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1.
植物组织培养再生相关基因鉴定、克隆和应用研究进展 总被引：2，自引：0，他引：2
离体植物组织体细胞胚胎发生是一个复杂的无性繁殖过程，依次经历外源植物激素信号应答、已分化细胞的脱分化、静止细胞的再分裂以及特定组织、器官原基或分生组织的形成等，是多个基因在外界因素刺激下协调、有序表达和互作的结果，不但受培养基中植物激素和营养成分的影响，也与外植体的生理状态关系密切。本文综述了外源激素和内源激素在植物组织培养中的作用，以及外源激素对内源激素的调节功能；重点介绍了5类与植物体细胞胚胎发生有关的候选基因，包括体细胞胚胎发生相关类受体蛋白激酶、阿拉伯葡聚糖酶、亚硝酸还原酶、生长素结合蛋白和抗氧化酶。再生相关基因的利用不但有助于提高植物组织培养植株再生率和遗传转化率，而且有助于获得安全型转基因植物，在基因工程育种中具有潜在应用前景。不同植物和同种植物不同外植体组织培养中调控体细胞胚胎发生的主效基因可能不同，关键再生相关基因的克隆和功能鉴定是今后需要加强的方向。 相似文献
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为探讨胡桃楸激素调控相关JmDELLA基因在花芽性别分化过程中的调控机理,本研究从胡桃楸转录组测序数据库中筛选出与激素调控相关DELLA基因的差异片段,通过PCR扩增技术获得DELLA基因CDS全长序列,命名为JmDELLA (GenBank登录号:400411)。并利用生物信息学软件对JmDELLA基因进行生物信息学分析,利用RT-PCR对胡桃楸不同器官组织进行表达分析。克隆获得JmDELLA基因的CDS序列全长为1 842 bp,编码613个氨基酸,将该基因编码的氨基酸序列比对和聚类分析,结果表明该基因与核桃(Juglans regia)、薄皮山核桃(Carya illinoinensis)、杨梅(Morella rubra)亲缘关系同源性可以达到80%以上。RT-PCR表达分析表明胡桃楸激素调控相关JmDELLA基因在雌、雄花芽中表达量最高,因此推测该基因参与了胡桃楸花芽性别分化的整个过程。该结果为深入解析胡桃楸雌雄异型异熟性别分化的分子调控机理提供理论依据。 相似文献
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Aux/IAA蛋白作为转录抑制因子在植物生长发育过程中有重要的调控作用。为了研究草莓生长素诱导基因FvIAA17在草莓生长发育过程中的功能,以森林草莓为试验材料,克隆草莓FvIAA17基因,并对其序列特征进行生物信息学分析,利用Real-time PCR技术分析了FvIAA17在草莓不同组织及外源激素处理下的表达模式。结果表明,FvIAA17基因开放阅读框为594 bp,编码197个氨基酸;预测其分子质量和等电点分别为21. 85 ku和7. 56,具有Aux/IAA家族蛋白典型结构域和保守序列;该基因启动子区含有脱落酸、茉莉酸甲酯及胁迫相关的顺时作用元件。进化分析表明,FvIAA17基因与苹果生长素诱导基因Md IAA1亲缘关系最近;亚细胞定位预测分析表明,FvIAA17蛋白定位于周质内。Real-time PCR结果表明,FvIAA17基因表达量受到外源激素IAA、ABA的显著诱导,说明该基因可能参与了生长素、脱落酸调控草莓发育的信号转导过程。本研究为后继研究草莓FvIAA17的功能和作用机制提供参考依据。 相似文献
