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1.
本文以鸡外周血单个核细胞总RNA为模板,据已报道的8种哺乳动物IL-1β核酸序列保守区设计合成1对引物,反转录合成cDNA链,经PCR扩增,回收扩增后DNA片段,用kleonow酶处理,与P^uc19/SmaI连接构成重组质粒,转化宿主菌大肠杆菌JM109,筛选出含有插入片段的重组质粒,用PCR及酶切分析鉴定,结果表明获得了带有鸡了IL-1β片段的cDNA克隆,再经序列分析测定,得知此片段长为27 相似文献
2.
用 P C R 技术,从马立克氏病病毒( M D V) C V I988/ C 株感染的鸡胚成纤维细胞( C E F)基因组 D N A 中扩增出含起始密码子的 M D V pp 38 基因同源物编码序列。在以 Digoxigenin ( Dig.)标记的 pp38 基因作为探针,在 Southern blot中,该探针能识别该 P C R 扩增片段。将该 P C R 扩增片段在 Bam HⅠ和 PstⅠ位点克隆进 p U C18 质粒载体,酶切分析筛选到含 pp38 基因同源物的重组质粒并进行了全序列分析,证明该重组质粒是 pp 38 基因同源物克隆。 相似文献
3.
番鸭细小病毒M91G27株VP3基因的克隆与序列测定 总被引:1,自引:0,他引:1
利用PCR技术,从纯化番鸭细小病毒M91G27毒株鹅胚尿囊液中扩增出病毒结构多肽VP3基因。将该PCR扩增片段克隆入pUC18质粒载体的HincⅡ和SacⅠ位点之间,酶切分析筛选到含1.6kb基因片段的重组质粒MP13。结果表明:该片段与国外已报道毒株核苷酸序列有98.8%的同源性,氨基酸序列有98.1%的同源性,证明该重组质粒是VP2基因的克隆。 相似文献
4.
用EcoRI,PstI内切酶将已分离和克隆的马立克氏病病毒(MDV)糖蛋白D(gD)基因从重组pMgD18质粒中切出,克隆进反转录病毒质粒载体(RCAS)的连接质粒载体pUCCla112N的相同位点。用Clal再将gD重组pUCCla112N中的gD基因切出,用ClaI将RCAS载体切开,将gD基因构建于RCAS的ClaI位点。通过原位杂交筛选重组RCAS,并结合酶切分析鉴定出gD插入方向正确的重组RCAS。用磷酸钙沉淀法将gD重组RCAS转染鸡胚成纤维细胞。收集转染后第9天的细胞上清,并用其感染原代CEF,在感染后第4天和第6天收集CEF。提取CEF基因组DNA,用Digoxigenin(dig)标记gD基因片段作为探针,通过dotblot和Southernblot检测基因转移情况。结果表明,转染的重组RCAS不仅在细胞内变成有传染性的完整病毒,而且成功地将gD基因与病毒前DNA一起整合在CEFDNA中 相似文献
5.
油菜PEP基因的克隆及PEP反义基因的构建 总被引:17,自引:0,他引:17
丙酮酸羧化酶( P E P)是控制油菜蛋白质/油脂含量比例的一个关键酶⒚本研究用 P C R 法扩增出了 P E P 基因片段,并将其 克隆到 p B S S K+ 的 Sm a Ⅰ位点⒚ D N A 序列分析表 明克隆片段 的长度为 530bp,其序列与报道序列相同⒚将该 P E P基因 片段反向插入 p I G121 质粒,构建了带 P E P 反义基因的超级双元载体并进行油菜的转化,目前已获得转基因植株⒚ 相似文献
6.
用PCR技术,从马立克氏病病毒(MDV)CV1988/C株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)基因组DNA中扩增出含起始密码子的MDVpp38基因同源物编码序列,在以Digoxigenin标记的pp38基因作为探针,在Soulthern blot中,该探针能识别该PCR扩增片段。将该PCR扩增片段在BamH I和PstI位点克隆进pU18质粒载体,酶切分析筛选到含pp38基因同源物的重组质粒并进行了全序 相似文献
7.
牛生长激素cDNA的克隆与序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
从平脑垂体中分离总RNA,经oligo(dT)一纤维素柱纯化mRNA,反转录合成cDNA,经PCR技术扩增牛生长激素(bGH)cDNA序列,长度为620hp,将PCR产物克隆于pUC19Smal位Ⅰ点转化大肠杆菌DH5α,经蓝白斑筛选,获得重组克隆,分离重组质粒,经限制性内切酶酶切分析后,进行序列分析。结果表明,一质粒中所含克隆片段为bGHcDNA全序列,与国外所发表的bGH核旮酸序列基本相同 相似文献
8.
本实验所用的马传染性贫血病毒(EIAV)L株(EIAV-L)是我国研制成功的EIAV弱毒疫苗的原始强毒株。以EIAV-L感染马外周血液白细胞中DNA为模板,利用PCR技术,分4个片段扩增EIAV-L前病毒DNA,并分别克隆到载体质粒pBluescript SK中,得到 4个重组质粒p2.8、p2.4、p3.1和 p1.2,经酶切鉴定后测序。对测序结果分析、拼接,得到 EIAV-L前病毒基因组全序列。EIAV-L前病毒基因组全长 8235bp,其中 G+C含量为 38%。通过使用计算机软件DNASIS分析,EIAV-L与马传贫驴强毒和马传贫驴白细胞疫苗毒序列同源性分别为98.4%和96.9%。同源性如此接近反映了它们之间的亲缘关系,另外 EIAV-L与驴强毒的同源性高于其与驴白细胞弱毒疫苗株的同源性,这符合驴白细胞弱毒疫苗株的衍生过程。基因组两端是长为316bp的LTR,其中U3为197bp,R为80BP,U5为39bp。前病毒基因组有 3个较大的开放阅读框架(ORF),分别编码 gag、pol和 env基因。gag基因位于 713~1912位碱基之间,全长1200bp;pol基因位于 1708~5109位碱基之间,全长 相似文献
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大麦黄矮病毒缺失复制酶基因植物表达载体的构建及转基因小麦的 … 总被引:2,自引:0,他引:2
以大麦黄矮病毒GPV株系的RNA为模板,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,扩增出1134bp的缺失复制酶基因。将扩增的片段克隆到pUC19的Smal位点上并进行了序列测定,获得正向插入的重组质粒pUC19D。以Kpnl从Xbal从pUC19D上切下此基因并插入质粒pEmu-mcs-N得到植物表达载体pPPI8。应用花粉管通道法转化普通小麦品种陇鉴127、陕160和晋麦47,通过卡那酶 相似文献