动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ.分泌抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

夏兴霞  刘洁  王永山  诸玉梅  欧阳伟  何孔旺  张雪寒 《江苏农业学报》2009,25(2)

将E.coli O157:H7(EHEC-O157:H7)用甲醛灭活、超声破碎,免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞;与SP2/0骨髓瘤细胞融合后,获得7株分泌抗E.coli O157:H7单克隆抗体(mAbs)的杂交瘤细胞株,分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2aκ、IgG2aκ、IgG1κ、IgMκ、IgMλ、IgMκ和IgG2aκ.用间接ELISA检测,E7和F1细胞培养上清液的效价为1.6×103,腹水效价均为1×1011;C3、F5、B8、G9和G11细胞培养上清液的效价为1×10～2×102,腹水效价均为1×103.相加ELISA结果显示,F1、G9和G11 3株mAbs对应相同的抗原表位,而其它4株对应不同的抗原表位.用间接ELISA分析特异性,7株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应.Western blotting表明,C3、E7和F1 3株mAbs在蛋白分子量28×103处有特异性条带,而其它4株mAbs则未显示蛋白带.  相似文献   

鸡p15INK4B蛋白单克隆抗体的制备与鉴定     

艾永兴  郝军元  肖昌  邹亚学  郑梅竹  张玉静 《吉林农业大学学报》2008,30(6)

用制备并纯化的鸡p15^INK4B蛋白免疫BALB／c小鼠,制备了p15^INK4B蛋白的单克隆抗体,并进行了鉴定。结果表明：2株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株105和3F5分别属于IgG1和IgM抗体亚类;培养上清的效价分别为1：820和1：680,腹水的效价分别为1：4×10^6和1：7×10^5;2株单克隆抗体亲和力常数分别为3．13×10^9L/mol（1C6）和1．24×10^8L／mol（3F5）,相对亲和力1C6〉3F5,且具有不同的抗原识别位点;Westem-blot鉴定表明,1C6和3F5这2株单克隆抗体均能与原核表达纯化的和杆状病毒表达的p15^INK4B蛋白结合,而不与其他蛋白结合,说明本研究成功制备了鸡p15^INK4B的单克隆抗体,可作为深入研究鸡p15^INK4B蛋白的功能提供特异的抗体材料。  相似文献   

大黄鱼溶藻弧菌外膜蛋白ISCOMs的免疫效果初步研究     

许斌福  林能锋  俞伏松  林天龙 《福建农业学报》2008,23(3)

以溶藻弧菌外膜蛋白为模式抗原,制备其ISCOMs,免疫大黄鱼,进行安全和免疫力试验测定,结果显示溶藻弧菌外膜蛋白ISCOMs安全、纯净;免疫组菌体凝集效价比对照组高,但免疫组个体间有差异,而免疫组的血清ELISA抗体水平明显高于对照组;攻毒试验组（O．3×10^7个·尾^-1）存活率可达100％,对照组（0．3×10^7个·尾^-1）存活率为20％;试验表明溶藻弧菌外膜蛋白ISCOMs安全,免疫大黄鱼后可产生免疫保护力。  相似文献   

几种糖业有机物料对蔗田土壤微生物数量的影响   总被引：2，自引：1，他引：1  

蒙炎成  唐其展  刘忠  陈桂芬  王影 《西南农业学报》2009,22(2)

采用尼龙网袋法研究了几种糖业有机物料（蔗叶、蔗根、宿根蔗头、糖厂滤泥和酒精废液）对蔗田土壤微生物数量的影响,探讨不同有机物料对蔗田土壤微生物的作用效应。结果表明：8次采样蔗叶、蔗根、宿根蔗头、糖厂滤泥、酒精废液、对照（不加物料）处理的细菌数量平均值分别为5．75×10^6、8．01×10^6、11．99×10^6、59．55×10^6、14．3×10^6、1．09×10^6个／g干土,放线茵数量平均值分别为0．436×10^6、1．138×10^6、1．096×10^6、6．349×10^6、3．433×10^6、0．185×10^6个／g干土,真菌数量平均值分别为0．433×10^6、2．312×10^6、2．015×10^6、1．973×10^6、0．487×10^6、0．069×10^6个／g干土。说明糖业有机物料能增加土壤微生物数量,与蔗叶、蔗根、宿根蔗头相比,施用糖厂有机废料（滤泥或酒精废液）能使土壤细菌及放线菌数量明显增多,而对真菌的影响则以蔗根和宿根蔗头更有效。  相似文献   