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花器官的发育不仅影响农作物的生产,通过性别决定产生单性花的机制亦是重要的基础理论问题。TASSELSEED2基因是与JA合成有关的调控玉米单性雄花产生的性别决定基因,对一些植物中TS2同源基因的表达分析表明TS2蛋白可能在进化过程中产生了功能歧化。为探究TS2蛋白在进化过程中其功能是否发生了歧化,首先通过生物信息学手段对水稻和玉米的TS2基因进行了比较分析,分子进化分析表明,TS2基因在一些植物中可能并不仅仅局限于抑制雌蕊发育的性别决定功能。因此,猜测两性花植物水稻中的TS2可能具有其他功能。利用蛋白质三维结构预测软件,发现水稻TS2基因编码典型的SDR蛋白,含有保守的GASGIG和YTASK基序,其作用底物可能与玉米TS2蛋白类似。启动子分析表明OsTS2和玉米TS2的激素应答元件存在差别。随后,利用RNA-seq数据进行了OsTS2与玉米TS2的组织器官表达分析,并利用实时荧光定量技术考察外源Me JA喷施处理对OsTS2与玉米TS2基因表达的影响。结果表明,OsTS2主要在花序中表达,经外源MeJA处理后其表达量明显升高;而玉米TS2在雄穗分化关键期的叶片中表达量最高,其表达量基本不受外源Me JA影响。OsTS2与玉米TS2表达方面的差异提示水稻TS2可能具有与玉米TS2不同的功能,为深入了解TS2在两性花植物中的功能提供了线索。 相似文献
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为筛选适用于文冠果(Xanthoceras sorbifolium Bunge)性别分化过程研究和不同器官的内参基因,本研究以文冠果性别分化关键期的顶芽和侧芽、根、茎、叶、种仁、雌能花和雄能花为材料,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)鉴定7个候选内参基因(Actin,UBQ,EF-1α,TUB,eIF-4α,18S rRNA和GAPDH)在各样品中的表达量,并评价7个基因的表达稳定性。结果表明,7个候选内参基因在不同样品中的表达量存在明显差异,各基因在雌能花中的表达均显著高于其他材料,在雄能花中的表达处于较低水平;适用于文冠果性别分化过程的最优内参基因为UBQ和eIF-4α,适用于不同器官的最优内参基因为EF-1α和GAPDH。研究结果将对今后进行文冠果性别分化过程研究和不同器官中的基因表达分析提供参考。 相似文献
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【目的】研究脱落酸(Abscisic acid, ABA)对棉花体细胞胚胎发生过程中下胚轴脱分化和再分化的影响,优化体细胞胚胎发生体系和初步解析脱落酸调控棉花体细胞胚胎发生分子机制。【方法】以棉花品种中棉所24(CCRI 24)下胚轴为外植体,设置5个ABA浓度0、0.02、0.04、0.06、0.08μmol·L^-1,分别以A0、A1、A2、A3、A4表示,添加至MSB(MS培养基+B5维生素)培养基诱导愈伤和胚性愈伤,研究ABA对棉花下胚轴初始细胞脱分化、愈伤组织诱导和胚性愈伤组织诱导的影响。【结果】ABA促进下胚轴初始细胞脱分化;显著提高愈伤组织的脱分化率和增殖率;0.02μmol·L^-1ABA显著提高胚性愈伤分化率,0.04~0.08μmol·L^-1ABA显著降低胚性愈伤分化率。ABA处理后胚性愈伤和非胚性愈伤的增殖率均显著提高且质地受到影响。0.02~0.08μmol ABA处理下,LBD和LBD在愈伤起始期上调表达。0.02μmol·L^-1ABA处理下,在愈伤增殖早期和中期BBM、LEC1和AGL15上调表达,愈伤增殖后期FUS3、LEA、ABI3基因上调表达。【结论】脱落酸调控的棉花体细胞胚胎发生与相关标记基因的时空性表达密切相关,这些基因表达水平的增加是ABA调控愈伤和胚性愈伤分化的分子基础。 相似文献
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鸡FSHβ和ESRα基因SNPs分析与早期产蛋性能关系 总被引：4，自引：0，他引：4
