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1.
采用RT-PCR法对海兰鸡MyoD全长cDNA序列进行扩增,克隆、测序后,构建真核表达载体pEGFP-N1-MyoD,脂质体瞬时转染鸡胚成纤维细胞,用荧光显微镜、RT-PCR和SDS-PAGE电泳法检测MyoD蛋白表达情况.结果表明,构建的真核表达载体pEGFP-N1-MyoD能成功转染鸡胚成纤维细胞;荧光显微镜观察可见绿色荧光;RT-PCR可见目的条带;SDS-PAGE 电泳证明表达的蛋白相对分子质量为33KD,该结果为研究MyoD蛋白的功能奠定了试验基础. 相似文献
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利用分子克隆技术,通过RT-PCR反映扩增、克隆、测序含有Eco RⅠ/XhoⅠ酶切位点的MyoG片段,构建真核荧光表达载体pEGFP-N1-MyoG,并通过脂质体瞬时转染鸡成纤维细胞,对表达产物进行RT-PCR和SDS-PAGE鉴定。结果表明,经脂质体介导重组体pEGFP-N1-MyoG可成功转染鸡成纤维细胞,RT-PCR和SDS-PAGE电泳证实pEGFP-N1-MyoG可在鸡成纤维细胞中表达出MyoG蛋白。该结果为进一步研究MyoG基因的生物学作用奠定了基础。 相似文献
3.
用RT-PCR扩增含有XhoI/EcoRI酶切位点的Sirt1片段,克隆、测序后,构建真核荧光表达载体pEGFP-N1-Sirt1、脂质体介导转染293细胞,最后利用SDS-PAGE检测蛋白表达情况.结果表明,经脂质体介导重组体pEGFP-N1-Sirt1可成功转染293细胞;转染48h后.荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达;SDS-PAGE证明表达的融合蛋白相对分子质量约为41kD.该结果为进一步研究Sirt1在哺乳动物细胞中的作用奠定了基础. 相似文献
4.
将猪白介素18(Porcine interleukin18,PIL-18)基因亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,构建了重组表达质粒pEGFP-PIL-18,利用脂质体法转染BHK细胞,采用荧光显微镜实时观察和RT-PCR检测技术确定目的蛋白的表达情况.结果在转染重组质粒24 h4、8 h后的BHK细胞中均观察到绿色荧光,转染的BHK细胞经G418筛选14 d后,用RT-PCR法检测目的基因,并扩增到长576 bpd的目的cDNA片段。表明在BHK细胞中成功地表达了PIL-18与EGFP的融合蛋白,这为下一步建立稳定表达PIL-18的细胞系奠定了基础. 相似文献
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【目的】构建猪瘟病毒囊膜蛋白(E2 protein)基因的真核表达载体,并将其在猪脐静脉血管内皮细胞中进行表达。【方法】采用PCR技术扩增出E2蛋白全长基因(E2qc)序列和去除跨膜基因(E2sh)序列,并将其克隆入真核表达载体pSecTag2(A)中,构建pSecTag-E2qc和pSecTag-E2sh表达载体,分别进行PCR、双酶切及测序鉴定。用脂质体法将阳性克隆瞬时转染猪脐静脉血管内皮细胞,对转染细胞进行RT-PCR检测目的基因的转录情况,同时对转染细胞及细胞上清液进行SDS-PAGE和Western-blot分析,以检测目的蛋白的表达情况。【结果】成功克隆了E2蛋白基因全长序列1119bp和去除E2蛋白跨膜基因序列999bp的目的基因。构建的表达载体经PCR、双酶切法及测序鉴定均无误。转染后细胞的RT-PCR结果显示,目的基因被成功转录。转染后细胞及细胞上清液的SDS-PAGE和Western-blot结果显示,目的基因被成功表达。【结论】成功构建了猪瘟病毒E2蛋白的真核表达载体,转染猪脐静脉血管内皮细胞后,分泌表达了猪瘟病毒E2重组蛋白。 相似文献
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从120日龄的长白猪脑垂体组织中扩增出pGH基因的cDNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pEGFP-N1真核表达载体上,构建pEGFP-N1-pGH重组质粒。通过PCR扩增、酶切电泳分析和测序的方法对重组DNA进行鉴定,并将其转染PK15细胞,通过荧光素酶活性检测特异性表达强度.结果表明,成功构建了pEGFP-N1-pGH真核表达载体,为转基因猪的研究奠定了基础。 相似文献
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【目的】利用基因重组技术将草兔卵透明带3基因(ZP3)构建到真核表达载体上,并在RK-13细胞中表达ZP3蛋白,为后期的免疫不育研究提供方便。【方法】提取草兔卵巢总RNA,采用RT-PCR方法克隆ZP3基因,将其与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGFP-N1-ZP3表达载体,并将载体转入RK-13细胞中进行ZP3表达。利用倒置荧光显微镜、RT-PCR和Western Bolt方法对重组ZP3蛋白表达情况进行观测。【结果】RT-PCR获得长为1 260bp的草兔ZP3基因;成功构建pEGFP-N1-ZP3重组质粒,将其转染RK-13细胞后表达出73ku的重组ZP3蛋白,RT-PCR验证和Western Bolt结果与ZP3基因的理论长度一致。【结论】首次构建了草兔ZP3基因真核表达载体并成功在真核细胞中表达重组ZP3蛋白。 相似文献
9.
组织蛋白酶Z基因(Cathepsin Z gene, CTSZ)是影响猪生长、肉质等性状的一个重要候选基因.本研究以长白猪的背最长肌为试验材料,采用RT-PCR的方法克隆CTSZ基因CDS序列全长,对该序列进行了生物信息学分析,并构建pEGFP-N1-CTSZ融合表达载体,通过脂质体介导瞬时转染猪成纤维细胞,30 h后进行荧光表达检测.结果本试验克隆出猪CTSZ基因CDS全序列912 bp,并成功构建pEGFP-N1-CTSZ融合表达载体,瞬时转染后在猪成纤维细胞中表现为绿色荧光蛋白表达.本试验为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础. 相似文献
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pEGFP-N1-hTERT真核表达载体的构建与表达鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
[目的]构建pEGFP-N1-hTERT真核表达载体,观察其在真核细胞中的表达。[方法]利用pC1-neo-hTERT和pEGFP-N1质粒构建重组质粒,通过双酶切鉴定、DNA测序分析验证人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)片段的准确性。将pEGFP-N1-hTERT真核表达载体转染到大鼠胎儿神经干细胞(NSCs)中,通过绿色荧光蛋白间接观察人端粒酶逆转录酶蛋白在细胞中的表达定位,通过RT-PCR、WesternBlot验证所构建的真核表达质粒pEGFP-N1-hTERT的正确性。[结果]所构建的pEGFP-N1-hTERT真核表达载体结构正确并能够在真核细胞中表达。[结论]该研究为建立大鼠永生化NSCs系奠定了基础。 相似文献