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快速、特异检测李斯特菌单抗-夹心ELISA方法的建立及应用 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究以高度特异的、针对单核细胞增生李斯特氏菌、无害李斯特氏菌、格氏李斯特氏菌共同表位的单抗ＬＪ１０Ａ为捕捉抗原抗体和酶标抗体，建立了快速检测该菌的单抗夹心ＥＬＩＳＡ方法。该方法对单核细胞增生李斯特菌的最小检出量为５×１０５个菌／ｍｌ。人工模拟样品至少可检出５个菌／１０ｇ样品，并在４８小时内报告结果。在实际应用中，我们以该法检测了２４０份肉样和８５０份奶样，并平行以改良ＭｃＢｒｉｄｅ琼脂分离细菌相比较，证实该方法的敏感性和特异性分别达到１００％和９６．９％。 相似文献
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李斯特氏菌属特异单抗试剂的研制与鉴定 总被引：4，自引：1，他引：3
以单核细胞增生症李斯特氏菌制备免疫原，应用常规淋巴细胞杂交瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ试验筛选，得到６株分泌特异性单抗的细胞系，分别命名为Ｃ１１、Ｂ１８、Ｂ５、Ｂ６、Ｄ２、Ｃ５。单抗与标准菌株反应结果显示，Ｃ１１、Ｂ１８、Ｂ５三株单抗能与全部２４株李斯特氏菌发生反应，所试菌株中包括Ｌ．Ｍ．１４株，以及无害李斯特氏菌、伊凡诺夫李斯特氏菌、西里杰氏李斯特氏菌、威斯福尔氏李斯特氏菌和格氏李斯特氏菌 相似文献
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高度特异的李斯特菌单抗试剂的研制及鉴定 总被引：4，自引：0，他引：4
以单核细胞增生李斯特菌制备免疫原，应用淋巴细胞杂交瘤技术，建立了３株能稳定分泌抗单核细胞２增生李斯特菌，无害李斯特菌和格氏李斯特菌的单克隆抗体的细胞系，分别是ＬＪ１０Ａ，ＬＭ１１和ＬＢ５，而与其余种的李斯特菌和属外细菌不发生交叉反应。 相似文献
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李斯特氏菌因子血清的制备及食品检测的免疫磁性分离-PCR(MIPA)方法的建立 总被引：3，自引：0，他引：3
首先进行了李斯特氏菌因子血清的研制，制备出了可对所有李斯特氏菌分型的 １５ 个 Ｏ 抗原因子和４ 个 Ｈ 抗原因子的因子血清。利用复合因子血清的多克隆抗体包被磁性球，对食品中的单核细胞增多性李斯特氏菌进行免疫磁性分离，并与 Ｐ Ｃ Ｒ 方法相结合，建立了检测食品中单核细胞增多性李斯特氏菌的 Ｍ Ｉ Ｐ Ａ方法（免疫磁性分离—聚合酶链反应方法，ｍ ａｇｎ ｅｔｉｃ ｉｍ ｍ ｕｎｏｐｏｌｙｍ ｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｓｓａｙ）。对菌液、模拟样品的检测表明，本方法能够有效地克服食品基质、培养基成分和杂菌对 Ｐ Ｃ Ｒ 检验的干扰作用。食品样品在 Ｅ Ｂ增菌液中增菌 １２ ｈ 后，检测的敏感度达 ５ Ｃ Ｆ Ｕ／ｍ Ｌ，可以在 ２０ ｈ 内完成检测。本方法对实际食品样品的检测结果，与国家标准检验方法检测的结果一致。 相似文献
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李斯特氏菌属特异单抗试剂的研制与鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
以单核细胞增生．症李斯特氏菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ．Ｌ．Ｍ．）制备免疫原，应用常规淋巴细胞杂交瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ试验筛选，得到６株分泌特异性单抗的细胞系，分别命名为Ｃ１１、Ｂ１８、Ｂ５、Ｂ６、Ｄ２、Ｃ５单抗与标准菌株反应结果显示，Ｃ１１、Ｂ１８、Ｂ５三株单抗能与全部２４株李斯特氏菌发生反应，所试菌株中包括ＬＭ．１４株，以及无害李斯特氏菌（Ｌ．ｉｎｎｏｃｕａ）、伊凡诺夫李斯特氏菌（Ｌ．ｉｖａｎｏｖｉｉ）、西里杰氏李斯特氏菌（Ｌ．ｓｅｅｌｉｇｅｒｉ）、威斯福尔氏李斯特氏菌（Ｌ．ｗｅｌｓｈｉｍｅｒｉ）和格氏李斯特氏菌（Ｌ．ｇｒａｙｉ）各２株．但这三株单抗均不与其他细菌发生反应．表现出它们的高度属特异性，说明它们所识别的抗原决定簇分布于整个菌属内。另三株单抗的反应谱不尽相同。由此可见，这组单抗为李斯持氏菌检验提供了优良候选试剂，同时．上述单抗在该菌的共同抗原和免疫保护的研究方面具有重要意义。 相似文献
