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副猪嗜血杆菌外膜蛋白的免疫原性 总被引：1，自引：0，他引：1
对来自江西、广东、上海三省市的82个副猪嗜血杆菌野外分离株进行SDS-PAGE分析,采用强毒力野外分离株的多克隆抗血清,通过Western blotting对副猪嗜血杆菌OMP和全细胞蛋白的免疫原性进行研究,寻找具有共同抗原决定簇的免疫原性蛋白.结果表明免疫血清对不同来源的分离株具有良好的交叉免疫反应,患病猪的分离株OMP和全细胞蛋白具有较强的免疫原性,健康猪的分离株OMP免疫原性较全细胞蛋白免疫原性弱.不同菌株的共同免疫原性蛋白为OMP中相对分子质量为37 000～40 000、28 000～30 000的蛋白. 相似文献
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副猪嗜血杆菌抗原性研究进展 总被引：2，自引：0，他引：2
副猪嗜血杆菌是猪格拉瑟氏病的病原,主要引起SPF猪和断奶前后仔猪的纤维素性多发性浆膜炎、多发性关节炎和脑膜炎等。其抗原主要有荚膜、脂多糖和外膜蛋白等,不是所有的菌株都存在荚膜抗原,外膜蛋白抗原是刺激机体产生体液免疫的主要抗原,菌株抗原性的高低与毒力的强弱呈正相关,副猪嗜血杆菌的毒力因子至今仍不清楚,推测其荚膜、外膜蛋白、菌体细胞膜表面的自动传输三聚体蛋白等与副猪嗜血杆菌的毒力有关。至今已经定型的副猪嗜血杆菌有15个血清型,还有约30%为未定型的菌株,其中血清5型副猪嗜血杆菌为强毒力代表菌株,常作为研究副猪嗜血杆菌抗原性的代表菌株。副猪嗜血杆菌抗原性的深入研究必将为新型、高效疫苗的研究奠定坚实的基础。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2016,(8)
为筛选副猪嗜血杆菌血清13型分离株ZJ1018具有免疫原性的外膜蛋白,本研究从该分离菌提取外膜蛋白进行双向电泳分离,并进行免疫印迹分析。共对21个蛋白点进行质谱分析,通过NCBI数据库搜索,共对应14种蛋白,包括7种外膜蛋白。其中OmpA、palA、D15为与血清5型菌株共有的免疫原性蛋白,D15蛋白在不同血清型菌株中氨基酸序列同源性不低于99.4%;蛋氨酸ABC转运体底物结合蛋白、GS60、外膜脂蛋白A属于在副猪嗜血杆菌中被筛选出的新的免疫原性外膜蛋白。本研究为副猪嗜血杆菌亚单位疫苗的开发提供了新的依据。 相似文献
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根据GenBank中登录的副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5(outer membrane protein P5,OMP5)基因序列设计1对特异性引物,以江西分离株NC0807基因组DNA为模板,扩增出OMP5基因。将其克隆到pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-OMP5,质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),通过SDS-PAGE和Western blotting分析重组蛋白的表达情况和反应原性。重组蛋白经镍柱亲和层析纯化后免疫豚鼠,测定其免疫原性和保护效率。结果表明,重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达。表达的蛋白分子质量约为43 ku,能被副猪嗜血杆菌阳性血清识别。动物试验结果表明,重组蛋白免疫后能诱导产生高水平的OMP5特异性抗体,并可显著保护豚鼠抵抗副猪嗜血杆菌强毒菌株的攻击,提示OMP5是副猪嗜血杆菌的保护性抗原。 相似文献
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为了明确河南地区血清6型副猪嗜血杆菌流行菌株的生物学特性,试验从发病猪的肺脏、心血、关节液等病料中分离、纯化副猪嗜血杆菌,并对分离纯化的副猪嗜血杆菌进行PCR鉴定,同时进行血清型分型、致病性试验、毒力基因检测和药敏试验。结果表明：从肺脏中分离得到一株血清6型副猪嗜血杆菌,该菌株携带有vta1、vta2、vta3、wza、ompP2、nanH、cdtA、cdtC、espP2 9种主要毒力基因;对保育仔猪表现出轻微的致病性;对头孢噻呋、头孢他啶、阿莫西林等16种抗生素敏感,对氨苄西林、青霉素G、卡那霉素等8种抗生素耐药。说明分离得到的血清6型副猪嗜血杆菌毒力较弱,对大多数药物敏感。 相似文献
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《广东畜牧兽医科技》2021,46(3)
本研究应用血清抗性试验,检测了从仔猪不同部位分离的66株副猪嗜血杆菌的毒力,对比菌株对仔猪、兔、豚鼠的血清敏感性差异。试验结果显示:66株菌株中,35株是高抗血清的强毒力菌株,7株是中等抗血清的中等毒力菌株,24株是对血清敏感的无毒力菌株。说明不同分离部位的副猪嗜血杆菌对血清分别呈现血清敏感性和血清抗性,在致病力方面也存在显著差异。菌株对兔、豚鼠和猪血清敏感性相同,特异性抗体对副猪嗜血杆菌并没有更高的杀伤力。吖啶黄凝集试验显示,菌株对血清的敏感性水平和它的表面结构没有直接的联系。 相似文献
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《中国兽医学报》2020,(2)
