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为提取纯化屎肠球菌（E.faecium）荚膜多糖（CPS）并测定其多糖含量,试验采用高压法破碎菌体,加入核糖核酸酶（25 μg/mL）、脱氧核糖核酸酶（0.5 mg/mL）、溶菌酶（0.25 mg/mL）及蛋白酶K （1.25 mg/mL）等去除核酸和蛋白质,得到荚膜多糖粗提物,经过30 ku和100 ku超滤离心管超滤浓缩和DEAE Sepharose Fast Flow层析柱层析后,得到纯化的屎肠球菌荚膜多糖,再利用苯酚-硫酸法测定其含量。结果表明,成功从屎肠球菌中提取纯化出荚膜多糖,其含量为75.21%,初步确定了屎肠球菌荚膜多糖的提取纯化方法,为今后相关疫苗的研制奠定了基础。 相似文献
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日粮中添加屎肠球菌对AA肉鸡生产性能、免疫器官指数和血液脂质代谢相关指标的影响 总被引：1，自引：1，他引：0
本试验旨在研究日粮中添加屎肠球菌对AA肉鸡生产性能、免疫器官指数和血液脂质代谢相关指标的影响，探讨屎肠球菌替代抗生素在肉鸡日粮中应用的可行性及其最适添加量。试验选取1日龄AA肉鸡公仔鸡600只（50 g/只），随机分成5组，每组6个重复，每个重复20只鸡。对照组（CON）饲喂基础日粮；抗生素组（ANT）饲喂基础日粮+0.1%金霉素；3个屎肠球菌试验组（LEF、MEF和HEF组）在基础日粮中分别添加50、100、200 mg/kg屎肠球菌。试验分2期，分别为1~21日龄（前期）和22~42日龄（后期）。结果显示：①各试验组肉鸡生长性能与CON组相比均无显著差异（P>0.05）；从饲养全期看，MEF组和HEF组AA肉鸡的死淘率最低。②在饲养后期，与CON组相比，MEF组胸腺指数显著提高（P<0.05），MEF组脾脏指数有提高的趋势（0.05 < P < 0.1）。③在饲养前期，与CON组和ANT组相比，LEF组和HEF组血清总胆固醇（TC）含量极显著降低（P<0.01）；与ANT组相比，LEF组和MEF组血清甘油三酯（TG）含量极显著降低（P<0.01）；与CON组相比，MEF组和HEF组血清高密度脂蛋白（HDL）含量极显著提高（P<0.01）；与ANT组相比，添加屎肠球菌试验组的低密度脂蛋白（LDL）含量极显著降低（P<0.01）。在饲养后期，与CON组和ANT组相比，LEF组肉鸡血清中TG含量极显著降低（P<0.01），LEF组和MEF组HDL含量极显著提高（P<0.01）。综上所述，在肉鸡饲养中，添加屎肠球菌可以在一定程度上降低死淘率，并有促进免疫器官发育的趋势，还具有一定的降低血脂的作用。综合考虑，建议在AA肉鸡日粮中添加100 mg/kg屎肠球菌。 相似文献
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为了解上海地区动物源粪肠球菌、屎肠球菌对常见抗菌药物的耐药及其最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)变迁情况,采用微量肉汤稀释法对近五年采集的粪肠球菌、屎肠球菌进行10种常见抗菌药物敏感性测试。结果表明,458株粪肠球菌及283株屎肠球菌对头孢西丁、头孢噻呋及氧氟沙星耐药率较高(均高于60%),对青霉素、阿莫西林/克拉维酸及万古霉素的耐药率较低(均低于11%),粪肠球菌耐药率整体高于屎肠球菌,两者对氧氟沙星、头孢噻呋、氟苯尼考、庆大霉素、利奈唑胺、恩诺沙星的耐药率存在较大差异（耐药率差异为15%~44%）。五年间,粪肠球菌对阿莫西林/克拉维酸、氧氟沙星的MIC50及MIC90均呈下降趋势;屎肠球菌对阿莫西林/克拉维酸、头孢西丁及氟苯尼考的MIC50及MIC90均呈下降趋势。研究表明,近年来上海地区动物源粪肠球菌、屎肠球菌的耐药情况有好转趋势,仍需继续加强肠球菌耐药性监测。 相似文献
4.
