同时注射口蹄疫和猪瘟疫苗对免疫效果的影响     

李金海  张东  文萍萍  张代芬  李春  张永宁  陈智英  王进 《四川畜牧兽医》2008,35(5):24-26

猪O型口蹄疫灭活疫苗(Ⅱ)和猪瘟弱毒脾淋疫苗分别单独免疫注射和混匀后免疫注射35日龄左右健康仔猪,观察其免疫反应,并用ELISA评价免疫效果.试验结果表明,两种疫苗同时分点注射,相互间的干扰很小,在生产实际中是可行的;两种疫苗混合后注射,免疫效果均显著降低,生产上不可采用.  相似文献   

四川省牛传染性鼻气管炎流行情况调查     

李丹明  张永宁  李有成 《中国预防兽医学报》1992,(3)

为查明牛传染性鼻气管炎(IBR)在全省牛群中的流行情况,从1986年至1989年共采集了1813头份血清,以细胞中和试验进行抗体检测。结果,全省58个县(市)1813头份血清检出阳性347份,平均阳性率19.14％,地区阳性率最高的达60.87%(14/23),有12个县(市)抗体阴性。检测34个奶牛场的430头汾黑白花牛血清,有20个奶牛场检出阳性血清,共76份。阳性率最高的达100％,一般为10～60％,14个奶牛场抗体阴性。检测3个冻精站和1个  相似文献   

用酶联免疫吸附和正向间接血凝试验检测猪瘟抗体   总被引：1，自引：0，他引：1  

李金海  张东  王泽洲  马孟根  张永宁  陈斌  张代芬  邢坤  杨林 《四川畜牧兽医》2003,30(7):24-24

应用ELISA和IHA对我省两种猪场的66份血清进行了检测,结果表明用ELISA检测两猪场免疫合格率分别为83.33%、80.5%,用IHA检测分别为90%、97.2%;两者检测结果符合率为84.8%,具有较高的群体相关性。  相似文献   

含非洲猪瘟病毒核酸序列病毒样颗粒的研制及其在检测方法中的应用     

冯春燕  杜方原  刘丹丹  Pershin Andrey  王彩霞  张永宁  吴绍强  林祥梅 《中国畜牧兽医》2017,44(11):3287-3293

非洲猪瘟（African swine fever,ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）引起的烈性传染病,为了保证其检测结果的准确性和可靠性,需要研制试剂盒中使用的阳性标准质控品。本试验旨在研制含ASFV核酸序列的病毒样颗粒,并探究其在检测方法中的应用。首先扩增p72基因的全长片段,利用昆虫杆状病毒系统,包装出含有p72基因的ASF DNA病毒样颗粒。为了进一步验证该病毒样颗粒在应用中的可靠性,本研究将病毒样颗粒与ASF的组织毒及细胞毒同时进行DNA核酸提取,进行实时荧光定量PCR。结果表明,本研究制备的病毒样粒子能很好的取代ASFV在实时荧光定量PCR检测方法中作为阳性质控品,且能对核酸提取过程进行质控,实时荧光定量PCR检测试剂盒中,病毒样粒子的最低包装浓度为10² TCID₅₀。进一步研究发现该病毒样颗粒也适用于普通PCR及LAMP检测方法中,最低浓度分别为10³和10¹ TCID₅₀。本试验结果将为规范ASF检测方法,促进ASF检测方法的转化应用及保证检测结果的准确度和可靠性提供科学依据。  相似文献   

非洲猪瘟病毒主要抗原p54-1的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定   总被引：1，自引：1，他引：1  

王彩霞  冯春燕  杜方原  刘丹丹  张永宁  林祥梅  吴绍强 《中国畜牧兽医》2018,(10)

为进一步深入研究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p54蛋白的主要抗原表位及抗原性质,本试验根据GenBank中p54基因序列(登录号:NC_001659.2)设计表达区域特异性引物,PCR扩增后连接表达载体pGEX6p-1构建pGEX6p-1-p54-1原核表达质粒;将该质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达,切除GST标签后采用阴离子柱纯化目的蛋白并鉴定;将纯化蛋白与佐剂混合乳化后作为免疫原,免疫小鼠制备p54-1蛋白多克隆抗体;采用ELISA和Western blotting检测抗体的效价和反应特性。结果显示,重组p54-1融合蛋白以可溶形式表达,切除标签后的纯化蛋白能够与ASFV阳性血清发生反应,而与PRRSV和PCV3不发生反应。利用该蛋白免疫获得的多克隆抗体经ELISA检测其抗体效价为1∶128 000。Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体能够识别ASFV p54蛋白。表明本研究成功获得了较高纯度的p54-1蛋白,制备的p54-1多克隆抗体具有较高反应性和特异性,为后续非洲猪瘟双抗夹心ELISA检测方法的建立提供依据。  相似文献   

