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用地高辛随机引物法标记外源性exJSRV特异的JSRV-2片段，制备探针，用原位杂交法检测自然感染绵羊肺腺瘤病（oPA）的病肺组织中JSRV-NM的RNA及前病毒DNA，结果表明’OPA患羊肺肿瘤细胞的胞浆和核内都有JSRV-2基因mRNA的表达，同时也检测到了前病毒DNA，而相应的阴性对照无阳性信号，证实外源性JSRV-NM病毒具有特异性的DNA探针在检测致瘤性前病毒在宿主细胞中的整合具有可信度。 相似文献
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鸡包涵体肝炎病毒DNA探针的制备及其原位杂交的应用 总被引：1，自引：0，他引：1
用限制酶HirdⅢ和Ecorl双切鸡包涵体肝炎六邻体蛋白基因片段重组质粒，得到大小636bp的基因片段，用地高辛标记制备DNA探针，其灵敏度为0．1～0．3ng／μL。用该探针对感染鸡包涵体肝炎病毒的雏鸡肝组织进行原位杂交，结果表明病毒经口感染后12h肝细胞内出现病毒的复制，3～7d时病毒复制明显，9～16d病毒复制减弱。原位杂交表明鸡包涵体肝炎病毒主要定位于核内，同时也可进入胞浆中。地高辛标记鸡包涵体肝炎病毒DNA探针对检测该病毒DNA的灵敏度高，特异性强，操作方便，该探针可用于本病的分子病理学研究和特异性诊断。 相似文献
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H9N2亚型禽流感病毒原位杂交检测方法的建立 总被引：4，自引：1，他引：4
根据已知禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)核蛋白(NP)基因序列，选取其中保守区域设计出1时引物。以RT-PR方法扩增出543bp的NP基因片段，采用地高辛标记制备探针。MDCK细胞人工感染H9N2亚型禽流感病毒后，不同时间取样制备细胞涂片，进行原位杂交，研究了禽流感病毒时MDCK细胞的感染。探讨了原位杂交的条件及其应用于检测AIV感染的可行性。结果显示，感染24h后，原位杂交可检测出细胞内的病毒RNA，并且杂交信号的强度与感染时间的长短有关。研究表明。原位杂交检测禽流感病毒，不但能很好地表现病毒和细胞的位置关系,而且具有较好的特异性和灵敏性，为禽流感病毒的组织原位杂交检测奠定了实验基础。 相似文献
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应用原位杂交技术检测感染中国对虾和克氏原鳌虾体内的白斑综合征病毒 总被引：3，自引：0，他引：3
用PCR制备地高辛（DIG）标记探针，采用原位杂交技术检测感染中国对虾和克氏原鳌虾体内的白斑综合征病毒（WSSV）。患病严重的淑死中国对虾的角化上皮、胃上皮、触角腺、肝胰腺上皮、疏松结缔组织、肌肉、造血组织、鳃、卵巢之结缔组织细胞和滤泡细胞、精巢之结缔组织细胞原位杂交呈阳性；人工注射感染克氏原鳌虾的角化上皮、胃上皮、肝胰腺上皮、疏松结缔组织、肌肉、造血组织、鳃原位杂交检测呈阳性。PCR制备DIG标记探针与健康中国对虾和克氏原鳌虾无交叉反应，相应样品未加入探针杂交和未加入DIG抗体杂交均为阴性反应。 相似文献
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从GenBank下载禽流感病毒(Auian in fluenza virus,AIV)NP基因序列,通过比对选取NP基因中较为保守的片段,设计1对引物,通过RT-PCR方法扩增270 bp的目的片段,经测序确认目的片段序列正确后,用地高辛标记扩增产物制备探针.在BSL-3实验室,用AIV人工感染鸡胚成纤维细胞和SPF鸡后,制作细胞涂片和组织石蜡切片,然后在经前处理后的细胞涂片和石蜡切片上进行原位RT-PCR,再与地高辛标记的探针进行原位杂交,对细胞和组织中的AIV进行检测和定位.研究结果表明,本方法能检测出约1μg/L质粒的DNA,并能特异性地在细胞涂片和石蜡组织切片中检测和定位AIV,且成纤维细胞感染病毒8 h后即可检测到阳性信号,具有良好的特异性和较高的敏感性,为动物组织中AIV的检测定位和致病机理研究提供了敏感、特异和更为直观的方法. 相似文献