采用PCR-SSCP法对85羽绿壳蛋鸡进行促卵泡激素β亚基(FSHβ)和雌激素受体α亚基(ESRα)基因多态性检测并测序,分析其与早期产蛋性状的关系.基因FSHβ和ESRα都发现了多态,测序结果表明: FSHβ pro 2位点有3 处SNPs,分别是:A-464G,-450插入碱基A,A-405G.FSHβ exon 3有1处碱基突变,即A2447G;ESRα基因5＇-UTR区有4处碱基变异,分别是:A-34G,T-76C,T-79C,C-102T.ESRα基因内含子1 区发现3处SNPs,分别是:T122C,A155G,C169T.与早期(36周)产蛋关系分析表明,FSHβ基因调控区的AA基因型36周平均产蛋量显著高于AB 型(p＜0.05),没有发现BB型,外显子3的AA型和AB 型开产日龄呈显著相关(p＜0.05),也没发现BB型; ESRα基因5＇侧翼调控区的CC型和CD型36周平均产蛋量差异显著(p＜0.05),而没发现DD型,其他均不显著(p＞0.05). 相似文献
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《分子植物育种》2017,(7)
烟叶腺毛是烟草(Nicotiana tabacum)香气物质合成的主要场所,对烟叶的香气品质有重要影响。为探索拟南芥(Arabidopsis thaliana)光敏色素B激活标签的抑制蛋白1(phyB activation-tagged suppressor1,BAS1)基因对烟草叶片腺毛发育的影响,构建pSH-35S-BAS1超量表达载体遗传转化烟草,对烟草叶片腺毛发育进行研究。结果表明转基因烟草腺毛数量比野生型烟草腺毛提高了32.5%,推测BAS1基因的表达可能引起了腺毛发育相关基因表达的改变。根据研究报道烟草萜类化合物环化酶基因(nicotiana tabacum cultivar T.I.1068 cyclase gene,NtCTTC)、细胞色素P450加氧酶基因(nicotiana tabacum cytochrome P450 gene,CYP71D16)和烟草表面抗性蛋白基因(nicotiana tabacum phylloplanin,NtPhP)均在腺毛上特异性表达。通过q-PCR分析烟草腺毛发育的相关基因在转基因烟草和野生型烟草中的表达情况,得到结果,NtCTTC、CYP71D16和NtPhP基因在转基因植株中的相对表达量分别是野生型植株中的34.16、1.26和8.95倍。综上可知,BAS1基因在烟草中超量表达引起了腺毛发育相关基因表达的上调,从而增加了烟草腺毛的数量。本研究为外源基因对烟草腺毛密度以及调控烟草腺毛发育研究提供了借鉴。 相似文献
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作为关键信号分子,脱落酸(ABA)通过其核心信号通路PYLs-PP2Cs-SnRK2s广泛调控植物的生长发育和逆境响应过程,PYLs蛋白作为ABA信号传导的核心组件,在ABA信号传导中发挥着不可替代的作用。为探究PYLs (PYR/PYL/RCARs)基因在马铃薯中的进化以及表达模式,本研究从马铃薯全基因组‘DM-v 6.1’共鉴定到17个StPYLs基因,并对其分布、蛋白理化性质、系统进化、基因结构特征以及基因表达模式进行了分析。结果表明,17个StPYLs基因不均匀分布在8条染色体上,其氨基酸大小在163～231aa之间,等电点在4.5～8.6之间,相对分子量在18.71～25.29 kD之间。根据基因结构和蛋白的系统发育特征, StPYL家族成员共分为3个亚组, motif 1存在于本家族所有基因中,说明它在StPYLs的进化过程中较为保守。基因表达模式分析表明,StPYL家族成员具有明显的组织表达特异性,且除StPYL1在外源激素(BAP、ABA和IAA)和非生物胁迫(高温、盐和干旱)下均上调表达外,其余基因存在功能分化,不同胁迫下的表达模式各异。本研究结果为进一步阐明StPY... 相似文献
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亚致死浓度甲维盐胁迫对甜菜夜蛾幼虫解毒酶系活力及其相关基因表达量的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
