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为建立一种更加准确、敏感的猪附红细胞体检测方法,本试验根据猪附红细胞体特异的DNA序列(AJ504999)设计2对巢式PCR引物,建立了巢式PCR检测方法。筛选该检测方法的最佳反应条件,并进行了特异性、敏感性及临床样本检测试验。结果表明,建立的巢式PCR对猪附红细胞体基因组DNA能扩增出特异性片段,而对弓形虫、链球菌、牛瑟氏泰勒虫、牛附红细胞体基因组DNA扩增反应结果均为阴性;DNA最低检测量为0.124 fg/μL;通过对55份临床样本的检测,该巢式PCR较常规PCR的阳性检出率高23.7%。本试验为猪附红细胞体病的诊断提供了一种更为特异、敏感的检测技术。 相似文献
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猪附红细胞体病是由立克次氏体--附红细胞体引起的一种人畜共患传染病.自1928年Schilling等人从啮齿类动物中检查出附红细胞体以来,人们在多种动物体内都发现了该病原,但发现附红细胞体只能引起猪、绵羊、牛、鼠、猫出现临床状.猪附红细胞体病的研究报道最早见于1932年,当时Kinsly将本病称作微粒孢子虫样病或原虫样病.Spilitter博士等在1950年首次以附红细胞体病为名对本病进行了阐述,随后,在美国、日本很多国家的猪场均发现有本病.1997年以来,作者在我国内蒙通辽、河北赤城、北京顺义、山西原平等地规模化猪场和养猪专业户的猪群中也陆续发现本病. 相似文献
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猪附红细胞体病是由附红细胞体引起的一种猪的传染病,多种动物和人都可感染发病.本文介绍了猪附红体病的病原、流行病学、临床症状、病理变化、诊断及综合防控措施,以期为猪生产过程中预防猪附红细胞体病提供参考. 相似文献
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附红细胞体病(Eperythrozoonosis)是由专性血液寄生生物———附红细胞体(Eperythrozoon)寄生于红细胞引起的以贫血、黄疸、发热等临床症状为特征的人畜共患传染性疾病。由于该病一般情况下多呈隐性感染而较少出现明显临床症状,极易被人们忽视。1932年,Doyle首次在印度报道了附红细胞体病。1950年,Splitter首次发现猪附红细胞体(EperythrozoonSuis)。在我国,许耀成等(1982)首次在江苏南部红皮病猪血液中检查到猪附红细胞体(E.Suis)。2005年,徐洪忠等首次报道了贵州省猪附红细胞体病。目前已有30多个国家和地区报道了猪附红细胞体病,我国… 相似文献
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几种药物对自然感染附红细胞体病猪的疗效比较试验 总被引：1，自引：0，他引：1
为了探寻有效防治猪附红细胞体病的药物,试验选择几种常用于治疗附红细胞体病的药物做对比试验,以期找到有效治疗猪附红细胞体病的药物。1材料和方法1.1材料1.1.1试验动物及分组有明显症状的长—大杂交猪(体重60~75 kg)耳静脉采血(加3.8%柠檬酸钠抗凝),经实验室检查,确诊是否患 相似文献
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犬附红细胞体PCR检测方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
目的 步建立犬附红细胞体PCR检测方法。方法 据已发表的附红细胞体基因序列，设计了一对特异性引物，以犬附红细胞体基因组DNA和附红细胞体可疑病犬样品DNA为模板，聚合酶链式反应（PCR）扩增，扩增产物经克隆测序分析。结果 CR扩增产物大小为541bp，序列分析表明与GenBank数据中发表的序列一致，表明这套引物成功扩增出目的基因序列，但正常犬血样品DNA和弓形虫、伊氏锥虫、吉氏巴贝斯虫、犬细小病毒、犬瘟热的DNA样品都不能扩增出目的基因片段。结论 研究建立的PCR方法可以用于犬附红细胞体的检测，为犬附红细胞体病的诊断及分子流行病学的调查提供了新的手段。 相似文献
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利用半套式PCR扩增16S rRNA基因检测牛和猪附红细胞体 总被引：3，自引：0，他引：3
根据GenBank收录的猪和牛附红细胞体16SrRNA基因序列设计1对通用引物，在其上游引物内侧叉设计1条分别针对猪和牛附红细胞体的特异性引物。以这4条引物对出现附红细胞体痛典型症状及疑似症状的猪和牛的血样DNA进行半套式-PCR扩增。结果显示，该反应阳性率为58．3％，低于临床解剖和镜检结果。对谈基因的序列测定结果进行分析，表明不同动物附红细胞体的16SrRNA基因同源性在80％以上。从谈基因来看，附红细胞体与立克次氏体没有同源性，而与肺炎支原体和穿透支原体亲垮关系较近。 相似文献
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弓形虫环介导等温扩增快速检测方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
为了建立弓形虫的快速检测方法,本研究建立了一种灵敏、特异、快速的分子生物学检测方法——环介导等温扩增技术(LAMP)。用10倍系列稀释的DNA样品对该检测方法的灵敏度进行了测试,同时通过对扩增产物做内切酶验证;为证明LAMP技术的特异性,对新孢子虫、附红细胞体、瑟氏泰勒虫等病原体进行检测。结果显示:利用LAMP技术成功检测到弓形虫基因区,此方法的灵敏度可达到能检测5个拷贝DNA分子水平,酶切分析结果正确,并且特异性强,对新孢子虫、附红细胞体、瑟氏泰勒虫等病原体检测均为阴性。说明LAMP技术可应用于弓形虫的快速检测。 相似文献
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An Anaplasma marginale DNA probe has been developed by using an improved method for the isolation of genomic DNA. Purified genomic A. marginale DNA from the St. Croix isolate was partially digested with Sau 3A1 into fragments (greater than or equal to 5.0 kb). The restriction fragments were cloned using standard techniques in the pBR322 vector and used to transform E. coli (DH5) host cells. The recombinant A. marginale DNA library was screened by the colony lifting procedure. Colonies