WSSV单抗的制备及其在红螯螯虾病毒病检测中的应用     

郝贵杰  沈锦玉  徐洋  曹铮  潘晓艺 《厦门水产学院学报》2009,(2):120-125

将提纯的感染红螯螯虾的WSSV,免疫BALB／c小鼠,三次免疫后取其脾细胞与SP2／0融合．间接ELISA筛选,阳性克隆经3次亚克隆后,共获得7株针对WSSV的特异性单抗,分别命名为E2、C2、E3、G3、C4、D5以及F10．细胞上清ELISA效价为1：1600—1：6400．抗体亚类鉴定结果表明：E2、G3、C4属于IgG1,C2、D5、F10属于IgG3,E3属于IgG2a亚类;单抗热稳定性试验表明7株单抗均是热稳定的．选取单抗G3和F10进行病毒中和试验,结果表明：在适宜的抗原浓度下,两株单抗均有较好的中和能力．选取单抗G3作为一抗建立了间接ELISA方法,通过对人工感染红螯螯虾WSSV的测定,初步证实该单抗可用于WSSV的检测．  相似文献   

超声诊断肝硬化门静脉高压脾肾分流1例     

江云  龚兰  夏晴 《长江大学学报》2009,6(4):194-194

1病例 患者,女,40岁,因“腹胀、纳差、肝功能异常”来诊。有血吸虫病史。化验检查：直接胆红素28．3μmol／L,间接胆红素40．8μmol／L,总胆红素69．1μmol／L,总蛋白54．7g／L,白蛋白27．3g／L,A／G比例1．0,白细胞2．08×10^9／L,红细胞2．36×10^12／L,血小板28．6×10^9／L。  相似文献   

用两种ELISA方法快速检测大菱鲆细菌性出血性败血症的病原菌   总被引：1，自引：0，他引：1  

王斌  范薇  李艳  丁鉴锋  孙岑  刘永波 《大连水产学院学报》2008,23(4)

以大菱鲆Scophthalmus maxinzoa出血性败血症病原菌迟钝爱德华氏菌Edwardsiella tarda为抗原,从免疫家兔体内获得高免疫血清,建立快速检测大菱鲆出血性败血症病原迟钝爱德华氏菌的间接ELISA技术。采用棋盘滴定法确定间接ELISA抗原和抗血清的最适工作浓度分别为10^7个／mL和1：20000;最低检测菌浓度为10^4个／mL;抗血清与其他细菌标准菌株的交叉反应结果均为阴性,表明该方法具有较高的特异性。将该方法优化后检测了19尾人工感染出血性败血症并发病的大菱鲆和19尾健康的大菱鲆,阳性检测率分别为89．5％和的10．5％。同时在间接ELISA方法的基础上建立竞争ELISA检测技术,结果表明：理想的包被抗原浓度为10^7个／mL,兔抗血清的工作浓度为1：20000,酶标抗体工作浓度为1：1000,可测最适范围为2×10^5～2×10^8个／mL,最低检测菌浓度为2×10^5个／mL,得到回归方程y=-0．3811x＋2．2335,R^2=0．992。  相似文献   

地衣芽孢杆菌和荚膜红假单胞菌对异育银鲫鱼种非特异性免疫机能的影响     

赵卫红  陈立侨  刘晓利  黄金田  於叶兵  何植楠 《上海海洋大学学报》2008,(6)

本试验主要研究芽孢杆菌和光合细菌对异育银鲫鱼种血液白细胞数量、白细胞吞噬活性及血清溶菌酶活性的影响。600尾异育银鲫鱼种,随机分成9个试验组,一个对照组,每组设一平行。试验组在水中添加不同浓度（5×10^8、5×10^9、5×10^10 CFU／m^3）的芽孢杆菌和光合细菌及两种菌1：1的混合制剂,饲养49d后,测定异育银鲫血液白细胞数目、白细胞的吞噬活性、血清溶菌酶活性等各项免疫指标。试验结果表明：光合细菌、芽孢杆菌及其1：1的混合制剂均能提高异育银鲫鱼种血液中白细胞的免疫机能,其中混合制剂作用效果最佳,其次芽孢杆菌,效果最差的是光合细菌,且在5×10^8、5×10^9、5×10^10 CFU／m^3。浓度范围内,微生态制剂的作用效果随着添加量的增加而增加。  相似文献   