为研究我国猪源肠球菌的耐药情况,本研究采集18个省市猪养殖场的粪便样品836份进行了肠球菌的分离鉴定,并通过琼脂稀释法测定11种抗菌药物的最小抑菌浓度。结果显示:从836份样品中共分离出225株肠球菌,其中屎肠球菌106株,粪肠球菌56株,小肠肠球菌34株,鹑鸡肠球菌17株,铅黄肠球菌7株,坚忍肠球菌4株,Enterococcus thailandicus 1株。所有的肠球菌对被检抗菌药物耐药程度由高到低依次是四环素(98.2%)、阿米卡星(94.7%)、多西环素(89.3%)、米诺环素(88.9%)、氟苯尼考(88.4%)、红霉素(86.2%)、环丙沙星(63.1%)、氨苄西林(33.8%)、氯霉素(29.8%),未检测到万古霉素和利奈唑胺耐药菌株。除氨苄西林、万古霉素、利奈唑胺外,粪肠球菌对其余8种被检抗菌药物耐药率均高于屎肠球菌。小肠肠球菌对阿米卡星、红霉素、四环素、多西环素、米诺环素5种抗菌药物的耐药率高于屎肠球菌。肠球菌的多重耐药情况集中在6耐、7耐和8耐,占肠球菌总数的72.9%。本研究表明我国猪源肠球菌对常见抗菌药物耐药率较高,应引起更多关注。 相似文献
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试验旨在研究日粮中添加屎肠球菌对爱拔益加（Arbor Acres,AA）肉鸡血清和肝脏抗氧化功能的影响。选取1日龄AA肉鸡600只（公鸡）,随机分为5组,每组6个重复。对照组（CON组）饲喂基础日粮;抗生素组（Ant组）在基础日粮中添加0.1%金霉素;低（LEF组）、中（MEF组）、高（HEF组）剂量屎肠球菌组分别在基础日粮中添加50、100、200 mg/kg屎肠球菌。结果表明：①21日龄时,HEF组肉鸡血清中总抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性均显著高于CON组（P<0.05）,Ant组T-AOC显著高于CON组（P<0.05）;42日龄时,MEF组和HEF组血清中丙二醛（MDA）含量显著低于CON组（P<0.05）,LEF组血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性显著高于CON组和Ant组（P<0.05）。②21日龄时,MEF组和HEF组肉鸡肝脏中T-AOC、GSH-Px活性均显著高于CON组（P<0.05）,且HEF组肉鸡肝脏中T-AOC显著高于Ant组（P<0.05）;42日龄时,HEF组肉鸡肝脏中过氧化氢酶（CAT）活性显著高于CON组（P<0.05）。结果提示,屎肠球菌能显著提高21与42日龄血清和肝脏中T-AOC和GSH-Px活性,降低血清中MDA含量,增加抗氧化酶活性,改善肉鸡抗氧化应激能力,且200 mg/kg屎肠球菌添加量在提高血清和肝脏抗氧化能力上与抗生素效果相当。 相似文献
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本试验旨在利用分子生物学方法鉴定分离得到1株产γ-氨基丁酸(GABA)屎肠球菌,并定量测定所产GABA的量。从泡菜、酸奶、土壤、新鲜牛奶样品中筛选出一目标菌株F6,进行形态学特征与革兰氏染色鉴定;再扩增菌株F6的16S r DNA基因,然后测定该基因序列和构建系统发育树;同时采用高效液相色谱(HPLC)法定量测定菌株F6发酵液中的GABA含量。结果表明:菌株F6菌落大而光滑、圆形、直径1~2 mm、边缘整齐、乳白色;在分离培养基上菌落周围形成透明圈,使分离培养基呈黄色;在MRS固体培养基上菌落不透明,周围有透明圈。革兰氏染色鉴定菌株F6为阳性菌。分子生物学鉴定分析显示,菌株F6的16S r DNA基因序列与Gen Bank数据库中屎肠球菌(Enterococcus faecium)的相似性大于99%。HPLC法测定得到GABA标准曲线线性方程为Y=7 080 733.139 5 X-4 511.692 7(R2=0.999 4),通过方程得出菌株F6发酵液中的GABA含量为7.1 g/L,保留时间为7~10 min。结果提示,本试验筛选得到1株高产GABA的屎肠球菌F6。 相似文献
