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牛皮肤成纤维细胞的体外培养与冻存 总被引：10，自引：0，他引：10
利用牛皮肤组织块直接培养法，得到牛皮肤细胞的原代培养物，再用酶消化法和反复贴壁法处理，能够纯化成纤维细胞。成纤维细胞的冻存是通过选用6种分别含有二甲基亚砜（DMSO）、甘油（GL）及乙二醇（EG）的保护液，以相同的冻前处理方法，对牛皮肤成纤维细胞进行缓慢冷冻，冰箱预冷平衡1－2h，逐步投入液氮（－196℃）中保存，再经37℃水浴解冻，Hanks液脱保护剂，以贴壁率评价冻存效果。结果表明，20％DMSO保护液对牛皮肤成纤维细胞表现出较好且稳定的冷冻保护效果，其平均贴壁率达87．9％。 相似文献
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本文用液氮冷冻法比较了不同保护剂和不同冻存途径对伊氏锥虫云南株进行保存后，虫株在存活率、活力、感染力、致病力和药敏性方面的变化。我们发现在以二甲基亚砜为主要保存剂时，二甲基亚砜浓度低对保存效果不利，而浓度为５％时，保存７１２天后，虫体成活率仍达９６％；当以甘油为保存剂时，若其浓度低虫体成活率低，当浓度为２０％时，保存３６５天后虫体存活率有９１．４％。在不同冻存途径试验中发现，先在液氮气相中距液氮面４ｃｍ以上处放置１ｈ，再降到距液氮面４ｃｍ处放置１ｈ，然后进入液氮效果最好。用此种保存方法和冻存途径后，虫体活力强，其感染力、致病性和药敏性都没有发生明显变化。 相似文献
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对花粉贮藏保鲜技术的研究结果表明：象草花粉经干燥脱处理后，３０℃室温下保存寿命为１０ｄ，４～１０℃冰箱中为１５～２０ｄ；－１９６℃液态氮罐中，超低温冷冻贮藏３６２ｄ，活力为６９．４％，结实率６６．６７５，与新鲜花粉无明显差别。 相似文献
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生物频谱对家兔胚胎发育影响的初步研究 总被引：4，自引：1，他引：3
本文首次研究了周林生物频谱照射对家兔胚胎体外发育的影响，初步探讨了周林生物频谱在胚胎工程中应用的可能性。周林生物频谱分别照射家兔２－细胞胚胎３、５、７、１０、１５、２０、２５分钟，结果照射１０、１５、２０、２５分钟，可使７２小时（从注射ＨＣＧ后算起，即照射后４８小时）桑椹胚发育率显著增加，照射２０和２５分钟可提高７２、８４、９６和１０８小时囊胚发育率，照射１０分钟和１５分钟可提高１０８小时囊胚发育率，照射７、１０、１５、２０和２５分钟可提高９６小时扩张囊胚发育率及１０８小时孵化囊胚发育率。周林生物频谱照射家兔１６－细胞胚胎２０分钟，其６０小时（从注射ＨＣＧ后起，即照射后１２小时）致密桑椹胚发育率与对照比较差异极显著（Ｐ＜０．０１），囊胚、扩张囊胚和孵化囊胚发育率与对照比较无显著差异（Ｐ＞０．０５） 相似文献
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采用方瓶存放BHK21细胞悬液,在2℃～8℃冰箱存放不同时间后,按常规方法进行细胞复苏和传代。对比存放不同时间后细胞复苏时的驯化次数、细胞数量和细胞活力,寻求最佳存放时间和复苏代次以指导生产。同时将2℃～8℃冷藏保存方法与液氮冻存细胞方法在细胞复苏周期和达到所需扩繁细胞数方面进行比较。结果表明,方瓶冷藏保存BHK21细胞悬液最长可存放60d,经2—5代驯化后,细胞形态和活力恢复正常,细胞数量与收悬液前细胞数量无显著差异,并能稳定传20代以上。与液氮冻存细胞方法相比,该方法在快速恢复细胞产量时有较大优势,在生产周期紧张的情况下可作为辅助方法保障细胞传代的延续。 相似文献