containing plasmids with A. marginale DNA inserts were identified by hybridization with a genomic A. marginale DNA radiolabeled probe (32P). Seven recombinant A. marginale DNA probes were evaluated by dot-blot in vitro hybridization assays to identify candidates as diagnostic tools in bovine anaplasmosis studies. Specificity and sensitivity experiments were carried out by using heterologous and homologous DNAs. The heterologous panel contained bovine DNA (WBC) and blood parasites DNA from Babesia bovis (Bb), Babesia bigemina (Bbi), Eperythrozoon suis (Es) and Eperythrozoon wenyoni (Ew). The homologous DNA panel included A. marginale DNAs of 12 different isolates which were isolated in the Caribbean, Mexico, and the U.S.A. The selected diagnostic probe was identified as pSt. Croix A1, and labeled with 32P by using in vitro nick translation and random primer techniques. The pSt. Croix A1 probe demonstrated 100% specificity and high sensitivity by hybridization in dot blotting and Southern blotting. The probe can detect 500-1000 infected erythrocytes per microliters which corresponds to a parasitemia of less than 0.01%. The A. marginale DNA insert was approximately 6.4 kb in size and a partial restriction map has been constructed. 相似文献
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为诊断吉林养殖场一例病死貉的病原,本试验运用细菌培养、染色镜检、生化鉴定、分子生物学鉴定和血液涂片镜检等方法对采集的病死貂的肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、肠道及血液进行病原分离鉴定,并对分离到的病原菌进行致病性和药敏试验测定。结果显示,共分离出1株优势菌株,该分离菌株在光学显微镜下呈现为两端钝圆的杆状革兰氏阴性菌;生化试验结果显示,其能分解葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖和蔗糖产酸产气,对于M-R试验、吲哚试验、淀粉水解试验结果为阳性;其16S rRNA序列与NCBI数据库中登录的已知大肠杆菌序列同源性达99%;动物致死性试验结果表明,该菌株对小鼠具有致病性;药敏试验结果显示,分离菌对喹诺酮类药物诺氟沙星和环丙沙星最敏感,对其他药物具有不同程度的耐药性;对病貉抗凝血进行涂片镜检证明有血虫感染,且红细胞感染率达98%以上。综上所述,该病貉感染的病原菌株为大肠杆菌且该大肠杆菌具有致病性,同时病貉患有血虫病,并导致了其生长发育迟缓。 相似文献
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R D Oberst S M Hall R A Jasso T Arndt L Wen 《American journal of veterinary research》1990,51(11):1760-1764
A genomic library to Eperythrozoon suis DNA was constructed in lambda gt11, and from this library, E suis clone KSU-2 was identified as a potential diagnostic probe. In hybridization experiments that used 100-microliters samples of blood collected in chaotropic salt solutions, the KSU-2 probe hybridized strongly with purified E suis organisms and blood samples from splenectomized swine that were parasitized with E suis. However, the probe under stringent conditions did not give radiographic indications of hybridizing with equine blood DNA, bovine blood DNA infected with Anaplasma marginale, canine blood DNA infected with Ehrlichia canis, feline blood DNA infected with Haemobartonella felis, or uninfected swine blood DNA. 相似文献
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本试验为建立一种高效的羊附红细胞体解离方法,采集红细胞感染率大于90%的阳性抗凝血,分别应用水浴法和药物体外驱虫法对羊附红细胞体进行解离,观察分离前后附红细胞体感染率、红细胞感染强度、附红细胞体数、杂质含量和附红细胞体的运动性5项指标;提取附红细胞体抗原,制备全蛋白悬液,测定蛋白质含量,比较解离效果。将两种方法制备的羊附红细胞体抗原全蛋白进行SDS-PAGE试验,观察条带是否一致。结果显示,200 mL血液中加入1 mL双向红莲灭,4℃作用36 h,即可达到较好分离效果。与水浴法相比,解离后,红细胞感染率和感染强度明显下降,蛋白含量增加,收率高,纯度好。SDS-PAGE结果显示,体外驱虫法所制的羊附红细胞体抗原全蛋白悬液,其抗原蛋白带与水浴法相同,因此可用于粗制羊附红细胞体抗原。 相似文献