为探索副猪嗜血杆菌菌株分类与其临床致病力之间的关系,研究对2009—2017年分离的148个菌株进行comC基因测序以及遗传进化分析,同时探讨部分潜在毒力基因、血清型以及临床致病力等与基于comC基因的菌株遗传进化的相关性。基于comC基因的进化树分析显示,副猪嗜血杆菌形成2个相对独立的分支,在分支Ⅰ中又形成2个亚群Ⅰ-A和Ⅰ-B。4个潜在毒力基因在comC进化树各分支中的分布模式具有明显差异,Ⅰ-A分支中hsdS、hsdR及ompP2基因检出频率较高,而fhuA基因检出频率较低;Ⅰ-B分支中fhuA及ompP2检出频率较高,而hsdS、hsdR检出频率较低;分支Ⅱ中只有ompP2检出频率较高,fhuA、hsdS和hsdR的检出频率都较低。血清型分布在各分支中也有明显差别,血清4,5,12,13,14型主要分布于分支Ⅰ中;而血清1,2,7型主要分布于分支Ⅱ中。系统感染分离菌株在3个分支中分布较均匀,但93.8%的心包液分离菌株位于分支Ⅰ中,且主要位于Ⅰ-A分支。因此,comC进化树各分支中潜在毒力基因和血清型的分布有明显差异,表明基于comC基因的遗传进化分析对副猪嗜血杆菌临床分离株具有良好的区分效果,但系统感染分离株与基于comC基因的遗传进化没有明显的相关性。本研究为探索副猪嗜血杆菌的分类方法及其与致病力的关系提供新的信息。 相似文献
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为探究副猪嗜血杆菌thyA基因的遗传特性,针对于分离的副猪嗜血杆菌辽宁分离株的thyA基因进行测序,并运用软件对基因序列及氨基酸序列的同源性等进行分析研究。结果显示,thyA基因在副猪嗜血杆菌辽宁株亲缘性较高,其中基因序列与已公布的参考菌株同源性为95.7%~100%,氨基酸序列同源性为97.2%~100%,预测thyA基因编码蛋白的三级结构,发现thyA毒力基因在副猪嗜血杆菌中保守存在,为揭示thyA基因在副猪嗜血杆菌中功能奠定了一定基础。 相似文献
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Relationship between serotype, virulence and SDS-PAGE protein patterns of Haemophilus parasuis 总被引：2，自引：0，他引：2
H Rosner P Kielstein W Müller B Rohrmann 《DTW. Deutsche tier?rztliche Wochenschrift》1991,98(9):327-330
141 Haemophilus (H.) parasuis and 8 H. parasuis-like strains from different farms were serotyped according to Morozumi and Nicolet (1986 b) as well as to Bakos et al. (1952). It was possible to classify 72.8% of the investigated strains. 7 out of 12 serotypes have been described for the first time. The high specificity in the agar gel precipitation test was not reproducible in the more sensitive dot-blot procedure. The dot-blot results point to a participation of non-immunogenic polysaccharides in the detection reaction. The serotypes SV 1, SV 5, SV Jena 6 and SV Jena 10 proved to be highly virulent in SPF pigs, SV 2 and SV 4 were of medium virulence. The other serotypes were found to be nonvirulent. Unencapsulated strains and isolates of serotype SV 5 prevailed in animals with Glasser's disease. 23 H. parasuis and 3 H. parasuis-like strains were examined in sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). On the basis of protein profiles of whole-cell lysates, 23 of them could be assigned to 5 groups. Apart from the highly virulent strains of serovar 1, which belonged to PAGE type III, all other highly virulent strains of the serovars SV 5, SV Jena 6 and SV Jena 10 were grouped into PAGE type I. No correlation could be found between PAGE type on the one hand and virulence or origin of isolates on the other hand. 相似文献
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副猪嗜血杆菌主要毒力因子和致病机理的研究进展 总被引：4，自引：0，他引：4
