PRRSV云南A06株ORF5和ORF7基因的克隆与序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

曾少灵  林庆燕  花群义  张彩虹  阮周曦  杨俊兴  孙洁  秦智锋  曹琛福  陈兵  吕建强 《动物医学进展》2010,31(3):12-17

设计2对引物分别扩增PRRSV的ORF5和ORF7基因,对从云南某猪场分离到的毒株A06进行RT-PCR检测,得到2条特异性扩增带,克隆至pMD18-T载体并测序。将A06株的ORF5和ORF7基因及其推断氨基酸序列分别与PRRSV欧洲型代表株LV、美洲型代表株VR2332和7株中国分离的美洲型毒株相应基因进行核苷酸和氨基酸序列比对分析。结果显示,A06株属于美洲型,其ORF5和ORF7基因及推断氨基酸与我国2006年分离的4株HP-PRRSV代表株的相似性高达98%～99%,与欧洲型代表株LV的相似性只有56%～64%。分别构建了以上毒株ORF5和ORF7基因的亲缘关系图谱,反映了A06株ORF5和ORF7基因的进化位置,完成2个基因的遗传变异分析。  相似文献   

4种动物虫媒病病毒多重RT-PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

阮周曦  花群义  杨俊兴  曾少灵  曹琛福  秦智锋  吕建强  林庆燕  周晓黎 《动物医学进展》2010,31(2):25-31

分别设计和合成4对特异性引物,通过对反应条件的优化,初步建立了鉴别蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血病病毒(EHDV)、水疱性口炎病毒(VSV)和赤羽病病毒(AKV)的多重RT-PCR检测方法,并对其特异性和敏感性进行了检测。结果表明,所设计的4对引物可对同一样品中的VSV、BTV、EHDV和AKV进行特异性扩增,所扩增的目的片段的长度分别为301、351、537、250bp。建立的四重RT-PCR检测方法能够检测出10-7稀释的细胞培养病毒液,4种病毒之间没有发生交叉反应,说明该检测方法特异性强,敏感性较高。所建立的多重RT-PCR方法可用于上述4种动物虫媒病病毒的快速鉴别诊断,在动物检疫、临床诊断和流行病学调查方面具有较好的应用前景。  相似文献   

二重实时荧光PCR方法检测山羊和绵羊源性成分   总被引：1，自引：0，他引：1  

曾少灵  秦智锋  阮周曦  花群义  陈书琨  吕建强  张彩虹  曹琛福  孙洁  陈兵  吴绍精 《中国预防兽医学报》2008,30(10)

本研究根据山羊、绵羊线粒体中的cyt b基因序列,利用ABI primer express 3.0和DNAStar软件设计了特异性引物和探针.通过对引物和探针浓度、Mg2 浓度、dNTP浓度和Taq酶用量以及反应条件等因素的优化筛选,建立了能同时鉴别山羊和绵羊源性成分的二重实时荧光PCR方法.所建方法灵敏性高、特异性好,对17种不同源性的动物DNA和50份不同来源的样品DNA进行实时荧光PCR检测,结果表明引物与探针能特异地鉴别检测出山羊和绵羊源性成分.实验结果表明该检测方法适用于饲料、肉制品、奶制品和生皮等动物源性产品的山羊和绵羊源性成分鉴定.  相似文献   

小反刍兽疫病毒H蛋白的原核表达和免疫学活性鉴定     

陶虹  孙洁  李健波  刘建利  阮周曦  张彩虹  曹琛福  吕建强  花群义  杨俊兴 《动物医学进展》2014,(11)

研究小反刍兽疫病毒（Peste des petits ruminants virus,PPRV）H 蛋白生物学活性,为建立PPRV 抗体检测方法提供材料。根据 GenBank 已发表的 PPRV H 蛋白质序列,设计上、下游引物,以 PPRV核酸为模板进行 PCR 扩增,扩增产物克隆至 pET52／LIC 载体中,构建了 pET52／LIC-PPRV H 表达载体。将 pET52／LIC-PPRV H 重组质粒转化大肠埃希菌 BL21（DE3）进行融合表达,经 SDS-PAGE 电泳分析,可见 PPRV H 蛋白成功得到了表达,融合蛋白的分子质量约为75 ku,Western blot 分析表明所表达的重组蛋白可与 PPRV 阳性血清发生特异性反应,说明表达的 PPRV H 蛋白可以作为建立 PPRV 抗体检测的蛋白。  相似文献   

