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本试验旨在构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)SX-1株非结构蛋白Nsp1的真核表达质粒,并对Nsp1蛋白锌指结构1(ZF1)进行定点突变,检测其在真核细胞中的表达活性。利用TRIzol法提取总RNA,RT-PCR扩增Nsp1目的基因,经双酶切构建pCI-neo-Nsp1真核表达质粒后对Nsp1蛋白锌指结构1的8C、10C、25C和28C的4个位点进行定点突变,成功获得分别突变为A和S的8个突变体。转染HeLa细胞,通过间接免疫荧光方法(IFA)和Western blotting检测Nsp1蛋白的活性。IFA结果显示,Flag抗体检测时蛋白质主要分布在细胞质和细胞核中,Myc抗体检测时蛋白质主要分布在细胞核中。Western blotting结果显示,Flag抗体检测时,S突变体出现大小约为44和20 ku条带,A突变体出现约为44 ku条带;Myc抗体检测时,S突变体出现大小约为44和27 ku条带,A突变体出现大小约为44 ku条带。试验结果表明,本试验成功构建了Nsp1突变体的真核表达质粒,证实其能在真核细胞中表达,为进一步研究Nsp1蛋白的锌指结构是否对机体Ⅰ型IFN产生起下调作用提供基础。 相似文献
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南氨化菌、亚硝化菌、硝化菌和反硝化菌构成的氮循环菌,在代谢过程中可将含氮物质最终转化为无害的氮气释放到空气中,有效地降低水体中氮的浓度.利用从活性污泥、猪粪发酵液、鱼塘水及上壤等多种环境样品中分离得到效果较好的氨化细菌5株、亚硝化细菌4株、硝化细菌4株及反硝化细菌5株,选取不存在拮抗作用的不同氮循环功能的菌株构建菌群,并对其脱氮能力进行测定研究.结果表明,AGIQ和AGMR两个组合的脱氮能力较强,在室内模拟富营养化水样中,4 d内脱氮率分别可以达到80.92%和82.36%,这两个组合不仅能够降低总氮和氨氮浓度,而且不积累亚硝酸盐氮和硝酸盐氮.对效果最好的AGMR组合的4个菌株进行了菌种鉴定,确定分离的菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)和类产碱假单胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes). 相似文献
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以“清香”核桃为试材,研究跌落处理对鲜核桃在-7~-5 ℃冻藏条件下感官品质、营养品质及油脂品质的影响,评价跌落振荡(人工或机械振落采摘)生产操作在鲜核桃冷冻-解冻复鲜保鲜中应用的可行性,为建立鲜核桃冷冻-解冻复鲜保鲜技术体系提供理论依据。结果表明,与手工无伤采摘相比,离地3 m处跌落振荡处理对-7~-5 ℃下冻藏10个月的鲜核桃感官品质、核仁营养品质及油脂品质无显著不良影响,冻藏10个月时,核仁含水率大于22%,总脂肪含量大于50%,不饱和脂肪酸总含量大于92%,酸价小于0.61 mg/g,过氧化值小于1.93 mmol/kg。综合分析,打采振落采摘方式可用于鲜核桃冻藏保鲜的前处理工序。 相似文献
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为建立一种有效提取高纯度副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)的方法,进一步阐明HPS的致病机制,通过热酚水法提取LPS,浓缩后,采用酶解法和超离法纯化提取物,分别用硫酸-苯酚法、BCA法、紫外分光光度法,测定LPS提取物中多糖、蛋白及核酸的含量,通过SDSPAGE电泳银染方法鉴定提取物。将提取的LPS作用于猪肺泡巨噬细胞,通过荧光定量方法检测IL-1β的表达量差异。结果显示:纯化的LPS平均产率为2.56%;LPS提取物中不含还原性单糖,多糖含量为3.27%,蛋白含量为0.77%,核酸含量为0.90%;提取的LPS能够引起猪肺泡巨噬细胞IL-1β表达量显著上调。因此,通过该方法提取纯化的LPS可以用于HPS与宿主细胞间作用机制的研究。 相似文献
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十八大提出:"党担负着团结带领人民全面建成小康社会、推进社会主义现代化、实现中华民族伟大复兴的重任","坚持和发展中国特色社会主义,关键在于建设一支政治坚定、能力过硬、作风优良、奋发有为的执政骨干队伍"。毛泽东同志曾经说过:"政治路线确定之后,干部是决定因素。"阿山林管局机关是承上启下的中枢,局机关的处级中层干部是这一中枢的重要节点;局属各基层单位领导班子成员是局党委决策部署的重要承接者和落实者。在推进阿山林业可持续发展和生态文明建设中,全局各级领导干部要不断提高学习、调研和抓落实的能力。 相似文献