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用变温和恒温处理２月龄去势里岔黑猪四个月，饲喂三种不同日粮。结果表明：７－１３．４℃（１）组猪的白细胞吞噬活性最高，－５－１５．０℃（６）组最低。１５℃（２）组的猪血液溶菌酶活力显著高于２５℃（４）２０℃（３）组和（１）组。饲养后期以（５０组的白细胞吞噬活力最高，（３）组最低，结果依次为（５）〉（１）〉（４）〉（２）〉（３）。 相似文献
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成年小鼠雄性生殖细胞的冷冻保存 总被引：1，自引：0，他引：1
在含10％小牛血清（NBS）的DMEM培养基中，分别各添加5％，10％，15％，20％和25％的二甲基亚砜（DMSO）,丙二醇（PG），乙二醇（EG）和甘油（G），对成年小鼠睾丸生殖细胞冷冻保存；复苏后台盼蓝染色测定细胞复苏率。结果显示，5％－25％DMSO冻存液组的细胞复苏率分别为88.5%,88.0%,65.6%及51.3%;5%-25%PG冻存液组的细胞复苏率分别为87.2%,86.4%,79.0%,73.4%及40.1%.;5%-25%EG冻存液组的细胞复苏率分别为6.6%,80.9%,60.8%,51.3%及30.0%;5%-25%G冻存液组的细胞复苏率分别为86．5％，86．3％，65．3％，36．0％及31．4％。其中各抗冻剂5％和10％组的细胞复苏率最高，与15％组相比均存在显著或极显著差异。4种抗冻剂的最高细胞复苏率之间无显著差异。DMSO，PG，EG和G分别冷冻保存成年小鼠睾丸生殖细胞对的最小损失率分别为4．8％，6．1％，6．7％，6．8％。结果表明，采用慢速冷冻时，DMSO，PG，EG及G均适宜用作成年小鼠睾丸生殖细胞的抗冷冻剂，最佳使用含量均为5％－10％。成年小鼠睾丸生殖细胞分别在含5％－10％的DMSO，PG，EG和G的DMEM（含10％NBS）冻存液中，2步慢速降温，液氮储存，37℃水浴复苏，是一种具有较高复苏率的冷冻保存方法。 相似文献
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混合防冻剂、投液氮温度及解冻温度对牛体外受精胚胎活力的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
试验一按正交设计比较了三种浓度（０．５Ｍ，０．７５Ｍ和１．０Ｍ）的甘油和丙二醇、三种投液氮温度（－２５℃，－３５℃，－４５℃）、三种解冻温度（１０℃，２０℃，３７℃）对第７、第８天囊胚存活率的影响。结果甘油浓度以１．０Ｍ和０．７５Ｍ的效果较好，胚胎成１６率分别为５４．０％和５３．１％；而丙二醇以０．５Ｍ水平的成活率最高，为６１．６％；投液氮温度以－２５℃的效果最好；（成活率为５６．１％）；解冻温度则以２０℃、３７℃优于１０℃，成活率分别为５７．６％，５８．９％及３７．１％。试验二用０．７５Ｍ甘油十０．５Ｍ雨二醇及１．０Ｍ甘油＋０．５Ｍ丙二醇作为防冻剂，将胚胎降温至－２５℃后投入液氮，在２０℃水浴中解冻。结果两组胚胎的成活率均较高，分别为７９．０％和８０．０％（Ｐ＞０．０５）。 相似文献
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家兔扩张囊胚玻璃化冷冻保存技术的研究 总被引：16，自引：0，他引：16
