒兔化弱毒囊膜糖蛋白点E2基因；另行设计引物，扩增其中一段所编码的蛋白质抗原性好且适于在大肠杆菌(Eschedchia coli)中表达的基因(E2蛋白AID抗原区)，构建了不同的重组原核表达载体(pTH-E2来源于pThioHisB载体；pET—E2来源于pET-32a( ))，并对其表达特性进行了研究。将其分别转化到相应的宿主菌中，构建成2株重组工程菌(TOPE2含有pTH—E2；BL21E2含有pET—E2)。结果表明，两种重组菌都获得了高效表达，但BL21E2表达量明显高于TOPE2。另一重要发现是，在E2蛋白上，除了690～812位肽段，所选肽段在大肠杆菌中表达后，也能和抗猪瘟病毒高免血清反应。 相似文献
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绿色荧光蛋白与黄瓜花叶病毒运动蛋白融合基因的构建及在大肠杆菌中的表达 总被引：1，自引：0，他引：1
采用重组－PCR方法，扩增获得绿色荧光蛋白（GFP）与黄瓜花叶病毒运动蛋白（CMV MP）融合基因，将其克隆到pKEN上，构建了该融合基因的原核表达载体pKENG-M。SDS－PAGE及免疫印迹分析显示，57kD的融合蛋白基因在大肠杆菌DH5α中正确表达，激光共聚焦显微镜分析表明，在488nm光激发下，菌体呈亮绿色，表明融合蛋白保持绿色荧光特性。实验结果为进一步研究CMV MP的功能及其与胞间连丝和其他细胞成分的作用关系奠定了基础。 相似文献
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猪圆环病毒2型BF株ORF2基因在大肠杆菌中的表达 总被引：6，自引：0，他引：6
采用PCR从构建的猪圆环病毒2型／(PCV2)ORF2重组质粒(pGEM-T-ORF2）中扩增出大小为593bp的ORb2基因，克隆到表达载体pET-32a，经异丙基硫代半乳糖苷诱导，成功表达了ORF2基因编码的结构蛋白。表达的重组蛋白为融合蛋白，分子量40kD，表达量20％左右。经Western blot检测，重组蛋白可被PCV2阳性血清识别。 相似文献
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水牛α-干扰素基因的克隆与表达及其抗病毒活性 总被引：7，自引：2，他引：7
从福安和富钟水牛(water buffalo，WB)基因组中克隆了其α-干扰素基因Fa-WBIFN-α,和Fz—WBIFN-α,，并分别与pQE30表达载体连接、测序后用IPTG诱导表达。结果表明，水牛IFN—α基因全长498个核苷酸，编码166个氨基酸的成熟蛋白，与已报道的牛α-干扰素(BoIFN—α)8个亚型氨基酸序列同源性为91．6％～94．2％，均为BoIFN—α的新亚型。SDS-PAGE和Western blot分析表明，表达产物分子量约为20kD，表达量占菌体总蛋白的25％，表达产物以包涵体形式存在。经包涵体提取、尿素变性和复性后，重组水牛α-干扰素(rWBIFN—α)在CEF／VSV和MDBK／VSV细胞系上的活性分别为10^5U／mg和10^6U／mg。并且，rWBIFN-α对传染性牛鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus IBRV)感染有抑制作用。 相似文献
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根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus , PRRSV)ORF5基因的核苷酸序列设计3对特异性引物，从重组质粒pMD- ORF5中扩增去除ORF5基因中包括全部信号肽在内的N端跨膜区(28 residues)和中部跨膜区(60 residues)。改造后的ORF5基因分别命名为ORF5-1和 ORF5-2。将2个基因片段定向克隆到原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-ORF5-1和pET-ORF5-2,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞，经IPTG诱导表达和SDS-PAGE电泳分析，ORF5-1和ORF5-2基因获得融合表达，表达量分别为12.2%和39%，证明删除双跨膜区能明显提高ORF5基因的表达量。经Western blot分析，融合蛋白具有一定的免疫学活性，表明摘除跨膜区对该蛋白的抗原性影响不大。 相似文献
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通过PCR方法从重组质粒pGEM-ORF2扩增得到缺失N端疏水序列的基因片段dORF2(deleting ORF2)。将dORF2克隆至原核高效表达载体pGEX-4T-2，在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21细胞中成功地表达了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组蛋白GST-dORF2，表达量为22％。Westem-blot结果表明重组蛋白可被谷胱甘肽S-转移酶(GST)抗体识别。表达的重组蛋白为进一步研究PRRSV次要结构蛋白的结构和功能奠定了基础。 相似文献
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兔病毒性出血症病毒JX/97株衣壳蛋白基因的序列测定与分析 总被引：1，自引：0，他引：1
对中国兔病毒性出血症病毒(Rabbithemorrhagicdiseasevirus,RHDV)JX/97株的衣壳蛋白基因进行了克隆和测序。结果表明,该蛋白的核苷酸序列长度为1739nt,推导的氨基酸序列为579aa。利用分子生物学软件分析了该病毒与国内外22!RHDV的基因序列,结果显示,RHDV不同分离株之间的序列同源性几乎都在90%以上。衣壳蛋白基因的系统发生树分析结果表明,所选的RHDV参考毒株按照一定的遗传距离,可以分为4个基因群,基因群之间的距离有加大的趋势,表明RHDV受环境的影响有向不同方向演变的趋向,即RHDV在长期适应特定环境的过程中,有可能逐渐演变成各具特色的RHDV。 相似文献
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A comparative-ecological approach for studying the general regularities of soil ecology on the basis of geoinformation systems
is suggested. It has been applied to analyze the distribution of Al-Fe-humus horizons. The quantitative climatic parameters
of soils with Al-Fe-humus horizons have been estimated, and the relationships between them have been established. The applicability
of this approach for assessing the general regularities of soil ecology is shown. 相似文献