为明晰几种重要解毒酶在甜菜夜蛾针对甲维盐抗性形成过程中的可能作用,本文研究分析了甲维盐处理后甜菜夜蛾幼虫体内主要解毒酶活力及其对应基因表达量的变化趋势。结果表明,在甲维盐(剂量为:LC5、LC20、LC50)胁迫72 h后,甜菜夜蛾体内多功能氧化酶(MFO)比活力及Se CYP450表达量均较对照极显著上升(P0.01),且二者均随着处理浓度的增大而先上升后下降。同时,谷胱甘肽S-转移酶(GST)的比活力也呈现出相同的变化趋势。而Se GSTs与Se GSTs1在胁迫后的表达趋势与GST比活力的并不一致,Se GSTs表达量随着处理浓度的上升而极显著升高(P0.01),而Se GSTs1则随着处理浓度的上升而下降。在3个亚致死浓度甲维盐处理下,酯酶(EST)比活力均被显著抑制(P0.05),同样的趋势也反映在Se Car E表达量的显著变化上(P0.05)。此外,MFO、EST的比活力变化趋势与其对应基因Se CYP450、Se Car E表达谱之间存在极显著相关性(P0.01);而GST活力只与Se GSTs表达量具有极显著相关性(P0.01),与Se GSTs1表达量之间则不存在显著相关性。因此,MFO、GST及其相关基因Se CYP450、Se GSTs、Se GSTs1有可能参与到甜菜夜蛾对甲维盐抗药性的演化过程中。 相似文献
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本试验旨在研究大豆异黄酮(SI)对育成期蛋用种公鸡睾丸发育、血浆生殖激素水平以及与睾酮(T)合成相关的酶和蛋白表达的影响。选用108只10周龄的‘京红1号’蛋用公鸡随机分成6组,每组3个重复,每个重复6只鸡。以玉米-鱼粉型饲料为基础日粮,分别添加不同剂量SI：0、5、10、15、20、25 mg/kg。试验预饲期为1周,正式试验8周。试验结束后采集血液,检测血浆生殖激素(T、LH、FSH和GnRH)浓度。采血后处死,取睾丸组织,称重后检测睾丸组织中与T合成相关的酶(P450scc、3β-HSD)和蛋白(StAR)mRNA的表达量的变化。结果表明：（1）添加量在5~15 mg/kg范围时,SI对育成期蛋用种公鸡进睾丸的生长发育有促进作用,其中添加量为5 mg/kg,睾丸重量和睾丸指数均极显著增加(P＜0.01)。添加量在25 mg/kg时,睾丸指数较对照组极显著降低(P＜0.01)。（2）SI添加量为5 mg/kg时,对生殖激素分泌的促进作用最为明显,添加量达到25 mg/kg时,各激素分泌水平下降。（3）SI添加量在5~15 mg/kg范围时,StAR mRNA表达量显著提高(P＜0.05),而P450scc和3β-HSD mRNA表达无显著差异(P＞0.05)。在本试验条件下,SI添加量为5 mg/kg时,能够促进育成期蛋用种公鸡睾丸发育、提高StAR mRNA表达量和生殖激素分泌水平。饲料中SI的安全添加范围为5~20 mg/kg。 相似文献
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研究旨在检测血红素加氧酶(HO-1)和胆绿素还原酶A(BLVRA)在卢氏鸡和固始鸡输卵管子宫部的表达量差异,探索绿壳蛋的形成机理。以24周龄产绿壳蛋卢氏鸡和产褐壳蛋固始鸡为素材,采集每只鸡输卵管子宫部,提取总RNA,经过RT-PCR反转录为cDNA,以与色素相关的血红素加氧酶-1(Heme Oxygenase,HO-1)和胆绿素还原酶A(BLVRA)为目的基因,选择GAPDH作为参照基因,通过实时荧光定量PCR,分析HO-1和BLVRA在不同品种鸡的机体内转录水平的差异。结果表明：卢氏鸡子宫部组织中HO-1的mRNA相对表达量显著高于固始鸡(P＜0.05)。固始鸡子宫部组织中BLVRA mRNA相对表达量极显著高于卢氏鸡(P＜0.01)。 相似文献
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SD大鼠热应激模型的制作及评价 总被引：1，自引：1，他引：0
