共查询到10条相似文献，搜索用时 31 毫秒
1.
以牙鲆(Paralichthys olivaceus)不同发育期胚胎为实验材料,研究了7种渗透性和5种非渗透性抗冻剂对牙鲆尾芽期和心跳期胚胎的毒性,同时对玻璃化液在不同胚胎发育期的毒性作用,以及玻璃化颗粒冷冻过程中,冷冻颗粒降温和解冻的时间进行了研究。结果表明,单一渗透性抗冻剂对牙鲆胚胎的毒性随着抗冻剂浓度的升高、平衡时间的延长而提高,其毒性由大到小依次为乙二醇(EG)、酒精(EtOH)、甘油(Gly)、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇(MeOH)、1,2-丙二醇(PG)。非渗透性抗冻剂中聚乙烯吡咯酮(PVP)对牙鲆尾芽期胚胎的毒性最强,其次是蔗糖和D果糖,葡聚糖和葡萄糖毒性最弱。在总体积分数一定的情况下,PG、MeOH与DMSO体积比为9∶6∶5的混合抗冻剂对牙鲆尾芽期胚胎毒性最低;各发育期胚胎经过玻璃化液平衡后,尾芽期以前胚胎的成活率随胚胎发育期逐渐升高,心跳期以后逐渐降低,尾芽期和心跳期成活率最高。含胚胎的玻璃化颗粒冷冻降温时间最短为15.09 s,解冻时间最短为6.22 s;而不含胚胎的玻璃化颗粒冷冻降温和解冻时间分别为(13.83±1.86)s和(7.20±0.90)s。将PG、MeOH与DMSO按体积比9∶6∶5配成总体积分数为35%的混合溶液,再添加5%的蔗糖配制成玻璃化液,采用此玻璃化颗粒冷冻方法对173粒牙鲆尾芽期至心跳期胚胎进行超低温冷冻保存,解冻后共获得4粒成活胚胎。 相似文献
2.
以牙鲆胚胎为材料,对胚胎程序化冷冻保存的主要环节进行了探讨,以优化牙鲆胚胎的程序化超低温冷冻保存法。单一抗冻剂的毒性试验表明甲醇(Methanol)、1,2-丙二醇(PG)的毒性低于其他抗冻剂的毒性。混合抗冻剂的毒性试验表明,20%~25%PM抗冻剂的毒性很低,经其平衡处理的胚胎,冷冻至-30℃,成活率可达80%以上。植冰前采用2℃/min的降温速率,从植冰后到入液氮前温度采用8℃/min的降温速率效果较好。入液氮前温度的筛选实验表明,入液氮前的温度以-45℃较好。利用20%PM和22%PMP,采取优化的降温程序冷冻保存尾芽期的牙鲆胚胎,分别获得5枚和7枚复活胚胎,并全部孵化出膜。 相似文献
3.
大菱鲆胚胎玻璃化方法研究 总被引：5，自引：1，他引：5
用大菱鲆(Scophthalmus maximus)神经期胚对6种抗冻剂的毒性进行检测,发现其毒性排列为1,2-丙二醇(PG)<甲醇(MeOH)<甘油(Gly)<二甲基甲酰胺(DMF)<乙二醇(EG)<二甲亚砜(DMSO).以DMF为主因子配制和筛选出11种玻璃化程度较好的玻璃化液,并用大菱鲆肌节期胚对其中5种玻璃化程度最好的玻璃化液进行检测,结果显示,A4(DMSO 20%+DMF 25%)、A7(DMSO 25%+DMF 20%)较适合于大菱鲆胚胎的平衡处理,利用A4和A7平衡处理神经期胚、肌节期胚、心跳期胚、出膜前期胚,结果显示大菱鲆神经胚和肌节胚对玻璃化液的适应能力较强.实验测试出不同时期胚胎在两种玻璃化液中的成活率,为大菱鲆各期胚胎在玻璃化液中的平衡处理提供了依据.利用大菱鲆肌节胚对不同的平衡步骤进行了筛选,发现五步法的平衡效果较好. 相似文献
4.