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The analysis in this paper is directed at comparing the relative effectiveness of meeting the objectives outlined in the recently passed Clean Air Act Amendments of 1990 through taxation and through regulation. The analytical vehicle used in the analysis consists of a computable general equilibrium model composed of 12 producing sectors, 13 consuming sectors, 6 household categories classified by income, a foreign sector and a government. We find first that, irrespective of what type of strategy is followed, both output and consumption decline. Hence, there is an identifiable and quantifiable tradeoff between economic activity (economic growth) and the quality of the environment. Beyond this, the aggregate loss in production and economic welfare (measured by consumption expenditures and utility) is less under a policy which stresses reliance on alternative fuels than through one that requires the installation of pollution abatement devices. 相似文献
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随着多媒体技术的发展,多媒体技术对教育改革起了很大的推进作用。本文通过在学生中对多媒体课件教学效果的调查,从多媒体教学课件在教学中的作用和地位、制作的过程以及使用者的出发点等方面,对影响到多媒体教学效果的因素进行了分析并提出了自己的解决方法。 相似文献
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跟踪学科前沿，引导学科发展——《农业工程学报》的发展探索 总被引：1，自引：1，他引：1
论述了《农业工程学报》跟踪农业工程学科发展的成功经验，详细分析了未来《农业工程学报》跟踪学科各个专业的报道方向。指出随着学科的发展及时调整学术期刊的报道方向是科技学术期刊的任务和职责，是使期刊保证及时反映相关学科的发展，保持在学科发展中应有的促进作用，在众多期刊的竞争中立于不败之地的保证。在充分分析中国学术期刊面临的形势和问题、机遇与挑战的基础上，提出了学术期刊如何规避不利因素等应对策略，为中国科技学术期刊的发展提供参考。 相似文献
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《农业生物技术学报》2012,(4):435
生物钟在动物植物生理调节中都发挥着重要的作用,但是目前对于其调节机制的了解仍然十分有限。在植物中存在白昼和夜晚的振荡器,这些振荡器包含了拟南芥中已经发现的一些相关的生物钟基因。目前的模型认为白昼振荡器相关基因 相似文献
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The objects of the study are lime-pine and pine-lime park communities of different age at the Arkhangelsk Estate situated near Moscow. In this research, we study spatial variability of the soil properties depending on the type of studied soil cover parcels and with regard to areas under the crowns and near the trunks. The article shows the influence of the grass cover parcel structure on the properties of the soil. The humidity, the content of carbon and nitrogen, and basal and substrate-induced soil respiration are higher in the 120-year-old pine forest stand than in the 80-year-old one. This is explained by the fact that with the increasing age of the pine phytocenoses, we can observe an increase in diversity of species composition, complication of volumetric-spatial structure due to the overgrowth of undergrowth and understory, changes in the volume of the crown, and dying out of old trees. 相似文献
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Use of the enantiomeric composition for the assessment of the authenticity of fruit beverages 总被引：1，自引：0，他引：1
Ruiz del Castillo ML Caja MM Herraiz M 《Journal of agricultural and food chemistry》2003,51(5):1284-1288
Enantiomeric compositions of chiral terpenes in commercial fruit beverages were examined by solid phase microextraction-gas chromatography (SPME-GC). Optimization of the method was accomplished on the basis of some parameters involved in the extraction, such as heating temperature and extraction time, that provided the highest peak areas, 60 degrees C and 2 min being the optimal values. With the proposed method relative standard deviation (RSD) values from three replicates ranging from 2 to 12% were obtained. The enantiomeric distribution of some terpenes remained constant, whereas other terpenes (linalool, terpinen-4-ol, and alpha-terpineol) exhibited a considerable variation among samples. This can be indicative of the eventual addition of aromas to some fruit beverages. 相似文献
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本会章程(草案)这次有较大的修改,现向大会汇报. 一、章程修改原因遵照中国科协要求,在代表大会召开之前,需按民政部颁发的《社会团体章程示范文本》对学人章程进行修改,以规范社会团体行为.民政部将据此进行核准,产并按修订的章程进行监督管理.为此拟出章程修订稿,书?.. 相似文献