副猪嗜血杆菌病又称革拉斯氏病(Glasser’s disease),引起猪的多发性浆膜炎、关节炎和脑膜脑炎,是近年来严重危害养猪业的细菌性传染病,呈世界性分布,并已证实在中国绝大多数猪场存在和流行。副猪嗜血杆菌的血清型众多,不同血清型的副猪嗜血杆菌毒力差异很大,对其毒力因子了解很少,对其主要的致病机理更是知之甚少,现已发现该病原可能的毒力相关因子有荚膜、菌毛、脂多糖、外膜蛋白及酶类等。笔者对这些毒力因子及该病的致病机理进行综述,以期为该病的防控提供科学依据。 相似文献
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Dijkman R Wellenberg GJ van der Heijden HM Peerboom R Olvera A Rothkamp A Peperkamp K van Esch EJ 《Research in veterinary science》2012,93(2):589-595
In this study, 117 isolates of Haemophilus parasuis from organs and tissues from pigs showing clinical signs, were characterised and compared with 10 H. parasuis reference strains. The isolates were subjected to the 16S rRNA gene PCR and subsequently serotyped, genotyped by 60-kDa heat shock protein (Hsp60) gene sequences, the enterobacterial repetitive intergenic consensus (ERIC) PCR and a multiplex PCR for the detection of the vtaA virulence associated trimeric autotransporter genes. Serotyping revealed the presence of 13 H. parasuis serovars. Serovars 3 and 10 were not detected, and 16 of the 117 H. parasuis isolates could not be typed by specific antisera. All isolates were positive in the 16S rRNA gene specific H. parasuis PCR. ERIC-PCR revealed a very heterogeneous pattern with 61 clusters; based on a 90% agreement. In total, 46 different Hsp60 sequence types were detected. Using 98% sequence similarity, as threshold for separation, 22 separate Hsp60 sequence clusters were distinguished. There was no correlation between H. parasuis serovars and ERIC-PCR clusters or Hsp60 sequence types, but both the ERIC-PCR and the Hsp60 sequence typing are suited as markers for H. parasuis molecular-epidemiology studies. In total, 102 H. parasuis swine isolates corresponded to the virulence associated group 1 vtaA type. The group 1 vtaA was detected in 12 different serovars. Only four of the 46 Hsp60 sequence types were not associated with the group 1 vtaA. This study shows that Dutch H. parasuis isolates from pigs with clinical signs have both a high serovar and genotypic lineage diversity. A majority of the known serovars contain the group 1 vtaA. 相似文献
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副猪嗜血杆菌广东分离株外膜蛋白P5基因的克隆及蛋白结构预测 总被引：3，自引：1，他引：2
根据GenBank上发表的副猪嗜血杆菌(HPS)外膜蛋白基因的核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,从广东省HPS分离株外膜蛋白P5基因中扩增出与预期设计的1116bp大小相符的片段,将扩增产物连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析。结果表明,克隆出HPS广东分离株的目的基因,核苷酸长为1116bp,共编码371个氨基酸,与已发表的HPS(SH0165)外膜蛋白基因核苷酸序列同源性100%,氨基酸同源性100%。生物学预测分析结果显示,HPS外膜蛋白是一种混合型结构蛋白,含有α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲,其β-转角和无规则卷曲区域可能形成抗原表位;其N端含有1个信号肽,最佳切割位点在21～22个氨基酸;有15个抗原决定簇;无跨膜区;同源建模分析,未见相似三维结构。 相似文献