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17 feces samples of yak which were collected in Hongyuan county were measured with Gram staining method and 16S rRNA molecular identification in this study.8 suspected Enterococcus were separate from feces samples by bacteria purification and PCR amplification with 1 500 bp specific band. 6Enterococcus faecalis and 2Enterococcus faecium were identified through 16S rRNA sequencing.The homology analysis of the strains revealed that the homology between Enterococcus faecalis and reference strains sequence were 99.7% to 100%,that of Enterococcus faecium and reference sequence were 98.2% to 99.2%,indicating that the yak Enterococcus was highly conserved in the process of genetic evolution.The drug sensitive test results showed that the isolated strains were highly resistance to aminoglycoside antibiotics.Enterococcus faecium 11-1-2 strain was not only 5 multi-resistant,but also showed resistence to vancomycin.Enterococcus faecalis strains was most 3 multi-resistant.The antibiotics resistance results revealed that the resistance of yak Enterococcus was serious and should be taken seriously. 相似文献
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试验结合革兰氏染色及16S rRNA分子鉴定,对分离自红原县的17份牦牛粪便样中的肠球菌进行鉴定。结果显示,通过细菌分离纯化及PCR扩增,从牦牛粪便样品中分离出8株疑似肠球菌,分离菌的扩增产物经凝胶电泳后均产生1 500 bp特异性条带。16S rRNA测序结果显示,8株疑似肠球菌中,6株为粪肠球菌,2株为屎肠球菌。同源性比对分析显示,粪肠球菌与参考序列同源性为99.7%~100.0%,屎肠球菌与参考序列同源性为98.2%~99.2%,说明牦牛源肠球菌在遗传进化过程中高度保守。运用K-B纸片法进行药敏试验,结果显示,分离株对氨基糖苷类抗生素耐受性较高,2株屎肠球菌中,11-1-2菌株表现为5重耐药,且该菌株耐万古霉素,粪肠球菌主要表现为3重耐药,药敏结果提示牦牛源肠球菌耐药较严重,应引起高度重视。 相似文献
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本试验以表达猪乳铁蛋白肽的重组屎肠球菌（pNZ8112-PLFcin/Ef）饲喂断奶仔猪，研究其对仔猪生长性能的影响和抗产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）感染的效果。选取28日龄体重相近的健康断奶仔猪36头，随机分为3组（重组屎肠球菌组、空载体组和培养基组），每组3个重复，每个重复4头仔猪。重组屎肠球菌组和空载体组分别饲喂添加pNZ8112-PLFcin/Ef （6×1012 CFU/kg）和pNZ8112/Ef （6×1012 CFU/kg）的基础日粮，而培养基组饲喂含有相同体积的GM17液体培养基的基础日粮。试验期26 d。结果显示，与培养基组相比，重组屎肠球菌组断奶仔猪的平均日增重极显著提高（P<0.01）；料重比显著降低（P<0.05）；腹泻率明显降低，肠道菌群的均匀度和多样性指数均下降。为进一步探究表达猪乳铁蛋白肽的重组屎肠球菌对断奶仔猪抵抗ETEC感染的保护作用，在连续饲喂21 d后，每个重复中随机挑选1头体况相近的断奶仔猪灌服ETEC。结果发现，与培养基组相比，攻菌后重组屎肠球菌组断奶仔猪血清白细胞介素-2（IL-2）、免疫球蛋白G （IgG）含量、肠黏液中分泌型免疫球蛋白A （sIgA）水平均显著升高（P<0.05）；脾脏指数显著提高（P<0.05），但胸腺指数、肠段长度及重量则均无显著差异（P>0.05）。综上所述，表达猪乳铁蛋白肽的重组屎肠球菌能够起到促进断奶仔猪生长及抗ETEC感染的保护作用。 相似文献
