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刺梨及其近缘种PCR实验体系的建立与优化 总被引:13,自引:2,他引:13
以刺梨及其近缘种月季为试材,进行了RAPD-PCR实验参数的确立和优化试验。结果表明,刺梨及月季25μL反应体系的最优组成为2.5μL10×反应缓冲液,2mmol/LMg2+,0.2mmol/LdNTP,1.6mg/L模板DNA,0.4μmol/L随机引物和1.2UTaqDNA多聚酶。经PCR扩增验证,此反应体系亦适宜于刺梨的部分近缘种,可有效用于RAPD分析;通过将退火温度提高至50℃或采用“Touchdown”扩增程序,并在50μL反应体系中适当增加特异引物对浓度(1.0μmol/L),模板DNA(4.0mg/L)和TaqDNA多聚酶(3.0U/管)的使用量,建立起适合于刺梨特异DNA片段检测及回收的特异PCR扩增实验体系,为刺梨的分子克隆奠定了技术基础。 相似文献
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我国椪柑品质现状及主要产区的果实品质比较 总被引:4,自引:0,他引:4
2001 和2002 年对来自全国9 个省(市) 主要产区的67 份椪柑品质进行了分析。结果表明, 我国椪柑大(180.60 g ±9.98 g) 、中(151.24 g ±7.48 g) 、小(122.51 g ±141.1 g) 类型果实分别为42.9 %,44.9 %和12.2 %; 分别有6.1 %和44.9 %的 柑果皮颜色呈现黄绿或偏黄色和黄色; 可溶性固形物平均含量为12.5 %±1.1 %, 其中仅有四川荣县、福建平和和湖北松滋等部分地区 柑可溶性固形物含量低于11.5 %;高酸(0.95 % ±0.10 %) 、中酸(0.69 % ±0.07 %) 和低酸(0.49 % ±0.07 %) 类型的果实比例分别为2.4 %、34.7 %和42.9 %。通过比较各椪柑主产区的主要品质指标发现, 它们的果皮色泽(a/ b 比值) 、可溶性固形物含量和维生素C 含量没有明显差异; 闽中南地区的果实明显重于闽北、浙江(衢州、丽水) 和湘西鄂西地区的果实, 而与川西南地区的差异不明显; 闽中南地区和川西南地区的酸含量差异不明显, 但都明显低于另两个地区; 另外, 川西南地的区固酸比明显高于其他3 个地区, 而可食率明显低于其他3 个地区。 相似文献
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检测砂梨潜隐病毒的IC-RT-PCR和TC-RT-PCR的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以砂梨为试材,在生物学和血清学检测的基础上,采用免疫捕作RT-PCR穴IC-RT-PCR雪和试管捕作RT-PCR穴TC-RT-PCR雪技术,对苹果褪绿叶斑病毒(Applechloroticleafspotvirus,ACLSV)和苹果茎沟病毒(Applestemgroovingvirus,ASGV)进行了检测分析。结果表明,TC/IC-RT-PCR均能有效检测梨粗提液中的ACLSV和ASGV,分别获得了大小约358bp和499bp的目标扩增片段;但IC-RT-PCR检测ACLSV的效果受到病毒分离株间血清学关系影响。与传统的RT-PCR相比,IC/TC-RT-PCR不仅灵敏度更高,而且不需提取总RNA,可以简化操作程序和减少苯酚、氯仿类有机试剂对人体的伤害和对环境的污染,适合于大量梨样品的病毒快速灵敏检测。 相似文献
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为探讨不同水氮处理条件下紫花苜蓿生长状况与草地小气候特征的关系,以2年生紫花苜蓿“巨能7号”为研究对象,采用田间试验和室内分析相结合的方法,研究了宁夏引黄灌区地下滴灌条件下不同滴灌量和施氮量处理下紫花苜蓿生长特征和草地小气候的变化。结果表明:1)滴灌量和施氮量对紫花苜蓿的株高、叶面积和鲜草产量都有显著的影响,表现为紫花苜蓿的株高、叶面积和鲜草产量均随滴灌量和施氮量的增加而增加,当施氮量增加到一定值时,继续增施氮肥,其鲜草产量增产效果在不同滴灌量处理下表现出不同的趋势。2)与不施氮处理相比,增施氮肥降低了紫花苜蓿株间空气温度、浅层土层温度和株间光照强度,而增加了群体内部空气相对湿度。3)不同滴灌量对紫花苜蓿的生长微环境的调节作用不同,随着滴灌量的增加,紫花苜蓿群体相对湿度逐渐提高,而紫花苜蓿株间气温和浅层土层温度降温效应越明显。4)紫花苜蓿生育期间株高与叶面积、草产量和群体内部相对湿度呈极显著正相关(P<0.01),与群体内光照强度、株间气温、浅层土壤温度呈极显著负相关(P<0.01)。合理减少滴灌量和施氮量不仅能维持紫花苜蓿良好的生长特征,而且能提高鲜草产量和改善草地生态环境条件。本研究旨在为紫花苜蓿群体微环境生态因子的改善及高产优质栽培措施提供科学依据。 相似文献
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Spermatic and oxidative profile of domestic cat (Felis catus) epididymal sperm subjected to different cooling times (24, 48 and 72 hours) 下载免费PDF全文
DSR Angrimani KK Nagai BR Rui LC Bicudo JDA Losano MM Brito MCP Francischini M Nichi 《Reproduction in domestic animals》2018,53(1):163-170
Cooling stored epididymal samples for several days allows facilities to transport and process genetic material post‐mortem. Improvements to this practice allow the preservation of sperm from domestic cats, which are the ideal study model for wild felids. However, the modifications in spermatic features and the oxidative profile are not fully understood in cats. This information is necessary for the development of biotechniques, such as new extenders for cryopreservation. Therefore, the purpose of this study was to evaluate the spermatic and oxidative profile in samples