猪细小病毒VP2基因的克隆、测序与原核表达   总被引：9，自引：0，他引：9  

赵俊龙  陈焕春  吕建强  肖少波  周复春 《畜牧兽医学报》2003,34(2):195-198

利用PCR技术从猪细小病毒的RF DNA模板中扩增了含有VP2全基因的2.0kb的基因片段，将PCR产物克隆至pMD18-T载体，利用双脱氧末端终止法测定了VP2全基因的核苷酸序列。将所得的核心苷酸序列和推导的氨基酸序列分别与GenBank中的相应序列进行同源性比较，同源性均在99%以上，从而说明该蛋白的碱基序列和氨基酸序列均具有高度的保守性。将VP2全基因分别克隆入原核表达载体pET15(b)、pET17(b)和pET28(b)构建成表达质粒pET15bVP2、pET17bVP2和pET28bVP2；将含有VP2基因起始位点至EcoRⅠ切点间的0.8kb片段克隆入pET17(b)中构建成表达质粒pET17bVP2f。利用上述四种质粒转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导后SDS-PAGE检测表达情况，结果发现pET17bVP2f质粒在45kD处有一特异性表达带，而其它几种质粒均未看到特异性表达带，推测VP2基因3‘端的某些结构可能对VP2全基因的表达有一定影响。这一结果对研究VP2基因的结构与功能具有重要意义。  相似文献   

口蹄疫病毒抗原胶体金试纸条的研究     

吕建强  杨俊兴  花群义  曹琛福  张彩虹  陶虹  刘建利  阮周曦 《动物医学进展》2012,(3):14-18

利用单克隆抗体技术制备抗口蹄疫病毒的单克隆抗体,特异性试验表明其只与O、A、Asia 1型3种血清型FMDV抗原结合。进而采用胶体金标记技术,以胶体金标记的抗口蹄疫病毒单克隆抗体、多克隆血清抗体和葡萄球菌A蛋白为主要材料,研制口蹄疫快速检测试纸条。该试纸条检测O、A、Asia 1型3种血清型灭活口蹄疫病毒均为阳性,检测水疱性口炎病毒、猪水疱病病毒、蓝舌病病毒、猪蓝耳病病毒4种灭活抗原及小反刍兽疫病毒疫苗株均为阴性,试验结果与口蹄疫实时荧光定量RT-PCR方法的完全一致,表明其具有良好的特异性。敏感性试验结果是,试纸条的检测极限为1∶160稀释的样品,其敏感性相当于实时荧光定量RT-PCR方法的1/64。由于试纸条具有操作方便、检测快速等优点,因此该试纸条可以用于大量临床样品的快速检测和现场检测。  相似文献   

农作物秸秆沼气池出料及其机械的研发     

吕建强  张满  王连  赵广义  胡玉军 《农机化研究》2012,(4):210-212,231

秸秆的沼气化处理为闲置秸秆资源提供了一条最佳的利用途径,但秸秆沼气池使用中需要进行定期换料和清池大换料,以保持沼气池的产气效率。由于秸秆沼渣中含有大量的纤维质沼渣,如使用禽畜粪便类沼气池用抽吸式沼液沼渣出料车进行出料,工作中容易出现堵塞现象,难以适应秸秆沼气池的出换料工作需要,此问题正成为秸秆沼气推广使用的瓶颈。为此,介绍了一种抓取式秸秆出料车,解决了农村户用秸秆沼气池的出料问题。  相似文献   

杀鲑气单胞菌的实时定量PCR检测方法的建立和应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘宗晓  刘荭  史秀杰  高隆英  岳志芹  吕建强  何俊强  江育林  谢从新 《海洋水产研究》2008,29(5)

选取杀鲑气单胞菌A层A蛋白(VapA)保守序列,利用Primer Express2.0软件设计引物和探针.以ATCC标准株10倍系列稀释,通过血球计数板计数后进行实时定量PCR,制作标准曲线.通过SDS软件获得细菌数量(X)与Ct值的关系为:Ct＝-3.1574lgX 43.6841(相关系数R2=0.992).实时定量PCR的检测限为6个细菌.建立的方法对杀鲑气单胞菌典型株和非典型株具有较好的特异性,与其他细菌没有交叉反应.杀鲑气单胞菌实时定量PCR方法的建立,对于快速口岸检疫、临床诊断和疫病监测具有重要的应用价值.  相似文献   

家蚕微孢子虫诊断方法研究进展     

曹琛福  林彦星  吕建强  花群义 《安徽农业科学》2016,(2)

自家蚕微粒子病被发现近200a来,它给世界各养蚕国家造成巨大的经济损失,已被列为蚕种生产的唯一检疫对象。为了更好地了解并总结家蚕微孢子虫现有的诊断方法及其研究进展,该研究主要对近些年来在光学显微镜检测、电镜观察检测、免疫学检测和分子生物学检测方面的研究进行了综述,并且展望未来发展趋势,以期对家蚕微粒子病进行更快速、准确的诊断与防治。  相似文献   

机械式沼液沼渣出料车的研发     

吕建强  王连 《农机化研究》2011,33(3)

沼气的综合利用可以改善农村的生产、生活环境,降低生产成本.提高经济效益,它绿色环保,是发展农业低碳循环型经济的重要基础工程,是当前社会主义新农村建设的重要内容.沼气池使用中需要进行定期清池换料,以保持沼气池的产气效率,如人工作业,人员需下到沼气池内,既不卫生,而且费时费工,如操作不当还会危及人生安全,机械式沼液沼渣出料车(全文简称出料车)的研发成功解决了这些问题,同时该出料车还实现了将废弃沼液进行农田喷洒施肥作业的功能.  相似文献