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为了考察膜分离技术对中药鱼腥草芩蓝水提液除杂效果的影响,以鱼腥草芩蓝水提液为研究对象,采用微滤、超滤和纳滤相结合的方式,对鱼腥草芩蓝水提液进行膜过滤除杂及膜浓缩工艺进行研究,并与传统水提醇沉工艺进行比较。结果显示,鱼腥草芩蓝水提液膜过滤除杂初滤、超滤和膜浓缩工艺的最佳孔径分别为:200 nm、50 kd和1.5 kd;膜过滤除杂所制备鱼腥草芩蓝口服液中绿原酸、黄芩苷平均含量分别为1.11、8.53 mg/m L,醇沉除杂工艺所制备鱼腥草芩蓝口服液中绿原酸、黄芩苷平均含量分别为0.95、5.34 mg/m L,且不同批次含量测定的RSD值均3%(n=3);膜过滤除杂工艺制备的样品进行蛋白质检测时未出现浑浊,醇沉除杂工艺制备的样品有浑浊出现;不同工艺制备的鱼腥草芩蓝口服液,稳定性均良好。综上所述,膜分离技术除杂所制备鱼腥草芩蓝口服液工艺稳定可靠、简便易行,且绿色、安全,显著降低生产成本,本文对工业化生产和推广具有指导意义。 相似文献
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研究药用植物蒲公英内生真菌PG23多糖对肺癌A549细胞的抑制作用。蒲公英内生真菌PG23通过培养,乙醇沉淀获得粗多糖、苯酚-硫酸法测定多糖含量,采用MTT法测定PG23多糖对肺癌A549细胞的抑制率,并计算半抑制浓度(IC50)。结果表明,PG23发酵液中多糖得率为2.754%,多糖含量为26.82%;对A549肺癌细胞的抑制率以第1天为最高;抑制率不与多糖浓度成比例,最佳作用浓度为14.42μg/mL,抑制率为87.63%(P<0.01),IC50为1.073mg/mL(24h)。PG23发酵液多糖对肺癌A549细胞具有较强的抑制能力。 相似文献
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随机选择24头出生时间相近的健康杜×长×大外三元仔猪,分为2个组,每组3个重复;每个重复4头。分别在仔猪刚出生、3日龄及5日龄灌服10％灭菌脱脂奶（对照组）或含有屎肠球菌活菌（5×10。～6×10。CFU／mL）的10％脱脂奶重悬液（处理组）,每次2mL／头,仔猪25日龄断奶。记录哺乳期仔猪腹泻发生率。断奶当天屠宰仔猪,采集肠道内容物及黏膜样品,检测盲肠内容物主要菌群的数量、各肠段pH值和结肠内容物乳酸含量,用实时定量PCR检测空肠黏膜化学屏障相关基因的表达量。结果显示,屎肠球菌使仔猪盲肠的乳酸菌比率升高8．98％,致病性肠杆菌的数量和比例分别下降28．68％（P〈0．05）和13．01％,仔猪腹泻率也下降了43．21％,但不影响细菌总数和乳酸菌数量,也不影响肠道pH值、结肠乳酸含量以及空肠黏膜MUC2、pBD-1和PMAP-37mRNA的表达量,却显著下调LYSmRNA的表达。结果表明,口服屎肠球菌改善哺乳期仔猪肠道菌群组成,促进肠道健康,同时它对溶菌酶基因表达的抑制作用可能是维持乳猪肠道微生态稳定的重要因素之一。 相似文献
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【目的】 研究硒化大蒜多糖（sGPS）对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响,以期为硒化大蒜多糖的作用挖掘和临床应用提供依据。【方法】 依次通过分离、纯化得到大蒜多糖（GPS）,并经硝酸-亚硒酸钠硒化修饰得到sGPS3、GPS5和sGPS6。以小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,用6.25、12.5、25、50、100 μg/mL sGPS3、GPS5、sGPS6及10 μg/mL脂多糖（LPS组）处理小鼠腹腔巨噬细胞48 h,同时设置不加药物的细胞为对照组,用中性红法测定其吞噬功能,CCK-8法测定其増殖能力,筛选出活性最好的硒化大蒜多糖;然后用ELISA法检测活性最好的硒化大蒜多糖对巨噬细胞上清液中一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、白介素-12（IL-12）含量的影响;再通过小鼠碳廓清实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验测定空白对照组（生理盐水）及高（2 mg/mL）、中（1 mg/mL）、低（0.5 mg/mL）剂量活性最好的硒化大蒜多糖的吞噬指数与吞噬百分率。