from the epididymal cauda of domestic cats cooled at 5°C for 24, 48 and 72 hr. Spermatozoa were collected from the epididymis cauda. Evaluations consisted of computer‐assisted sperm analysis (CASA), plasma membrane integrity (eosin/nigrosin), acrosome integrity (fast green/rose bengal), sperm morphology, sperm DNA integrity (toluidine blue), mitochondrial activity (3′3 diaminobenzidine), activity of the antioxidant enzymes glutathione peroxidase (GPx) and superoxide dismutase (SOD), measurement of lipid peroxidation (TBARS) and protein oxidation. A decrease in sperm motility parameters was observed after 72 hr of cooling (i.e. total and progressive) with a higher percentage of minor (37.7 ± 6.3%) and total defects (53.4 ± 6.3%). Additionally, a decrease in high mitochondrial activity (Class I: 16.6 ± 2.2%) occurred after 72 hr. The decrease in motility rates after a long cooling time probably was caused by the increase in sperm abnormalities. A long cooling time causes cold shock and mitochondrial exhaustion, but there was no observed change with the oxidative stress condition. Therefore, cat epididymal sperm stored at 5°C appear to maintain a high quality for up to 48 hr of cooling time. 相似文献
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A fast,low‐cost and efficient method for the diagnosis of sperm DNA fragmentation in several species 下载免费PDF全文
BR Rui DSR Angrimani LC Bicudo JDA Losano M Nichi RJG Pereira 《Reproduction in domestic animals》2018,53(1):171-175
Sperm DNA fragmentation is a condition that interferes directly in the reproductive efficiency. Currently, there are several methods for assessing the sperm DNA integrity, such as Alkaline Comet, TUNEL and Sperm Chromatin Structure Assay. However, many of these techniques are laborious and require high‐precision equipment. Thus, the development of new techniques can optimize the evaluation of sperm DNA damage. Therefore, the aim of this study was to standardize the toluidine blue (TB) stain technique for the analysis of DNA fragmentation of dog, cat, bull, stallion and ram spermatozoa. For this purpose, we used six animals of each specie (n = 30), in reproductive age. Sperm was collected by different methods according to the particularities of each species, and such samples were divided into two aliquots: a sperm sample was kept at 5°C (considered as intact sperm DNA), and the remaining samples were submitted to the induction of DNA fragmentation by exposure to ultraviolet light for 4 hr. Samples were then mixed with the intact sample to obtain known and progressive proportions of sperm with fragmented DNA (0%, 25%, 50%, 75% and 100%). Semen smears were performed and subjected to staining with TB. Blue‐stained spermatozoa were considered to have DNA fragmentation. We observed high linear regression coefficients between the expected proportion of damaged DNA and the results of TB for dog, cat, ram, bull and stallion samples. In conclusion, TB stain was considered a fast and effective technique for the study of spermatozoa DNA in several species. 相似文献