本试验对家兔扩张囊胚的玻璃化冷冻保存技术进行了探讨。首先在２０℃室温下，将扩张囊胚直接移入ＥＦＳ４０溶液中短时间平衡后，直接投入液氮中冷冻保存（一步法）；或胚胎在１０％～２０％ＥＧ（或ＥＦＳ２０）溶液中经预先处理后，再移入ＥＦＳ４０中冷冻保存（二步法），解冻后的胚胎发育率达到９５％～１００％。当室温提高到２５℃时，一步法和二步法冷冻的胚胎均得到了较高的发育率（８９％～９０％）。利用２０℃条件下一步法即２分钟平衡后冷冻的胚胎移植后，妊娠受体的产仔率为２９．２％（７／２４），同对照组产仔率３２．４％（１１／３４）相比无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。 相似文献
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牛卵泡卵母细胞冷冻保存后发育潜力的研究 总被引：7，自引：0，他引：7
对用３种不同方法（Ａ法：１．０ｍｏｌ／Ｌ甘油平衡，从２０℃开始以１℃／ｍｉｎ的速度降至－℃，植冰，１０ｍｉｎ后以０．３℃／ｍｉｎ降至－３０℃，再以０．１℃／ｍｉｎ降至－３３℃，投入液氮；Ｂ法：１．６ｍｏｌ／Ｌ丙二醇＋０．ｌｍｏ１／Ｌ蔗糖平衡，５℃冰箱中保存１５ｍｉｎ，从Ｏ℃开始按Ａ法中的程序降温；Ｃ法：即玻璃化法）冷冻保存的牛ＧＶ期卵母细胞的发育潜力进行了研究。解冻后，Ｃ组卵母细胞形态正常率显著高于Ａ、Ｂ两组。３种方法冷冻的卵母细胞成熟培养后，平均卵丘扩展率为６０％，其中Ｃ组最高（６９．９％）。卵丘扩展的卵母细胞中，７９．３％发生ＧＶＢＤ，但大多数没有达到ＭＩ期。３组冷冻卵母细胞的体外成熟率、体外受精率分别为１４．２％、８．３％、２０．０％和１０．０％、７．１％、１２．１％，其中Ａ组中有１枚卵裂。 相似文献
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磷酸钙介导马立克氏病病毒DNA转染鸡胚成纤维细胞 总被引：2，自引：0，他引：2
提取马立克氏病病毒（ＭＤＶ）Ｒｉｓｐｅｎｓｅ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）总ＤＮＡ，运用磷酸钙－ＤＮＡ沉淀转染ＣＥＦ，可以成功地得到ＭＤＶ的病变空斑。用每份沉淀含２０μｇ的ＭＤＶ和细胞总ＤＮＡ转染次代ＣＥＦ，其转染形成空斑的数量为４－２２１个，转染频率约为１－０＾－６＝１０＾－５；将磷酸钙－ＤＮＡ沉淀加入到ＣＥＦ中，于３７℃５％ＣＯ２培养箱中培养４ｈ后，室温下用１５％甘油休克２ｍｉｎ，由此可以提 相似文献
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以无菌手术法取健康妊娠期、泌乳期昆明小白鼠的乳腺组织，用胰蛋白酶、胶原酶1分段消化法获得小鼠乳腺细胞。生长培养液为DMEM／F12，含10％胎牛血清，添加胰岛素（5μg／mL）、EGF（5ng／mL）、氢化可的松（1μg／mL）、青霉素（200IU／mL）及链霉素（0．1mg／mL）。从乳腺组织中获得的细胞直接放入-80℃冰箱中进行冻存，冻存液为DMEM／F12，含20％胎牛血清、10％DMSO。用倒置显微镜观察细胞形态，发现乳腺组织消化后即可获得呈圆饼状的上皮细胞；培养过程中，乳腺上皮细胞的形态以鹅卵石型和多角型为主，增殖可形成乳头状结构，称之为乳球体，大量增殖后形成圆顶型结构。细胞核呈圆形或椭圆形，在传代过程中，乳腺上皮细胞可形成岛屿状的闭合型细胞群，边界清晰，细胞之间结合紧密，细胞间呈拉网结构。结果表明：获得典型上皮细胞形态的小鼠乳腺细胞原代培养物，从泌乳期小鼠获得的乳腺上皮细胞传至第1代时无法长成单层；而从妊娠期小鼠获得的乳腺上皮细胞传至第3代时才无法长成单层；冻存后复苏的乳腺细胞在培养过程中仍然具有典型的上皮细胞形态，并且增殖旺盛。 相似文献
