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1.
以重组痘苗病毒作载体，探讨了关于ＶｐｕＯＲＦ对人免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）Ｅｎｖ蛋白合成和免疫原性的影响。结果表明，如果存在ＶｐｕＯＲＦ，Ｅｎｖ蛋白的合成降低，并且降低其产生抗Ｅｎｖ抗体的水平。去掉ＶｐｕＯＲＦ，不但提高Ｅｎｖ蛋白的合成，而且提高其产生的抗Ｅｎｖ抗体的水平 相似文献
2.
HIV—2env基因在大肠杆菌和重组痘苗病毒中的表达 总被引：1，自引：0，他引：1
将编码人Ⅱ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－２）ｅｎｖｇｐ１２０（Ｅ１）和ｇｐ３６（Ｅ２）分别克隆到原核高效表达载体ｐＥＴ１７ｂ、ｐＢＶ２２０和真核表达载体ｐ１０、ｐ１６中,构建成８个重组质粒。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明,在原核表达系统成功地表达了ＨＩＶ－２ｅｎｖ融合蛋白,表达的蛋白分子量分别为３５０００、７００００和５００００,而原核表达质粒ｐＥＴＥ１在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶的３５０００处可见明显的额外蛋白带。经薄层扫描测定,原核系统表达的Ｅｎｖ蛋白（ｇｐ１２０）相对含量为５．８％。在真核细胞中表达的Ｅｎｖ蛋白经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测分析,分子量分别为６００００、５７０００和４２０００。上述表达的Ｅｎｖ蛋白均能与ＨＩＶ－２阳性血清发生特异性反应。重组痘苗病毒可诱导小鼠产生抗ＨＩＶ－２Ｅｎｖ抗体 相似文献
3.
将编码人１型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－１）蛋白Ｕ的ｖｐｕ基因片段，克隆到原核表达载体ｐＥＴ－１７ｂ２（ｐＥＴ－１７ｂ去掉了一含起始密码子ＡＴＧ的６０ｂｐ小片段）的Ｔ７噬菌体启动子下游，构建成重组表达质粒ｐＥＴ－１７ｂ２，并使ｖｐｕ基因片段在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中高效表达，产物为１６０００的Ｖｐｕ重组蛋白，表达量占菌体总蛋白的１１．２％。蛋白质印迹试验表明，重组Ｖｐｕ蛋白与抗Ｖｐｕ抗体发生特异性反应 相似文献
4.
HIV—1gag基因重组痘苗病毒的构建的高效表达 总被引：4，自引：1，他引：3
Ｇａｇ蛋白是２ Ｉ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－１）重要的结构蛋白，可诱导机体产生体液和细胞免疫应答。本试验将ＨＩＶ－１不同长度的长末端重复序列（ＬＴＲ）和全长的ｇａｇＯＲＦ置于痘病毒启动子控制下，经过同源重组、红细胞吸附试验筛选和间接免疫荧光试验鉴定，分离了６株重组痘苗病毒。免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）和免疫酶试验检测表明，６株病毒有表达ｇａｇ基因，其中以ｖ１６１．Ｇ△２的Ｇａｇ蛋白表达量最高 相似文献
5.
Ｇａｇ蛋白是人Ⅰ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－１）重要的结构蛋白，可诱导机体产生体液和细胞免疫应答。本试验将ＨＩＶ－１不同长度的长末端重复序列（ＬＴＲ）和全长的ｇａｇＯＲＦ置于痘病毒启动子控制下，经过同源重组、红细胞吸附试验筛选和间接免疫荧光试验鉴定，分离了６株重组痘苗病毒。免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）和免疫酶试验检测表明，６株病毒均能表达ｇａｇ基因，其中以ｖ１６ＬＧ△２的Ｇａｇ蛋白表达量最高，占细胞裂解物上清的５．１９％，相当于１４．７μｇ／１０６细胞，接近杆状病毒的表达产量。重组蛋白主要为ｐ５５ｇａｇ蛋白前体，但也有一部分被加工，生成成熟蛋白ｐ２４ｇａｇ、ｐ１７ｇａｇ及其中间蛋白。表达的重组蛋白可形成病毒样粒子（ＶＬＰ），并可诱导小鼠产生抗Ｇａｇ蛋白抗体 相似文献
6.
采用腹腔的接种１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株，这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株，ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应，经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＣ２ａ，ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０＾３～１０＾５之间。 相似文献
7.