４种渗透性抗冻剂对暗色唇鱼精子冷冻保存的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
4℃冷冻保存条件下,以冷冻精子活力、寿命和细胞膜完整率为指标,检测二甲亚砜(DMSO)、甘油(Glycerol)、乙二醇(EG)和甲醇(MeOH)4种渗透性抗冻剂对暗色唇鱼(Semilabeo obscurus)鲜精以及对精子冷冻保存效果的影响.结果显示,4种渗透性抗冻剂对鲜精活力呈负作用,MeOH＜ EG＜ DMSO＜ Glycerol;抗冻剂对鲜精寿命呈负作用,MeOH＜ EG＜ DMSO和Glycerol;抗冻剂对鲜精细胞膜完整率呈负作用,MeOH＜ EG＜ DMSO＜ Glycerol.在鲜精活力为(36.17±4.06)％,寿命为(47.5±3.1)s,细胞膜完整率为(86.22 ±5.29)％时,经过短期冷冻保存,5％ MeOH和5％ EG解冻后暗色唇鱼精子活力最高,分别为(18.33±1.70)％和(17.83±2.67)％,与鲜精活力差异显著(P＜0.05);5％ MeOH和5％ EG解冻后精子寿命最长,分别为(44.3±3.6)s和(42.8±5.5)s,5％MeOH解冻后精子寿命与鲜精寿命差异不显著(P＞0.05);5％ MeOH解冻后精子细胞膜完整率最高,为(85.67±1.11)％,与鲜精细胞膜完整率无显著差异(P＞0.05).研究表明,DMSO和Glycerol并不适合作为暗色唇鱼精子冷冻的抗冻剂,MeOH和EG具有相似的保护作用,是暗色唇鱼精子冷冻保存潜在的渗透性抗冻剂. 相似文献
5.
鲈鱼胚胎程序化冷冻保存的研究 总被引：4，自引：2，他引：4
对鲈鱼(Lateolabrax japonicus)胚胎的程序降温冷冻保存进行了研究。通过稀释液的筛选实验，选择了一种培养效果好的稀释液DSl液。研究了不同发育阶段胚胎对抗冻液的毒性耐受力，表明肌肉效应期胚胎的耐受力最强。测定了心跳期胚胎在抗冻液A1、A2、B1、B2中的平衡处理时间，为进行鲈鱼胚胎冻前平衡提供了参考时间。比较了植冰和不植冰对鲈鱼胚胎冷冻保存结果的影响及不同洗脱方法洗脱胚胎的效果。结果表明，在冷冻过程中诱导植冰的胚胎成活率高于未植冰组，两步法洗脱效果优于一步法和三步法。用不同降温速率进行了鲈鱼胚胎的超低温冷冻保存实验，结果表明，采用1．5℃／min的降温速率降温，在液氮中冷冻保存30min的72粒心跳期胚胎中有3粒成活，成活率为4．2％。 相似文献
6.
牙鲆的胚胎发育 总被引：14，自引：4，他引：14
在牙鲆胚胎玻璃化冷冻中,为了准确选择胚胎的冷冻时期,掌握胚胎发育进程,同时为牙鲆苗种培育提供一定的依据,对海水工厂化养殖牙鲆的胚胎发育进行了研究。牙鲆受精卵培养在14-16℃、盐度29．9的海水中,利用Olympus显微镜对牙鲆胚胎发育过程连续观察,对各个胚胎时期的发育时间进行了记录,并对每一时期的特征用Olympus照像机进行了拍摄。实验记录了从受精卵到出膜后5d的29个具体发育时期的特征和发育时间,拍摄了30张具有代表性的胚胎和鱼苗图片,将牙鲆胚胎发育划分为卵裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、肌节期、尾芽期、心跳期、胚体转动期、出膜前期、出膜期10个连续的典型时期。在此培养条件下牙鲆胚胎历时93h完成整个胚胎发育,孵化出膜,再经96h的胚后发育卵黄囊完全吸收,之后进入变态期,向成鱼转化。 相似文献
7.