地衣芽孢杆菌和荚膜红假单胞菌对异育银鲫鱼种非特异性免疫机能的影响   总被引：5，自引：0，他引：5  

赵卫红  陈立侨  刘晓利  黄金田  於叶兵  何植楠 《上海水产大学学报》2008,17(6)

本试验主要研究芽孢杆菌和光合细菌对异育银鲫鱼种血液白细胞数量、白细胞吞噬活性及血清溶菌酶活性的影响。600尾异育银鲫鱼种,随机分成9个试验组,一个对照组,每组设一平行。试验组在水中添加不同浓度（5×10^8、5×10^9、5×10^10 CFU／m^3）的芽孢杆菌和光合细菌及两种菌1：1的混合制剂,饲养49d后,测定异育银鲫血液白细胞数目、白细胞的吞噬活性、血清溶菌酶活性等各项免疫指标。试验结果表明：光合细菌、芽孢杆菌及其1：1的混合制剂均能提高异育银鲫鱼种血液中白细胞的免疫机能,其中混合制剂作用效果最佳,其次芽孢杆菌,效果最差的是光合细菌,且在5×10^8、5×10^9、5×10^10 CFU／m^3。浓度范围内,微生态制剂的作用效果随着添加量的增加而增加。  相似文献   

太行菊属与菊属亚菊属远缘杂交试验初报   总被引：2，自引：0，他引：2  

胡枭  赵惠恩 《现代农业科学》2008,(6):13-14

以太行菊属的太行菊与菊属、亚菊属以及F11（矶菊×毛华菊）、F12（矶菊×毛华菊）作为远缘杂交的亲本,计20个杂交组合,共获得2063粒种子,694株幼苗,经过形态学鉴定,初步筛选出23株杂种苗,分别为太行菊×异色菊、太行菊×野菊、太行菊×甘菊、甘菊×太行菊、太行菊×亚菊、亚菊×太行菊的杂交种。  相似文献   

鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及鉴定     

姜亦飞  亓丽红  黄兵  李玉峰  于可响  宋敏训 《山东农业科学》2011,(1):100-102

用纯化的鸡传染性支气管炎病毒免疫BALB／c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞Ag8．653融合。对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,成功获得3株能稳定传代并分泌抗鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株1F4F7D9、3E9G3D4、48883F8。通过间接ELISA、血凝抑制以及琼脂糖扩散等方法检测,3株单克隆抗体的腹水间接ELISA效价达10^6以上并且具有良好的特异性。  相似文献   

抗伪狂犬病毒Ea株单克隆抗体的制备及鉴定   总被引：3，自引：0，他引：3  

汪招雄  何启盖  黄红亮  刘正飞  陈焕春 《华中农业大学学报》2005,24(3):222-225

将伪狂犬病毒Ea株纯化后免疫雌性Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/O的骨髓瘤细胞融合,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)进行筛选,获得了2株抗PRV的单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为3G7E3和4A6F5,其细胞培养上清及小鼠腹水效价(ELISA)分别为1:212、1:212及1:100×212、1:100×212。特异性试验和免疫荧光结果显示,3G7E3和4A6F5仅与PRV反应,而与PPV、PRRSV、JEV和HCV等病毒不发生交叉反应;用单抗建立的夹心ELISA试验能检出伪狂犬病毒。表明本研究所获得的2株单抗是PRV特异性的。这2株分泌抗PRV单抗的杂交瘤细胞株的获得为进一步建立准确快速的抗原检测方法奠定了基础。  相似文献   

慢病毒载体介导外源基因在不同细胞及鸡体不同组织中的表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

徐世永  丁红梅  孙岩  王蒙  蔡亚飞  刘红林 《南京农业大学学报》2008,31(3)