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李斯特氏菌因子血清的制备及食品检测的免疫磁性分离——PCR（MI … 总被引：6，自引：0，他引：6
首先进行了李斯特氏菌因子血清的研制,制备出了可对所有李斯特氏菌分型的１５个Ｏ抗原因子和４个Ｈ抗原因子的因子血清。利用复合因子血清的多克隆抗体包被磁性球、对食品中的单核细胞增多性李斯特氏菌进行免疫磁性分离,并与ＰＣＲ方法相结合,建立了检测食品中单核细胞增多性李斯特氏菌的ＭＩＰＡ样品的检测表明,本方法能够有效地克服食品基质、培养基成分和杂菌对ＰＣＲ检验的干扰作用。食品样品在ＥＢ增菌液中增菌１２ｈ后,检 相似文献
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为了同时快速准确的检测产单核细胞李斯特菌以及是否为有毒力的产单核细胞李斯特菌,根据相关文献报道的四重PCR方法,针对该菌的种特异性基因inl A基因进行引物设计,扩增片段大小为800bp,结果应用该PCR法可特异性的扩增出目的基因片段,与GenBank上发表的序列同源性为97.3%。同时通过对毒力基因inlB,inlC和inlJ的检测用来判断菌株的相关毒力。而同一属的其他菌种无害李斯特菌(L.innocua),韦氏李斯特菌(L.welshimeri)均无特异条带,嗜水气单胞菌(J-1),产气荚膜梭菌(C57-13),大肠埃希菌(ATCC 25922),鼠伤寒沙门菌(C79-32),金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)结果均为阴性。对临床上送检的23份样品进行四重PCR方法检测并同时与国家标准GB/T22429-2008食品中单核细胞增生李斯特氏菌的快速筛选检验中使用的检测方法进行比对,两种检测方法的结果完全符合,均检测出7份阳性样品。并且四重PCR法表明这7份阳性样品中的产单核细胞李斯特菌均携带有3种毒力因子(inlB,inlC和inlJ),因此该四重PCR法可用于快速鉴定是否是有毒力的产单核细胞李斯特菌,为有效预防控制产单核细胞李斯特菌污染提供技术支撑。 相似文献
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目的了解新疆石河子地区动物性食品中单核细胞增生李斯特氏菌(LM)污染状况。方法在石河子地区选取5个具有代表性动物性食品零售点,对最常食用的生鲜猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、冻鸡肉、冻虾和冻带鱼8类动物性食品进行随机采样,采用病原分离培养和PCR法对样品中的单核细胞增生李斯特氏菌进行检测。结果检测8类249份食品样品,细菌分离鉴定阳性样品12份,平均阳性率4.82%;PCR法检测阳性样品36份,平均阳性率为14.46%。结论石河子动物性食品中LM的污染比较普遍,尤以冻鸡肉和冻虾LM污染较重,新鲜猪肉、牛肉和羊肉LM污染程度较轻。 相似文献
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《动物医学进展》2020,(7)
将环介导等温扩增技术(LAMP)分别与浊度信号检测系统(turbidimeter)和荧光信号检测系统(fluorescence)相结合,建立了LAMP-浊度/荧光单核细胞增生性李斯特菌检测方法。选择单核细胞增生性李斯特菌保守毒力基因iap序列,通过环介导等温扩增引物设计在线软件设计4条特异性引物,进行反应条件的优化,并对建立的LAMP的特异性和灵敏度进行评价分析。结果表明,构建的LAMP-浊度信号检测方法优化后的扩增温度为61℃,菌液最低检测浓度为22.1 CFU/mL,灵敏度是普通PCR扩增方法的10倍;LAMP-荧光信号检测方法优化后的扩增温度为64℃,菌液最低检测浓度为2.21 CFU/mL,灵敏度是普通PCR扩增方法的100倍;建立的两种LAMP方法的特异性良好,其中1株单核细胞增生性李斯特菌标准菌株和1株本试验分离保存的单核细胞增生性李斯特菌检测结果均为阳性,8株非单核细胞增生性李斯特菌检测结果均为阴性。利用两种LAMP方法对630份肉类及其制品、人工污染样品等进行检测,检出45个LAMP阳性,与国标法(GB)检测结果一致。结果表明,建立优化的单核细胞增生性李斯特菌LAMP-浊度/荧光检测方法具有快速、特异、灵敏等特点,特别适用于基层兽医、食品及口岸一线部门对单核细胞增生性李斯特菌快速筛查工作。 相似文献