不同启动子对重组痘苗病毒表达狂犬病病毒糖蛋白基因的影响 总被引：2，自引：1，他引：1
以血凝素（ＨＡ）基因为侧翼，将狂犬病病毒糖蛋白基因ｃＤＮＡ置于不同类型的痘苗病毒复合启动子下游，构建了４种表达质粒。重组表达质粒转染已感染ＷＲ株痘苗病毒的ＢＨＫ２１细胞，并通过鸡红细胞吸附试验，筛选、纯化出与表达质粒对应的４组ＨＡ－重组痘苗病毒：ｖＳＦＪ１－１０ＲＶｇｐ，ｖＳＦＪ２－１６ＲＶｇｐ，ｖＲＪ１－１０ＲＶｇｐ，ｖＲＪ２－１０ＲＶｇｐ。经间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）鉴定，从４组重组病毒中每组各鉴定出１株阳性重组病毒。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测显示，重组病毒感染的ＢＨＫ２１细胞裂解物上清中有１种蛋白与抗ＲＶＧＰ的ＭｃＡｂ发生特异反应，分子量为６９０００。在重组病毒感染早期，ＲＶＧＰ的表达量以ｖＳＦＪ１－１０ＲＶｇｐ最高；而在感染晚期，则以ｖＳＦＪ２－１６ＲＶｇｐ最高。４株重组病毒免疫小鼠，均能够不同程度地诱导小鼠产生抗ＲＶＧＰ特异性抗体。 相似文献
8.
猪生殖—呼吸道综合征病毒CH—1a株N基因的原核表达 总被引：3，自引：0，他引：3
将ＰＲＲＳＶＣＨ－１ａ株Ｎ基因用ＥｃｏＲＩ和ＰｓｔＩ双酶切从重组质粒ｐＵＣ１８－ＯＲＦ７切下后,插入到原核表达载体ｐＢＶ２２０的ＰＲ,ＰＬ启动子下游,得到重组表达质粒,ｐＢＶ２２０－ＯＲＦ７,转化了ｐＢＶ２２０－ＯＲＦ７的大肠杆菌ＪＭ８３经诱导培养后,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达产物,结果表明ＰＲＲＳＶＣＨ－１ａ株的Ｎ基因在原核载体上得到高效表达,表达产物占菌体总蛋白的１５． 相似文献
9.
１日龄ＳＰＦ来航鸡经口双重感染鸡贫血病病毒（ＣＡＶ）Ｃｕｘ－１株及鸡呼肠病毒（ＲＥＯＶ）Ｓ１１３３或Ｕｃｈｉｄａ株。于接种后第１４天，检查血细胞压积（ＰＣＶ）、称体重、观察骨髓、胸腺及法氏囊病变。结果，双重感染ＣＡＶ及Ｓ１１３３株ＲＥＯＶ的雏鸡与感染其中之一病毒的雏鸡相比，其体重增重少，病变重，而且比仅感染ＣＡＶ的雏鸡在平均ＰＣＶ上也明显低。双重感染ＣＡＶ及Ｕｃｈｉｄａ株ＲＥＯＶ的雏鸡，不加重发病 相似文献
10.
对猪生殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）核衣壳蛋白（Ｎ）作为ＥＬＩＳＡ抗原进行了研究，将编码ＰＲＲＳＶＮ蛋白的基因０ＲＦ７ｃＤＮＡ插入杆状病毒表达载体ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ２Ａ，通过同源重组获得了重组杆状病毒ＯＲＦ７－ＡｃＭＮＰＶ，感染昆虫细胞ＳＦ９表达了Ｎ蛋白，占细胞总蛋白的７．０７％，纯化后作为抗原建立了间接ＥＬＩＳＡ，与ＩＤＥＸＸ公司的ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒有９６％的符合率，与ＩＦＡ有１００％的符合率。试验证实：ＰＲＲＳＶＮ蛋白在昆虫细胞中得到高效表达且是检测ＰＲＲＳＶ抗体的良好抗原。 相似文献
11.