以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）为标记基因构建复制缺陷型慢病毒载体生产病毒,以病毒感染不同来源、不同分化特征的细胞,并进行鸡囊胚注射,观测外源基因的表达情况。试验结果表明,在所有类型细胞中均可检测到EGFP较高水平的表达,其中在HeLa、293FT细胞中的转染效率约1×10^8TU·mL^-1（TU：转染单位）,在C127细胞中为5×10^7TU·mL^-1,在鸡胚胎成纤维细胞（CEF）中约为1×10^6TU·mL^-1,病毒在鸡原生殖细胞（cPGC）中转染效率最低为1×10^2TU·mL^-1。病毒的感染可引起细胞表型的不利改变。用该病毒载体注射鸡囊胚获得了可直接活体观察绿色荧光信号的转基因鸡,转基因效率约53％;外源基因在鸡体不同组织如表皮、消化道等器官中检测到不同水平的表达,并表现出不同的分布特征。  相似文献   

产菊粉酶菌株的筛选及其产酶条件的优化     

王琳  刘兆普  赵耕毛  隆小华  刘冲 《农村．农业．农民》2007,(2):73-77

从山东滨海盐碱地种植菊芋的根际土壤中分离得到能产菊粉酶的菌株46株,经过进一步的摇瓶复筛,获得了产菊粉酶能力较高的1株菌株,经初步鉴定为青霉Penicillium sp.B01.在对其发酵条件优化后,确立了Penicillium sp.B01最适宜的产酶条件为(g·L-1):菊芋提取液(EJA)120、酵母膏(YE)25、NH4H2PO4 2.5、NaCl 5.0、FeSO4·7H2O 0.1、ZnSO4·7H2O 0.1,初始pH 7,接种2.5×106 mL-1的孢子悬浮液3.75%, 250 mL的三角瓶中装40 mL的发酵培养基,在30 ℃、170 r·min-1下发酵3 d后菊粉酶活性最高可达25.78 U·mL-1.此酶主要为外切酶.  相似文献   

新城疫病毒F_(48)E_9株重组NP蛋白单克隆抗体制备及鉴定     

刘文丽  刘怀然  刘培欣  张馨心  孔宪刚  陈维多 《东北农业大学学报》2011,42(9)

制备新城疫病毒(NDV)NP蛋白单抗,以期为NDV抗原表位研究及检测方法建立方面奠定基础。利用NDV F48E9株pET32a-NP重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,间接ELISA筛选,获得了2株稳定分泌抗NP重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1G3、4B12。经间接ELISA测定,腹水抗体效价分别为1 2.56×105、1 5.12×105。亚类鉴定结果表明这两株单抗均为IgG1。Western blot分析结果显示,1G3、4B12均能特异性识别重组NP蛋白。与NDV感染细胞经间接免疫荧光试验检测均呈黄绿色荧光。经相加ELISA测定表明两株单抗识别的抗原表位不同。  相似文献   

江西鄱阳湖达氏鲌生长特征研究     

杨建远  张小谷  孙丽群 《江西农业大学学报》2009,31(2)

对2005—2006年采集于江西鄱阳湖的79尾达氏鲐年龄与生长进行统计分析。鄱阳湖达氏鲐样本,年龄范围0^＋～6,以2～3龄为主,优势体长在180～260mm,占总个体数的59．49％,优势体重在30～250g,73．42％。体长与鳞长呈直线相关：E=89．6604＋18．9196SL,体长与体重呈幂函数关系：W=2．5×10^-6L^3.3319,属匀速生长,Von Beatalanffy生长方程为：Ll=353．6449×[1-e^-0.2218×（t＋0.6582）],Wt^＊=775．3749×[1-e^-0.2218×（t＋0.6582）]^3.3319生长拐点年龄为6．08龄,对应体长为274．03min,体重为332．54g。  相似文献   