中华绒螯蟹胚胎的玻璃化冷冻保存 总被引：1，自引：1，他引：0
研究了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)4个不同发育时期胚胎对A号玻璃化液的耐受性和玻璃化冷冻保存。结果表明,不同时期的胚胎对玻璃化液的耐受能力不同,其中卵裂期胚胎对玻璃化液的耐受能力较差(20~30 min),前无节幼体期和原溞状幼体期胚胎在玻璃化液中的适应时间较长(40~60 min);随着平衡时间的延长,中华绒螯蟹各个时期的胚胎成活率逐渐下降。中华绒螯蟹前无节幼体期胚胎在A号玻璃化液中平衡40 min,0.25mol/L的蔗糖分别洗脱5、10、15、20 min后,胚胎成活率无显著性差异(P>0.05)。前无节幼体期胚胎在A号玻璃化液中平衡40 min,在–196℃冷冻40 min,快速解冻后用0.25 mol/L的蔗糖洗脱10 min,有8个胚胎成活,成活率为(9.3±2.5)%,胚胎培养至第4天死亡;原溞状幼体期胚胎在A号玻璃化液中平衡40 min,在–196℃冷冻35 min,经相同浓度的蔗糖洗脱相同的时间,有7个胚胎成活,成活率(11.3±3.6)%,培养至第6天时,1个胚胎孵化出膜,出膜胚胎成活1d后死亡。 相似文献
8.
玻璃化液作为一种比较理想的低温保护剂,对鼠胚胎和牛胚胎保存已获成功,但对适合于鱼类胚胎保存的至今未看到报道.为了研究玻璃化液对鱼类胚胎的低温保存效果,使鱼类胚胎低温冷冻保存获得成功,作者开展了利用不同的低温保护剂,采用不同浓度的组合,经超低温冷冻筛选后找出了能形成玻璃化的最低浓度,并利用这些能形成玻璃化的抗冻剂对泥鳅胚胎进行了毒性实验(1998),但还没有找出对胚胎保存效果好、毒性小、"高渗”损伤小的最佳玻璃化液.本文进一步利用这些玻璃化液对在不同条件下,对不同发育时期的泥鳅胚胎延长玻璃化对胚胎的作用时间,进行了系统的研究,现将结果总结如下. 1 材料和方法 相似文献
9.
玻璃化液对泥鳅胚胎成活率的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
玻璃化液作为一种比较理想的低温保护剂 ,对鼠胚胎和牛胚胎保存已获成功 ,但对适合于鱼类胚胎保存的至今未看到报道。为了研究玻璃化液对鱼类胚胎的低温保存效果 ,使鱼类胚胎低温冷冻保存获得成功 ,作者开展了利用不同的低温保护剂 ,采用不同浓度的组合 ,经超低温冷冻筛选后找出了能形成玻璃化的最低浓度 ,并利用这些能形成玻璃化的抗冻剂对泥鳅胚胎进行了毒性实验 (1998) ,但还没有找出对胚胎保存效果好、毒性小、“高渗”损伤小的最佳玻璃化液。本文进一步利用这些玻璃化液对在不同条件下 ,对不同发育时期的泥鳅胚胎延长玻璃化对胚胎的作… 相似文献
10.
为了解超低温冷冻对胚胎形态结构的影响,以中华绒螯蟹为研究对象,运用石蜡切片、扫描电镜和透射电镜观察细胞分裂期、原肠期和原溞状幼体期胚胎,分别用玻璃化液处理和经超低温冷冻后外部形态和内部结构的变化。结果发现:(1)显微观察表明,细胞分裂期胚胎在玻璃化液中用二步平衡法处理后吸水膨胀明显,三步平衡后胚胎形态无明显变化,超低温冷冻后,卵黄物质从细胞中溢出,细胞破损严重;原肠期胚胎在玻璃化液中用二步平衡法处理后,外部形态与鲜胚无明显差异,经过冷冻后,所有胚胎内部变成粉红色,胚体由原来的透明变成不透明状,细胞膜边缘模糊似绒毛状;(2)扫描电镜观察,玻璃化液处理后的所有原肠期胚胎表面褶皱呈沟壑状,形成一层网状结构;透射电镜观察,处理后胚胎细胞内出现白色团块,细胞边缘变得粗糙有突起,细胞内冰腔清晰可见,空泡形成,80%以上线粒体解体,细胞破裂明显;(3)组织切片观察,原肠期胚胎细胞外面的膜脱落破损,胚层内有大小不一的冰腔,细胞内出现明显的空泡。原溞状幼体期胚胎经过玻璃化液处理后,外部形态与鲜胚间无明显区别,但经过超低温冷冻后,95%以上胚胎组织呈弥散状,部分卵黄物质碎裂成颗粒状,胚胎的细胞膜脱落,胚层内出现大量冰腔和空泡,90%胚胎表面皱缩凹陷,但仍有10%的胚胎表面保持光滑完整,表明原溞状幼体期胚胎是适合进行冷冻保存的时期。 相似文献