为了对热应激SD大鼠模型的制作及生理生化指标进行检测。将20只SD大鼠随机分成两组,一组为对照组,二组为模型组,模型组在霉菌培养箱内以40℃高温、50%相对湿度热攻击2 h,使热应激发生,对照组正常饲养,2 h后观察大鼠行为变化、死亡个体剖检、眼底静脉丛采血、检测各种理化指标和肝脏Hsp70表达量。结果表明：与对照组相比,模型组的pH升高,差异不显著(P＞0.05),Na+、K+浓度降低,其中K+达到差异极显著(P＜0.01);血浆蛋白TP、ALB、HB浓度下降,达到差异极显著(P＜0.01);血清酶ALT、GOT、ALP、LDH、CK活性均表现为升高,达到差异显著或极显著（P＜0.05或(P＜0.01);SOD浓度降低,差异极显著(P＜0.01),MDA浓度升高,差异极显著(P＜0.01);肝脏Hsp70相对表达量升高,差异极显著(P＜0.01)。说明模型组符合热应激指征,SD大鼠热应激模型制作成功。 相似文献
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利用乙烯雌酚（DES）处理23日龄SD大鼠，分离卵巢颗粒细胞(GC)进行无血清培养。结果表明，FSH (50ng/m1) 处理GC，可迅速激活有丝分裂原蛋白激酶（p38 MAPK），FSH处理5min便可观察到磷酸化的p38 MAPK；FSH处理30min，磷酸化的p38 MAPK水平达到最高;向培养液中加入H89(蛋白激酶A抑制剂，10μM)，则显著抑制了FSH对p38 MAPK的激活作用，提示这种激活作用依赖于蛋白激酶A(PKA)。用 SB203580(p38MAPK抑制剂，20μM)抑制p38 MAPK激活，则进一步提高了FSH对孕酮和甾体生成快速调节蛋白（StAR）的诱导作用，同时降低了FSH对雌激素生成的促进作用(p<0.01)。RT-PCR结果显示：抑制p38 MAPK活性后，FSH对StAR mRNA刺激作用明显增强，但对细胞色素P450芳香化酶（P450arom）mRNA的诱导作用却减弱了(p<0.05)。激光共聚焦和蛋白印迹结果显示：在GC中，StAR蛋白主要分布在线粒体中；与对照组相比，FSH显著提高了StAR的荧光强度和蛋白水平；抑制p38MAPK活性则增强了FSH对StAR蛋白表达的诱导作用。 相似文献
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为了探讨牛磺酸对肉鸡饲粮养分利用率、免疫器官发育及屠宰性能的影响。将艾维茵商品代肉鸡450只,随机分成5组,每组设3个重复,每个重复30只。试验1组饲喂基础日粮,试验2、3、4和5组分别在基础日粮中添加0.05%、0.10%、0.15%和0.20%的牛磺酸。试验期42天。结果表明：试验3、4组粗蛋白和粗脂肪的利用率与试验1组差异显著(P<0.05);3周龄时,试验3、4组的脾脏指数与试验1组差异显著(P<0.05)。6周龄时,试验3组的法氏囊指数与试验1组差异显著(P<0.05);试验4组的胸肌率及皮脂厚与试验1组差异显著(P<0.05),试验4、5组的瘦肉率与试验1组差异显著(P<0.05)。在肉鸡饲粮中添加牛磺酸,显著提高肉鸡对营养物质的利用率。能够提高肉鸡的免疫器官指数,增强肉鸡的免疫机能。对肉鸡的屠宰性能有一定改善作用,明显提高肉鸡胸肌率、瘦肉率,显著降低皮脂厚。 相似文献
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RT-PCR法检测非酒精性脂肪肝细胞中CYP2E1基因的表达与普洱茶（熟茶）、铁观音、红茶的关系 总被引：1，自引：1，他引：0