减蛋综合征病毒pVⅢ基因和E3区序列测定及结构分析 总被引：9，自引：1，他引：8
克隆了减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）中国分离株基因组ＨｉｎｄⅢ－Ｅ片段，并分析了其核苷酸序列。该片段位于基因组中央５８．７～６８．９物理图谱单位（ｍｕ），片段全长共３１９４ｂｐ。其中含有１个完整的和２个不完整的开放性读码框架（ＯＲＦ），分别编码ｐＶⅢ蛋白、１００Ｋ蛋白基因Ｃ端和纤维蛋白Ｎ末端部分。ｐＶⅢ蛋白基因由７５３个碱基（ｎｔ）组成，编码２５０个氨基酸（ａａ），编码产物的分子量为２８５００。氨基酸水平的同源性比较表明，ＥＤＳＶ的ｐＶⅢ蛋白与禽腺病毒１型（ＦＡＶ１）及人和其他动物腺病毒ｐＶⅢ蛋白的同源性为２８％～３６％，而与羊腺病毒（ＯＡＶ）的同源性高达５２％，提示ＥＤＳＶ与ＯＡＶ间的亲缘关系更近。按照人腺病毒基因组结构的特征，在ｐＶⅢ和纤维蛋白基因之间，应为Ｅ３区，但该序列只有２４５个ｎｔ组成，序列中保留了ＴＡＴＡＢｏｘ和ｐｏｌｙＡ信号。但除了２个仅编码４９ａａ和３２ａａ多肽的ＯＲＦｓ外，不编码任何产物，且核苷酸序列与其他腺病毒的Ｅ３区无同源性，证实此区无明显Ｅ３区样结构。 相似文献
12.
将ＰＲＲＳＶＣＨ１ａ株Ｎ基因用ＥｃｏＲＩ和ＰｓｔＩ双酶切从重组质粒ｐＵＣ１８ＯＲＦ７切下后，插入到原核表达载体ｐＢＶ２２０的ＰＲ、ＰＬ启动子下游，得到重组表达质粒ｐＢＶ２２０ＯＲＦ７。转化了ｐＢＶ２２０ＯＲＦ７的大肠杆菌ＪＭ８３经诱导培养后，用ＳＤＳＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达产物。结果表明ＰＲＲＳＶＣＨ１ａ株的Ｎ基因在原核载体上得到高效表达，表达产物占菌体总蛋白的１５３％。表达蛋白可望成为有价值的ＰＲＲＳ诊断抗原。 相似文献
13.
中国结东地区猪生殖—呼吸道综合征病毒（S1株）ORF5—7基因特？… 总被引：2，自引：0，他引：2
本研究对我国华东地区猪生殖和呼吸综合征病毒分离株Ｓ１主要结构蛋白基因进行了ＰＣＲ扩增和ＤＮＡ测序分析。结果表明，长度为１５２０ｂｐ ＤＮＡ序列含有３个阅读框ＯＲＦｓ，即ＯＲＦ５，ＯＲＦ６和ＯＲＦ７，ＯＲＦ５和ＯＲＦ６及ＯＲＦ６和ＯＲＦ７间有部分碱基重叠，且与欧洲一美洲型ＰＲＲＳＶ相似。 相似文献
14.
从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）ＡＡ－２株，经常规方法提取其病毒核酸后，构建了限制性内切酶ＰｓｔⅠ及ＨｉｎｄⅢ水解片段的基因文库。对其中ＨｉｎｄⅢ－Ｆ片段（５２．９～５８．９ｍｕ）的正反２条链的序列测定发现，其反链存在１个编码容量为３８７个氨基酸（ａａ）的开放读码框架（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ＯＲＦ），经Ｇｅｎｅｂａｎｋ／ＥＭＢＬ同源搜寻后证实其编码产物为ＥＤＳＶ的ＤＮＡ结合蛋白（ＤＢＰ）。与其他腺病毒ＤＢＰ的氨基酸序列进行同源比较，其Ｎ端同源性在１９．０％～４６．２％之间，Ｃ端同源性在２７．７％～６０．４％之间。腺病毒ＤＢＰ的３个保守序列ＣＲ１，ＣＲ２，ＣＲ３在ＥＤＳＶＤＢＰ中有较大变化，但ＥＤＳＶＤＢＰ的锌指框架（Ｚｎ２＋ｆｉｎｇｅｒｍｏｔｉｆ）却保留了对其功能必需的残基。 相似文献
15.
犬瘟热病毒野毒株融合蛋白主要功能区基因的变异研究 总被引：12，自引：2，他引：10
根据犬瘟热病毒（ＣＤＶ）融合蛋白（Ｆ）基因的核苷酸序列，设计合成了１０条引物。用１对引物从延吉犬病料中扩增出了含Ｆ２区基因的３１４ｂｐ的片段。除两端引物序列外为２６５ｂｐ，编码８８个氨基酸。它与日本弱毒株（ＣＤＶ－Ｄ，Ｏｏｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ弱毒株（ＣＤＶ－ＯＮ）、海豹瘟热病毒２型（ＰＤＶ２）、１型（ＰＤＶ１）在核苷酸和氨基酸水平上的同源性，分别为９８．１％和９５．５％、９６．２％和９３．２％和 相似文献
16.
用禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原,建立了检测ＲＥＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＦＡ）。确定了待检血清稀释度１∶６４和兔抗鸡ＩｇＧ荧光抗体的稀释度１∶３２的工作浓度。应用该ＩＦＡ方法对人工感染ＲＥＶ的２０只３０日龄ＳＰＦ鸡进行了检测,接种后４天时均呈阴性反应,７天时８只鸡呈阳性反应,１４天２０只全部呈阳性的反应。通过对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＬＶ、ＭＤＶ、ＣＩＡＶ、ＡＩＶ等标准阳性血清的交叉试验,证明该方法特异性强。应用该ＩＦＡ方法对我国辽宁、山东、黑龙江省部分鸡群进行ＲＥＶ抗体检测,证明该方法特异性强、敏感性高,适于在生产中推广应用。 相似文献
17.
减蛋综合征病毒33K蛋白基因克隆及结构分析 总被引：2，自引：0，他引：2
纯化的减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）ＤＮＡ经ＨｉｎｄⅢ水解、０．８％琼脂糖电泳后,回收各ＤＮＡ条带并克隆至ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＫＳ载体,建立了ＥＤＳＶ基因文库,对３３Ｋ蛋白基因进行了分析。本研究证实,ＥＤＳＶ３３Ｋ蛋白基因含有２个外显子,与羊腺病毒（ＯＡＶ）３３Ｋ蛋白比较,Ｎ端编码产物的同源性为３０．８％,Ｃ端的为６０％。用ＲＴ－ＰＣＲ扩增３３ＫｍＲＮＡ和ｃＤＮＡ克隆及序列分析证实,ＥＤＳＶ３３Ｋ蛋白含有８２碱基（ｎｔ）的内含子,去掉内含子３３Ｋ蛋白基因能形成完整的ＯＲＦ,其编码产物由１７７氨基酸（ａａ）组成,推测分子质量为２．０６×１０４,与人５型腺病毒和ＯＡＶ的同源性分别为２８．１％和４４．７％。 相似文献
18.
用活的和灭活的传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）接种鸡，以ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔ ｅｒｎ印迹（ＷＢ）试验测由单一结构蛋白Ｓ１、Ｓ２、Ｍ和Ｎ所引起的抗体反应。无论用活的或灭活的ＩＢＶ接种，４种结构蛋白均在鸡体内激发抗体反应。用活的ＩＢＶ接种后，Ｓ１、Ｓ２和Ｎ蛋白诱导相似效价的抗体，而Ｍ糖蛋白诱导的抗体滴度明显较低，Ｓ１、Ｓ２和Ｎ蛋白的ＥＬＩＳＡ抗体出现时间和形成过程相似。均在接种后２周首次检到，且和病毒中和 相似文献
19.
为了预防家兔和野兔病毒性出血症ＲＶＨＤ，用牛痘病毒本哈根株构建 了一株重组牛痘ＲＨＤＶ病毒。此重组病毒表达ＲＨＤＶ衣壳蛋白（ＶＰ６０）。对表达产物分析表明，此重组蛋白的大小为６０ＫＤａ，作为抗原，在免疫沉淀和间接免疫荧光试验中可与抗ＲＨＤＶ抗体反应，用重组病毒免疫接种兔，可产生高水平的抗ＲＨＤＶ特异抗体。通过皮内和口服途径接种，可使免疫动物抵抗ＲＨＤＶ强毒的攻击。 相似文献
20.
新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因的分离克隆及在原核细胞中的… 总被引：8，自引：4，他引：4
用ＳＰＦ鸡胚繁殖新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株（强毒）、ＬａＳｏｔａＥ４株（弱毒）、对病毒进行纯一提ＲＮＡ。用１对均为２７个碱基的引物进行ＲＴ－ＰＣＲ，扩增出了２个毒株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因。将Ｆｃ基因定向克隆人ｐＵＣＬａＦｃ，用ＥｃｏＲＩ／Ｓａｌ Ｉ双酶切法、ＰｓｔＩ单酶切法、ＰＣＲ法和核酸探针法对其进行了鉴定。将鉴定好的ＬａＳｏｔａＥ４Ｆｃ基因定向导入表达载体质粒ｐＢＶ２２１，ａｑｔ 相似文献