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V J Rapp-Gabrielson D A Gabrielson G J Schamber 《American journal of veterinary research》1992,53(6):987-994
Reference strains for Haemophilus parasuis serovars 1 to 7 were examined for virulence by inoculation of guinea pigs. Guinea pig response to intraperitoneal inoculation was similar for the 7 reference strains. However, apparent differences in virulence were detected after intratracheal inoculation. Cells of the references strains for serovars 1 and 5 were most invasive, causing moribundity or death at higher doses and a persistent septicemia at lower doses. Haemophilus parasuis could be isolated from respiratory and systemic sites; purulent bronchopneumonia, pericarditis, and pleuritis were apparent in infected guinea pigs. Inoculation of cells of the reference strains for serovars 2 and 6 also resulted in bronchopneumonia and moribundity or death in some guinea pigs; however, reisolation of H parasuis and microscopic lesions at necropsy were less pronounced than those observed with serovars 1 and 5. Inoculation of cells of serovars 3, 4 and 7 induced only transient clinical signs and minimal evidence of H parasuis infection at necropsy. The data from intratracheal inoculation of guinea pigs are similar to data from other investigations in swine, indicating differences in the pathogenic potential of H parasuis strains. Thus, guinea pigs may be useful as a laboratory animal model for examining cellular factors associated with virulence and immunogenicity of H parasuis. 相似文献
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为了研究副猪嗜血杆菌（HPS）外膜蛋白P5的抗原表位,应用噬菌体展示随机12肽库,以抗HPS外膜蛋白P5的单克隆抗体作为固相分子,进行了3轮筛选。对随机挑选出的10个分离间隔良好的噬菌斑进行ELISA和West—ernblot等检验,最终确定了4个各结果均为阳性的优势短肽。将4个短肽序列与GenBank中HPS外膜蛋白p5的序列进行比对分析,发现这些序列没有同源性或同源性较低,但竞争ELISA结果显示这些短肽与单抗的结合都能够被外膜蛋白P5有效的抑制。以上结果显示,通过噬菌体展示技术成功获得了4个HPS外膜蛋白P5的模拟表位,为后期开展以抗原表位为基础的诊断、表位疫苗等研究提供了依据。 相似文献
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副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验 总被引：6，自引：3，他引：3
对广东15个送检的疑似猪传染性副猪嗜血杆菌病的病猪样品,用TSA培养基进行细菌的分离,并对分离菌株进行细菌的形态观察、培养特性和生化试验鉴定,以及用副猪嗜血杆菌16S rRNA基因的特异性引物进行PCR鉴定。试验结果表明,有7株分离菌株扩增出了821 bp的特异性目的条带,结合形态观察、培养特性和生化试验鉴定,结果表明成功分离到了7株副猪嗜血杆菌;药敏试验结果显示,分离菌株对氨苄西林、多粘菌素、庆大霉素等药物较敏感。 相似文献