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本试验利用异硫氰酸荧光黄标记抗体和免疫金标记探针，对胚胎免疫攻毒试验鸡组织脏器中马立克氏病病毒（ＭＤＶ）抗原进行定位及动态观察。结果发现，不同组织细胞内ＭＤＶ抗原的表现形态略有不同，淋巴组织中阳性细胞内ＭＤＶ抗原多呈颗粒状或斑点状定位子细胞浆、细胞核内；脏器组织中阳性着染的实质细胞内病毒抗原则主要呈均匀弥散性分布于感染细胞（肾小管上皮细胞、肝细胞）的胞浆中而不发生瘤变。阳性细胞动态观察的结果则显示 相似文献
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利用原位杂交技术检测新疆牛结核病标本中结核菌的研究 总被引：2，自引：0，他引：2
采用原位杂交技术将地高辛标记的牛结核杆菌特异性探针即２４８ｂｐ基因片段用于检测１０份患病牛肺病变组织福尔马林固定切片标本。结果表明：基因探针原位杂交技术对切片标本的检出率较常规涂片染色高,分别为８０％和５０％,其定位观察到组织切片中的结核杆菌,又能获得有关细菌及其周围组织的原有位置关系,是一种敏感、特异的诊断方法,适应于固定标本、涂片标本的结核菌检测。 相似文献
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1口腔乳头状瘤
兔口腔乳头状瘤是由兔口腔乳头状瘤病毒引起的兔良性口腔肿瘤病。在分类学上,兔口腔乳头状瘤病毒属于乳多空病毒科,乳头状瘤病毒属,是50-52纳米的脱氧核糖核酸病毒。在50%甘油中生存2年以上,65℃30分钟加热不能被灭活,70℃加热30分钟仍有一部分病毒残留。本病毒可以实验感染其他啮齿动物,其病毒抗原性与兔乳头状瘤病毒有区别。 相似文献
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《中国预防兽医学报》2018,(11)
RNAscope原位杂交是一种检测细胞内靶标RNA的新型检测技术,为验证该技术能否用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒-猪圆环病毒2型(PRRSV-PCV2)的共感染,本研究针对PRRSV N基因和PCV2 Rep基因序列,分别设计两组特异性探针,利用RNAscope原位杂交技术分别检测了PRRSV和PCV2单独感染或PRRSV-PCV2共感染的猪肺泡巨噬细胞(PAMs)以及一例PRRSV-PCV2共感染猪的多个组织样品,同时采用间接免疫荧光试验(IFA)以及RNAscope原位杂交联合IFA对PRRSV和PCV2单独感染或PRRSV-PCV2共感染的PAMs进行检测。结果显示,通过RNAscope原位杂交技术检测PRRSV N基因和PCV2 Rep基因检测到同一PAM中的PRRSV和PCV2共感染;通过IFA检测PRRSV Nsp9蛋白和PCV2 Cap蛋白检测到同一PAM中的PRRSV和PCV2共感染;两种方法联合使用结果显示,通过RNAscope探针检测PRRSV N基因和IFA方法检测PCV2 Cap蛋白,或者通过RNAscope探针检测PCV2 Rep基因同时用IFA方法检测PRRSV Nsp9蛋白来检测同一PAM中的PRRSV和PCV2共感染。同时,RNAscope原位杂交技术能够在PRRSV-PCV2共感染猪的肺脏、脾脏和淋巴结的组织切片中检测到PRRSV和PCV2共感染的细胞。以上结果表明RNAscope原位杂交技术适用于PRRSV-PCV2共感染的细胞和组织样品的检测,为研究PRRSV-PCV2共感染及协同致病机制奠定了基础。 相似文献
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本研究通过原位杂交(ISH)和免疫组织化学(IHC)技术检测了组织中ALV-J病毒RNA的表达及定位。原位杂交结果显示：在攻毒后3周时．所检测到的组织大部分已感染病毒；病毒对肝脏、心脏、肾脏的实质细胞、骨髓髓系细胞和卵巢基质中的间质细胞、脾脏红髓内的单核-巨噬细胞有较高的嗜性．在核膜及胞浆内显示出蓝紫色颗粒状的特异性信号，而在法氏囊、胸腺、脑和坐骨神经中检测不到病毒RNA及病毒基因的表达。免疫组化结果与原位杂交相似，在核膜及胞浆内可见蓝紫色阳性信号．瘤组织的信号较强，显示了较强的抗原性。由骨髓和其他组织的结果可推测ALV-J诱导肿瘤可能和病毒基因的插入位点有直接关系，而和病毒在组织内的数量没有直接关系。 相似文献
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用原位杂交对BHK-21细胞中的FMDV定位和检测 总被引：1，自引：1，他引：0