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试验研究了北方地区黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。采用内蒙古地区健康黑白花奶牛的新鲜乳腺组织,将组织进行Ⅱ型胶原酶消化后原代培养,培养的细胞经5代纯化后将密度调整为1×106个/mL。采用6种处理方法进行冻存,各设3个重复。液氮冻存1个月后,分别将6种不同方法冻存的细胞复苏后测定细胞活性,包括冻存死亡率、贴壁细胞占活细胞的比率、凋亡率等,同时进行形态学观察。结果显示,处理1组与2、3、5组间冻存死亡率存在极显著差异（P〈0.01）,处理1、4、6组间冻存死亡率无显著差异（P〉0.05）,处理2、6组间冻存死亡率存在极显著差异（P〈0.01）;处理4组的贴壁率高于处理2、5、6组,存在极显著差异（P〈0.01）。形态学观察结果发现,处理1、4组细胞较其他组生长状态良好。因此,处理4可作为黑白花奶牛乳腺上皮细胞的最佳冻存方法。 相似文献
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马立克氏病二价疫苗（Ｚ４＋Ｆｃ－１２６）是一种需在液氮中保存的细胞结合性疫苗．试验表明，疫苗在液氮中保存一年对效价没有影响．疫苗从液氮中取出后，用３７℃温水融化对疫苗病毒的损失最小．根据疫苗在１８种稀释液中的稳定性试验结果，选出一种（５％肉汤－ＳＰＧ）作为疫苗的指定稀释液．用该稀释液稀释的疫苗在使用过程中，存放在冰浴上（０℃）能最好地维持疫苗的稳定性． 相似文献
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德国牧羊犬精液冷冻保存研究 总被引：6，自引：0，他引：6
用手握法采９条德国纯种牧羊犬（２～８岁）精液,在卵黄Ｔｒｉｓ和卵黄－葡萄糖稀释液中添加保护剂甘油和ＤＭＳＯ,液氮熏蒸制作颗粒冻精。结果表明,卵黄－Ｔｒｉｓ稀释液优于卵黄－葡萄糖稀释液。ＤＭＳＯ单独加和与甘油混合加均不利于解冻后精子活率,最佳甘油浓度为４％～６％,始冻温度－１５０℃热平衡温度－１０５℃,入氮温度－１１８℃,保持了正常的冷冻温度曲线,干解冻法解冻后活率高于湿解法（Ｐ〈０．０５）。在最优 相似文献
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本研究旨在了解投入液氮前的平衡温度及时间对兔胚冻后存活的影响。经0.5M蔗糖与1.5,2.0或2.5M乙二醇组成的冷冻液处理后的兔胚,在-30℃或-37℃平衡10或20分钟后即投入液氮保存或直接投入液氮保存。胚胎解冻在37℃的水浴进行。当平衡温度由-30℃下降到-37℃时,胚胎的冻后形态正常率及存活率均极显著下降(P<0.01)。在-30℃平衡20分钟与10分钟的冻后存活率无明显差异(P>0.05),但直接投入液氮时,冻后存活率则很低(8.3％)。由此表明:兔胚冻前在-30℃平衡10—20分钟是必要的。 相似文献
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抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立 总被引：6，自引：1，他引：5
将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ，病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单隆抗体的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭＣＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ２ａ，后２株属于ＩｇＧ１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均 相似文献
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