Ghrelin对大鼠胃蛋白酶和H+-K+-ATP酶活性的体外作用     

杜改梅  刘茂军  蒋加进  罗碧平  胡志华  韩正强  陈钟鸣  戴鼎震 《金陵科技学院学报》2009,25(3):87-90

从断奶大鼠中获得新鲜的胃粘膜,分离培养胃粘膜上皮细胞,培养30 h后,试验组换为分别含有1×10^-4、1×10^-3、1×10^-2和1×10^-1μmol/L生长素（Ghrelin）的新鲜培养液,对照组换为不含Ghrelin的正常新鲜培养液。继续培养4 h,收集培养液和细胞,分别测定培养液中胃蛋白酶活性和细胞中H^＋-K^＋-ATPase活性。试验结果表明：1×10^-3μmol/L的Ghrelin可显著提高胃蛋白酶的活性（P〈0.05）,1×10^-4、1×10^-3和1×10^-2μmol/L的Ghrelin显著提高胃黏膜上皮细胞中H^＋-K^＋-ATPase的活性（P〈0.05）。表明Ghrelin体外作用于胃粘膜上皮细胞可刺激胃蛋白酶和胃酸的分泌。  相似文献   

金龟子绿僵菌对华北大黑鳃金龟幼虫的杀虫活性研究     

陈川  唐周怀  郭小侠 《勤云标准版测试》2009,29(4)

虫生真菌是害虫的重要天敌之一。从华北大黑鳃金龟幼虫Holotrichia oblita（Fald.）分离出一株真菌,并采用浸渍法初步研究了对华北大黑鳃金龟幼虫的杀虫活性。结果表明,分离出的虫生真菌为金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）菌株;随金龟子绿僵菌孢子浓度的升高,华北大黑鳃金龟幼虫的感病死亡率增加,在孢子浓度为2.1×10^4、1.9×10^5、2.2×10^6、2.0×10^7、1.8×10^8个/ml时,幼虫的累计死亡率分别为20%、65%、90%、100%和100%。用时间-剂量-死亡率模型（time-dose-mortality model,TDM）对幼虫的致病力数据进行模拟,所建模型均顺利通过Hosmer-Lemeshow拟合异质性检验,表明模型拟合良好,并由模型估计出了该菌株对华北大黑鳃金龟幼虫的致死剂量与致死时间。结果说明该菌株对防治华北大黑鳃金龟幼虫具有较强的应用潜力。  相似文献   

大菱鲆出血性败血症病原菌的分离与鉴定   总被引：2，自引：0，他引：2  

于兰萍  王斌  李艳  胡亮  赵凤梅 《大连水产学院学报》2008,23(5)

从全身呈弥漫性出血的养殖大菱鲆Scophthalmus maximus肝脏、腹水和肾脏中分离到3株菌落形态相同的优势菌,取菌株L一59231通过注射（菌液浓度分别为4×10^8、5×10^7cfu／mL,剂量0．1mL／尾）、灌喂（4×10^6cfu／mL,0．5mL/尾）和创伤浸泡（4．7×10^5cfu／mL）三种途径对大菱鲆进行人工感染试验。结果表明：以上三种途径均可造成大菱鲆的发病,灌喂感染和创伤浸泡对试验鱼的感染率为100％和57．1％,未发现死亡;注射感染的死亡率分别为100％和71．4％。药敏试验表明,庆大霉索、四环索、氯霉素、红霉素、链霉素等对L-59231菌株有较强的抑制作用。该菌呈短杆状,革兰氏染色阴性,氧化酶阳性,接触酶阴性,V—P试验阴性,硝酸盐还原反应阳性。根据《常见细菌系统鉴定手册》所描述的弧菌属的生理生化特性,综合形态观察、生理生化特征、16SrRNA基因序列等试验结果,可将L-59231菌株鉴定为创伤弧菌。  相似文献   

流动注射化学发光法测定水中的甲萘威   总被引：1，自引：0，他引：1  

王举鹏  李念兵  罗红群 《西南大学学报(自然科学版)》2008,30(7)

在酸性介质中硫酸铈与甲萘威作用,有微弱的发光现象,基于罗丹明B对该发光反应有明显的增敏效果,结合流动注射技术建立了一种测定甲萘威的简便快捷灵敏的方法。该方法的检出限为5．6×10^-9mol／L,线性范围是2．0×10^6～1．0×^10^-4～mol／L。对1．0×10^-5mol／L的甲萘威进行了11次连续平行测定,相对标准偏差为1.8％。对饮用水源中甲萘威的测定,回收率为95．4％～104．0％,其结果令人满意。  相似文献