为了明确FMDV在细胞内的增殖部位，建立检测细胞内低拷贝FMDV的方法，对试验接种FMDVO／Akesu／58（10^7TCID50）毒株的BHK-21细胞中2～10h不同时间段的病毒RNA进行检测和定位。选用FMDVRNA非结构蛋白区3D保守序列作为寡核苷酸探针，采用尾段标记法以地高辛-11-d UTP标记，用原位杂交敏感加强型试剂盒检测杂交体。结果显示，从感染FMDV后2～10h内的BHK-21细胞中检测出阳性染色的病毒粒子，这些病毒粒子大多集中在核周围，随感染时间延长阳性染色信号增强。这说明用寡核苷酸探针与敏感加强型试剂盒结合对检测细胞内低拷贝的病毒粒子是可行的，同时也从分子水平上证明FMDV主要在细胞质中进行复制和繁殖。 相似文献
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应用ViewRNA技术特异性检测感染细胞中的不同马传染性贫血病毒株 总被引：1，自引：0，他引：1
为了对体外培养细胞感染的不同马传染性贫血病毒(EIAV)株进行特异的鉴别检测,本研究基于一种新的RNA原位杂交-ViewRNA技术,通过设计合成针对EIAVFDDV13和EIAVUK3病毒株基因组RNA的特异性探针,并结合信号放大技术和荧光标记技术,同时通过激光共聚焦显微镜进行观察,建立了可时两种不同株的EIAV基因组RNA进行细胞内原位检测的方法.研究结果表明,两组探针能够特异地与感染细胞中EIAVFDD13和EIAVUK3的病毒RNA相结合,可在两种不同EIAV株共感染的宿主细胞中实现对两种毒株的有效鉴别和定位检测.该方法为进一步研究EIAV与宿主细胞间相互作用提供了有效手段. 相似文献
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生物素标记寡核苷酸探针原位检测石蜡切片鸭瘟病毒核酸 总被引：1，自引：0，他引：1
据GenBank中有关鸭瘟病毒(DPV)的1个765 bp的EcoRⅠ片段序列,用Oligo软件设计长度为37 bp的寡核苷酸并用生物素标记制备探针,经blast分析和斑点杂交检测探针的特异性后,建立从石蜡切片中检测出DPV核酸的原位杂交方法并对人工感染死亡鸭的各组织器官进行检测,结果显示:(1)寡核苷酸探针能特异性检测到DPV强毒CHv株DNA,对鸭病毒性肝炎病毒QL79株RNA、血清1型鸭疲里默氏杆菌DNA、鸭源多杀性巴氏杆菌DNA、鸭沙门菌DNA和大肠杆菌DNA的检测结果为阴性.(2)以寡核苷酸探针建立的从石蜡切片中检测出DPV核酸的原位杂交方法的最佳反应条件为:组织切片先用0.2 mol/L HCl 37℃处理20 min,然后用100 mg/L的蛋白酶K 37℃消化15 min左右;杂交时探针工作浓度为350 μg/L;Avidin-AP的工作稀释度为1:100.(3)以所建立的原位杂交法检测DPV-CHv强毒人工感染死亡鸭的各组织器官,结果肝脏、肠道、法氏囊、脾脏、食道、肺脏和肾脏呈阳性反应,DPV的DNA分布于特定细胞的细胞浆和细胞核.结果表明,原位杂交检测石蜡切片中DPV的方法具有直观、特异性强的优点,是对DPV进行检测和病原定位的良好方法,可用于DPV的侵染过程和致病机理研究及回顾性诊断检测. 相似文献
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原位杂交(ISH)技术采用特异性探针在组织切片上与细胞内特定的基因进行分子杂交,从形态学角度对组织细胞内某特定基因通过光镜进行时空表达研究[1].使用Digoxin标记探针进行原位杂交具有高敏感性和特异性、操作简便、无同位素污染等优越性.β-防御素是近年来发现的一类富含精氨酸、带正电荷的抗微生物肽,主要由哺乳动物黏膜上皮细胞产生,分布于呼吸道、胃肠道、生殖道表面和腺体中,形成机体抵抗病原体的第一道防线,在机体的先天性免疫防御中发挥着重要作用[2].本研究用Digoxin标记的原位杂交技术来检测β-防御素mRNA在蒙古绵羊胎儿体内的表达,这对研究β-防御素在蒙古绵羊胎儿的先天性免疫防御机制具有重要意义. 相似文献
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根据探针标记方法的差异,对原位杂交技术在兽医微生物研究中各个阶段的技术原理、应用现状、发展前景以及存在的不足进行了综述. 相似文献