探讨普洱茶（熟茶）、铁观音、红茶对高脂饮食诱发的大鼠非酒精性脂肪肝中P450 2E1基因表达的影响。将Wistar大鼠随机分为正常对照组、高脂模型组、药物组以及（低、中、高剂量）普洱茶（熟茶）、铁观音、红茶组[0.5、1.0、2.0 g/（kg·bw）]。试验大鼠灌胃授试茶样水浸提物35天后采血牺牲,分离血清测定抗氧化指标丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH-Px）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性;采摘肝脏并进行肝脏病理检测;用RT-PCR检测试验大鼠肝脏细胞中P450 2E1的表达量。与高脂模型组相比,（低剂量组）普洱茶（熟茶）降低MDA效果显著（P〈0.05）;普洱茶（熟茶）、红茶和铁观音组中GSH-Px酶活力、SOD酶活性显著提高;（高剂量）普洱茶（熟茶）、红茶显著降低P450 2E1表达量（P〈0.05）;通过试验大鼠病理检测发现,普洱茶（熟茶）和（高剂量组）铁观音能明显改善由高脂饮食引起的肝脏脂肪病变。普洱茶（熟茶）、铁观音、红茶对P450 2E1在非酒精性脂肪肝中的基因表达具有不同程度的积极作用,但普洱茶（熟茶）的作用最显著。 相似文献
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氰苷是由植物细胞色素P450单加氧酶(CYP)催化氨基酸生成的次生代谢产物,与植物的防御和抗逆境胁迫相关。为了获得蒜头果中与氰苷生物合成有关的CYP基因,本研究通过分析蒜头果转录组数据,从中分离并克隆得到1条细胞色素P450基因(命名为MoCYP79),并对其进行生物信息学分析及检测该基因在果实不同发育时期的具体表达情况。结果显示,MoCYP79基因的cDNA全长1632 bp,编码543个氨基酸;MoCYP79蛋白含有CYP家族的识别结构域血红素结合域(FSTGRRGC),且与巨桉(XP_010027351.1)、木薯(AAF27290.1,AAF27289.1)等植物CYP79蛋白聚在一支;MoCYP79基因在蒜头果花谢后的果实中表达量呈下降趋势,除发育3个月的果实外,该基因在其余的果实中的表达量均显著高于叶片,从大到小依次为花谢后的果实1个月>2个月>4个月3个月。本实验对研究蒜头果的对病虫害的防御、逆境胁迫的抵御及蒜头果中有效次生代谢产物的发掘具有重要的意义。 相似文献
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采用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,从甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hübner)雄蛾触角内扩增得到2个P450基因cDNA片段CYP4L15和CYP4L16。序列分析表明,两个片段均具有P450的保守区序列,并且与几种已知参与气味降解的P450具有较高的同源性。通过RT-PCR方法进行的组织表达谱分析表明,2个基因在雄蛾触角和足内高量表达,在头部和胸部低量表达;此外,CYP4L15在腹部还有少量表达。多组织分布特点暗示两个基因可能担负包括气味降解在内的多种功能。 相似文献
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银翘天甘中药制剂抗鸡体内大肠杆菌试验研究 总被引：1，自引：1，他引：0
为观察银翘天甘中药制剂抗鸡体内大肠杆菌的效果,将15日龄雏鸡用O2型大肠杆菌攻毒并开展预防和治疗实验。预防试验是用15日龄雏鸡O2型大肠杆菌攻毒同时口服银翘天甘中药制剂0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL,1次/天,连用10天,测定发病率、死亡率和保护率;治疗试验是先用O2型大肠杆菌攻毒并建立疾病模型后口服上述药物,2次/天,连用10天,以头孢噻肟钠作为阳性对照,测定治愈率、有效率和死亡率。预防试验结果表明,银翘天甘中药制剂组实验动物死亡率均极显著低于感染对照组（P<0.01）;中、高剂量组对实验动物的保护率超过85%;在18日龄时,给药组实验动物发病率均极显著低于感染对照组（P<0.01）。治疗试验结果表明：银翘天甘中药制剂实验组感染雏鸡死亡率显著低于头孢噻肟钠阳性对照组（P<0.05）;中、高剂量组治愈率显著高于阳性对照组（P<0.05或P<0.01）,高剂量组有效率显著高于阳性对照组（P<0.05）。由此表明,口服银翘天甘中药制剂能够有效预防和治疗鸡大肠杆菌病。 相似文献