单股正链RNA病毒3'非编码区的结构与功能研究进展     

刘萍  刘长龙  陆嘉琦  高飞  尹杨  姚火春  袁世山 《畜牧与兽医》2011,(10)

单股正链RNA病毒基因组中的3'非编码区(3'UTR)可以形成二级或者高级结构,这些结构对维持病毒RNA的稳定性以及病毒的复制调控具有至关重要的作用。它不仅可以单独发挥作用,也可以与RNA或者蛋白相互作用调控病毒的复制、转录、翻译和包装等各个过程。本文对RNA结构和功能研究的一般方法,以及一些单股正链RNA病毒代表种属的3'UTR的结构和功能进行了综述,并且就研究前景和一些存在的问题进行了探讨。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立与应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘长龙  张建武  韦祖樟  袁世山 《中国预防兽医学报》2010,32(11)

为快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),本研究针对PRRSV的N蛋白基因保守序列,设计特异性引物和TaqMan探针,以体外转录的RNA作为标准品,设计并优化了检测PRRSV的TaqMan荧光定量PCR方法。应用该方法检测其它主要猪病病原,结果均呈阴性;针对PRRSV阳性RNA的检测灵敏度可以达到10拷贝,比常规PCR灵敏10倍～100倍;结果表明,本实验建立的PRRSV TaqMan荧光定量PCR方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。应用建立的方法测定攻毒猪血清中病毒的含量,免疫攻毒组和非免疫攻毒组在第7 d血清中病毒的载量差异不显著,而在第14 d差异显著,免疫攻毒组猪血清中病毒载量明显低于未免疫组。  相似文献   

关于钢轨接头保养修的探讨     

刘长龙 《山东饲料》2010,(18)

  相似文献   

旋耕机的工作原理及作业质量影响因素分析     

刘长龙 《农机使用与维修》2019,(1):42-42

旋耕机是农业耕整地的重要动力机械,在我国的农业生产中使用十分广泛。通过对旋耕机的工作原理进行介绍和说明,分析了旋耕机作业过程中常见的作业质量影响因素,并总结了现阶段旋耕机作业存在的问题。  相似文献   

用于DNA转染的PRRSV全长感染性cDNA克隆改建及应用     

刘长龙  李燕华  袁世山 《农业科学与技术》2010,11(6):32-36

[目的]利用核酶自我剪切功能使PRRSV的基因组获得1个精确的基因组3′末端,提高全长感染性cDNA克隆的病毒拯救效率。[方法]用3步PCR方法将获得含有丁型肝炎病毒核酶序列的片段并将其克隆到PRRSV全长cDNA克隆pAPRRS的poly（A）下游,再通过酶切,连接将牛生长激素多聚腺甘酸转录终止序列插入到核酶序列后,构建成全长感染性cDNA克隆pAPRRS-HB,新构建的克隆转染MARC-145细胞,72h后用间接免疫荧光检测病毒N蛋白和非结构蛋白2（nsp2）的表达,并用检测细胞上清中病毒的滴度。[结果]成功构建了含有核酶序列的PRRSV基因组全长感染性cDNA克隆pAPRRS-HB。新构建的全长感染性cDNA克隆能够较好地拯救出病毒,拯救效率比pAPRRS提高10倍左右。[结论]该结果为研究PRRSV基因结构与功能奠定了基础。  相似文献   

非洲猪瘟病毒CP312R基因编码蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备与应用     

刘佳晨  郭子强  陈金霞  曹云雷  童武  乔思娜  刘长龙  赵冉  郑海红  童光志  李丽薇  高飞 《中国兽医学报》2024,(1):1-6

为制备ASFV CP312R基因编码蛋白的多克隆抗体,利用PCR方法从非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的灭活样品中扩增出924 bp的CP312R基因全长序列,利用同源重组法构建出原核表达质粒pCold-Ⅰ-ASFV-CP312R,将其转化至原核表达感受态细胞BL21中,经1 mmol/L的IPTG低温条件下诱导表达CP312R编码蛋白并经过镍柱亲和层析纯化后,利用SDS-PAGE对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析,表达蛋白的相对分子质量约为34 kDa,通过Western blot分析,该蛋白能被ASFV抗体特异性识别。将所得的蛋白经处理纯化后免疫小鼠3次,得到含多克隆抗体的血清。利用该抗体检测实验室构建并拯救的表达ASFV CP312R基因编码蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV),结果显示该多抗具有良好的反应原性和特异性,并且证明了ASFV CP312R基因编码蛋白可在PRRSV活载体中稳定表达。  相似文献