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为确定生鲜乳中单核细胞增生李斯特菌的快速检测方法,以从河南省奶站及奶牛养殖场抽取的267批生鲜乳为检测对象,分别采用传统培养法、PCR检测法和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法进行检测,并以传统培养法为参考标准,对检测结果进行比对确认。结果显示:常规的传统培养法检出阳性3份;PCR法检出阳性5份,经传统培养法确认阳性3份,符合率为60%;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法检出阳性3份,经传统培养法全部确认为阳性,符合率为100%。结果表明,同传统培养法相比,PCR法容易产生假阳性结果,而基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法能够快速、准确检测生鲜乳中单核细胞增生李斯特菌,适合于大批量样品的快速检测。 相似文献
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鸡传染性法氏囊病快速诊断方法的研究 总被引：6，自引：0，他引：6
本文报道了一种既可以检测ＩＢＤ囊毒抗原，又可以检测ＩＢＤ抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）双抗体夹心法。用本方法检测ＩＢＤ阳性法氏囊样品１２２份，结果检出阳性１２０份，符合率为９８．４％。检测阴性法氏羹样品８８份，均为阴性。本方法与琼脂扩散试验方法比较，共检测人工感染发病的病死鸡法氏囊９７份，结果琼脂扩散检出阳性法氏囊４９份（５０．５１％），阴性４８份（４９．４８％），而用本方法检测结果，全为阳性，检出阳性率为１００％，比ＡＧＰ法检出率高４９．４８％。检测高免蛋黄液的抗体。１６个样品（以２倍递增进行稀释），结果本方法比琼脂扩散试验高１～２个滴度。试验证明该方法特异、敏感，并且快速简便，试验在室温条件下进行，不需要任何仪器设备，用肉眼观察颜色的变化就可判断试验结果，试验反应时间仅需１０分钟左右。 相似文献
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《中国兽医学报》2014,(10)
将环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)与横向流动试纸条检测技术(lateral flow dipstick,LFD)联合,建立了1种可应用于单核细胞增生李斯特菌快速检测的新方法。针对单核细胞增生李斯特菌的actA基因设计3对引物(其中,上游内引物由生物素标记)和1条异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针,进行由生物素标记的LAMP扩增反应,并利用LFD对经FITC标记探针杂交的扩增产物完成检测。优化后的LAMP反应条件为65℃反应40min,从细菌基因组DNA提取到LFD结果判断只需90min左右,比常规PCR技术缩短近2h。LAMP-LFD可特异性地检出单核细胞增生李斯特菌,对哈维弧菌等常见弧菌及嗜水气单胞菌等的检测结果为阴性。灵敏性试验表明,LAMP-LFD针对病原纯培养物的检测灵敏度为3.2×101 CFU/mL或0.64CFU/反应,是LAMP检测的10倍,常规PCR检测的100倍;针对人工污染单核细胞增生李斯特菌的原料奶样品的检测灵敏度为1.6×102 CFU/mL或3.2CFU/反应。利用本方法可从采集样品中检测到单核细胞增生李斯特菌,检测结果与传统的细菌分离培养方法结果一致。试验表明,本研究建立的LAMP-LFD技术可特异、准确地应用于单核细胞增生李斯特菌检测,而且灵敏度高、操作简单、检测成本低,有望发展成为单核细胞增生李斯特菌快速检测的有效手段。 相似文献
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为鉴定分离自新疆北疆绵羊单核细胞增生李斯特氏菌,本研究采用多重PCR方法,鉴定来自病发地区部分羊场的发病绵羊、健康绵羊、羊舍环境和乌鸦粪分离的30株李斯特氏菌分离株的8株单核细胞增生李斯特氏菌分离株血清型。结果为4株发病绵羊株有3株鉴定为单核细胞增生李斯特氏菌,血清型为1/2a或4b,1株为非单核细胞增生李斯特氏菌;5株健康绵羊株血清型为1/2a;其余来自羊舍水源的3株、乌鸦粪的2株及健康绵羊16株为非单核细胞增生李斯特氏菌,表明来自发病绵羊、健康绵羊及参考菌株LM血清型之间具有相关性。 相似文献