【结果】 除6.25 μg/mL sGPS3外,6.25、12.5、25、50和100 μg/mL sGPS3、sGPS5、sGPS6组小鼠腹腔巨噬细胞的A490 nm值均显著高于对照组（P<0.05）,其中,50和100 μg/mL sGPS6组的A490 nm值显著高于LPS组（P<0.05）,因此选用sGPS6进行后续试验;12.5、25、50和100 μg/mL sGPS6组小鼠腹腔巨噬细胞上清中NO、TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著高于对照组,25、50和100 μg/mL sGPS6组小鼠腹腔巨噬细胞上清中IFN-γ、IL-12显著高于对照组（P<0.05）,其中100 μg/mL sGPS6组小鼠腹腔巨噬细胞上清中NO、TNF-α、IL-12显著高于LPS组（P<0.05）。2和1 mg/mL sGPS6组的吞噬指数和吞噬率均显著高于空白对照组（P<0.05）。【结论】 硒化大蒜多糖能增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能和増殖能力,促进细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌。 相似文献
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为确定益生菌FGM发酵黄芪多糖的最佳提取工艺,本试验以发酵黄芪多糖含量为考察指标,采用响应面法对工艺的提取参数进行优化,并建立回归模型。结果显示,提取时间、提取温度和料液比对发酵黄芪多糖的含量影响显著,并且两两因素间存在一定的交互作用;影响发酵黄芪多糖提取含量的工艺因素按主次顺序排列为：料液比 > 提取温度 > 提取时间;乳酸菌发酵黄芪液多糖提取最佳工艺为：提取时间65 min、提取温度80℃、料液比为1：9,在此条件下,发酵黄芪多糖的含量为6.72 mg/mL。试验证明该工艺可行,可为新兽药开发提供参考。 相似文献
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Response surface method was used to optimize main process parameters for the polysaccharides extractions from Astragalus membranaceus fermented by probiotic FGM strain.A regression model equation was fitted.The results showed that extraction time, extraction temperature and solid-liquid ratio were significant factors on polysaccharide content fermented from Astragalus membranaceus and there was interactive effects between every two factors.Polysaccharide content was significantly affected by solid-liquid ratio,followed by extraction temperature and extraction time.The optimum conditions were found to be that the extraction time was 65 min, extraction temperature was 80℃,solid-liquid ratio was 1:9,and the polysaccharide content was 6.72 mg/mL at this condition.The results showed that the model was practical that could provide a base for exploitation new medicine. 相似文献
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桑枝皮多糖的提取及组成成分与体外生物活性分析 总被引：2，自引：1，他引：1
为了更好地发掘桑枝皮的药用价值,采用热水浸提法从桑枝皮中分离提取多糖,其得率达到28.5%。采用薄层层析(TLC)法和非衍生化高效液相色谱(HPLC)法分析桑枝皮多糖的组成成分,初步推定桑枝皮多糖为一种杂多糖,由鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖等单糖组成。桑枝皮多糖的体外生物活性试验显示其具有较强的对DPPH自由基的清除能力(IC50为1.7mg/mL)和对α-葡萄糖苷酶的抑制活性(IC50为0.298mg/mL)。上述结果提示桑枝皮多糖是降血糖和抗氧化的天然药物资源。 相似文献