A型塞内卡病毒VP2蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备     

张永宁  张舟  诸明欣  梅琳  王彩霞  吴绍强  林祥梅 《中国畜牧兽医》2019,(1)

本研究旨在表达A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的衣壳蛋白VP2,并制备其多克隆抗体。以SVA GD01/2017分离株RNA为模板,RT-PCR扩增VP2基因序列,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET-30a-SVA-VP2。经测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达。在非变性条件下,利用Ni-NTA琼脂糖树脂从菌体裂解液上清中纯化重组SVA VP2蛋白,并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用Protein A Sepharose CL-4B树脂从兔血清中亲和层析纯化多克隆抗体,并对其进行间接免疫荧光分析。结果显示,重组SVA VP2蛋白以可溶性和包涵体两种形式在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞内进行表达,分子质量约为47ku;制备的兔抗VP2蛋白多克隆抗体效价高达1∶64 000,该多克隆抗体仅识别SVA,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、脑心肌炎病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病病毒等常见猪病原无交叉反应,表明制备的多克隆抗体具有良好的特异性。重组SVA VP2蛋白及其多克隆抗体的成功制备为猪塞内卡病毒病血清学检测方法的建立提供了良好的生物材料。  相似文献   

四川省无规定动物疫病区示范区兽医实验室现状     

张东  吴宣  张永宁  郭莉 《四川畜牧兽医》2007,34(12)

四川省无规定动物疫病区建设从1998年开始至今,已先后在14个市、96个县(县级市、区)和两个省级单位展开,并在成都、德阳等31个市(县、区)进行了无规定动物疫病区示范区建设。10年来,示范区通过加强兽医基础设施建设,建立健全各级动物疫病监测诊断体系,  相似文献   

非洲猪瘟病毒p54蛋白的表达及单抗制备   总被引：1，自引：0，他引：1  

冯春燕  宋晓晖  仇松寅  王淑娟  王彩霞  张永宁  邓俊花  吴绍强  林祥梅 《中国动物检疫》2016,33(5):80-84

为制备非洲猪瘟病毒p54蛋白的单克隆抗体,本研究扩增p54蛋白的胞外区编码基因,分别克隆到p ET30a和p GEX-6p-1中,构建了p54-p ET30a和p54-p GEX-6p-1重组质粒;将质粒分别转化到大肠杆菌BL21中,表达C末端带6个His、N端带有GST的p54重组蛋白;利用亲和层析的方法,富集和纯化带His标签的p54蛋白;以带His标签的p54蛋白为抗原,免疫BALB/C小鼠,制备单克隆抗体;以带有GST标签的p54蛋白为抗原,对制备的单抗进行特异性验证。结果显示:大肠杆菌能高效表达带His标签和GST标签的非洲猪瘟p54蛋白;His标签的p54蛋白免疫BALB/C小鼠后,得到了3株单克隆抗体;Western blot结果表明,3株单克隆抗体能与带有GST标签的p54蛋白相互反应。本研究成功制备了p54的单克隆抗体,为进一步开展非洲猪瘟ELISA、Western blot和细胞免疫荧光检测技术的开发研究奠定了基础。  相似文献   

欧洲暴发施马伦贝格病疫情及我国应采取的对策     

张永宁  吴绍强  刘建  仇松寅  林祥梅 《中国兽医杂志》2012,48(4):92-95

2011年夏秋季节,德国和荷兰一些牛场开始出现一种未知疾病,病牛出现发热(>40℃)、精神不振、体质下降、厌食、产奶量下降(高达50%)和腹泻等临床症状,有时出现流产症状,但多数症状出现数天后自动消失[1-2]。德国弗里德里希洛弗勒研究所(Friedrich Loffler Institute,FLI)通过实验室诊断,先后排除了蓝舌病、流行性出血热、口蹄疫、裂谷热、  相似文献   

定题情报检索系统的研制     

李怀义  张永宁  王新喜  高维甫 《技术与市场》1984,(2)

一、概况航空工业部有关单位于1982年利用GRA(美国政府研究发展报告通报)磁带的3000篇文献作了定题服务试验,性能基本满意。本程序系统,首先,将GRA 磁带转换为王安计算机磁带文件(主要进行了代码转换)。随后,再把此文献带转换为航空工业部标准格式文献磁带(一个物理块一个逻辑记录)。上述转换也可以同时进行。为利于  相似文献