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鸡传染性喉气管炎王岗株病毒（ＩＬＴＶ）经ＳＰＦ鸡肾细胞增殖，差速离心及蔗糖密度梯度离心纯化，电镜观察。以纯化的病毒４次免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，按常规方法进行细胞融合，采用有限稀释法克隆，经ＥＬＩＳＡ筛选出３株（８Ｅ２、１３Ｇ６、９Ｃ４）分泌抗ＩＬＴＶ特异ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞。特异性试验表明它们与鸡的传染性支气管炎、痘病毒、新城疫病毒、马立克氏病病毒、白血病病毒及鸡肾细胞均无交叉反应。在获得的三株单抗建立单抗夹心－ＥＬＩＳＡ法基础上，首次建立了快速检测喉气管炎感染的ＥＬＩＳＡ试剂盒，对ＩＬＴＶ纯病毒的最小检出量为３１．０ｎｇ／ｍｌ病毒蛋白。以该试剂盒对黑龙江省哈尔滨地区、辽宁省沈阳、大连地区、山东省济南及上海等地６５６５份喉部株拭样品进行检测，共检出阳性１１５４头份。对部分ＥＬＩＳＡ阳性和阴性样品进行平行病毒分离，结果阳性符合率为１００％（１１２／１１２），阴性符合率为９５％（３８／４０）。研究表明，该试剂盒特异性强，重复性好。该方法的建立为鸡群疫病监测，免疫鸡群抗体水平检测提供了新的可靠方法。 相似文献
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单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
为建立单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)的快速检测方法,本研究以LM iap基因为靶基因设计合成引物及TaqMan探针,建立实时荧光定量PCR快速检测LM的方法。结果显示,对15株试验菌株进行实时荧光定量PCR检测,只有LM菌株检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为6.5 CFU/mL;稳定性和重复性试验结果表明,同一样品重复检测4次Ct值的变异系数均小于2%;利用该检测方法对采集的139份样品进行检测,共计检出3份LM阳性样品,与国标法(GB 478930-2010)检测结果一致。该检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,具有良好的实用性。 相似文献
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三明市四种销售畜禽肉品中李斯特氏菌污染情况调查 总被引：1，自引：0，他引：1
为了解三明市畜禽肉类中李斯特氏菌的污染情况。2000年6月至2001年5月,采集市区菜市场销售的畜禽肉类,按GB4789-94进行李斯特氏菌分离、鉴定。结果从4种畜禽肉类中检出了李斯特氏菌,检出率为12.2%(49/403),其中猪肉检出率最高为18.2%,鸡肉次之,鸭肉最低为3.8%,(p<0.01)。一年四季均有李斯特氏菌检出,秋季较高,(p>0.05)。本次仅从猪肉中检出1株单核细胞增生李斯特氏菌,占2.0%,其余44株为格氏李斯特氏菌,占89.9%,默氏李斯特氏菌4株占8.2%。 相似文献
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用PPA—ELISA检测鸡痘病毒抗体的研究 总被引：7，自引：0，他引：7
建立了检测鸡痘病毒抗体的ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ，用该法检测７５份鸡血清样品，鸡痘病毒抗体检出率（２１．３３％）高于琼凝扩散试验（１０．６７％），经血清抗体吸收和重复性试验，证明ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ法具有特异性强和重复性好特点，此外，对４种封闭液的封板结果表明，１０％犊牛血清ＰＢＳ／Ｔ效果最好，次之为０．２５％白明胶ＰＢＳ／Ｔ，０．５％牛血清白蛋白ＰＢＳ／Ｔ，０．１％牛血清白蛋白ＰＢＳ／Ｔ。 相似文献
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建立了检测鸡痘病毒抗体的ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ。用该法检测７５份鸡血清样品，鸡痘病毒抗体检出率（２１．３３％）高于琼脂扩散试验（１０．６７％）。经血清抗体吸收和重复性试验，证明ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ法具有特异性强和重复性好特点。此外，对４种封闭液的封板结果表明：１０％犊牛血清ＰＢＳ／Ｔ效果最好，次之为０．２５％白明胶ＰＢＳ／Ｔ、０．５％牛血清白蛋白ＰＢＳ／Ｔ、０．１％牛血清白蛋白ＰＢＳ／Ｔ。 相似文献