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传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP3基因的克隆与原核表达 总被引:3,自引:0,他引:3
利用PCR技术扩增出IBDV的结构蛋白VP3基因,将其克隆到表达载体pPRO^EX-HTa中,获得重组质粒命名为VP3/PA,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明,插入的位置、大小和读码框均正确。SDS—PAGE检测表明,经重组质粒VP3/PA转化、诱导的受体菌E.coli DH5 α能表达结构蛋白VP3基因,约33 Ku,表达量达到了茵体总蛋白的33.9%,经Western blot等检测表明,诱导表达的抗原蛋白能与vvIBDV阳性血清发生特异性反应。这为IBDV血清学诊断方法的建立打下了基础。 相似文献
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鸡传染性法氏囊病超强毒Gx株感染性分子克隆的构建 总被引:2,自引:0,他引:2
本研究以鸡传染性法氏囊病超强毒Gx株(野毒株)基因组为模板,用蛋白酶K法提取病毒基因组核酸dsRNA,在cDNA克隆的5'端上游引入了T7启动子序列,采用Long-accurateRT-PCR(LA-PCR)一步法扩增并克隆了病毒基因组A节段与B节段全长cDNA。序列测定结果表明,基因组A节段全长共3267个核苷酸,包括5'及3'端的非编码区和两个部分重叠的开放阅读框,基因组B节段全长共2843个核苷酸,包括5'及3'端的非编码区和一个开放阅读框。将IBDV-Gx株的A节段全长基因组及B节段全长基因组分别克隆入pMD18-T载体,构建成pMD-A、pMD-B两个带有T7启动子的重组质粒。两个重组质粒线性化后,进行体外转录,然后共电转染于鸡胚成纤维细胞37℃培养72h并传代。收获的细胞传代培养物分别用RT-PCR、间接免疫荧光、蚀斑试验等方法进行鉴定,结果用RT-PCR扩增出了VP3及VP5基因片段,间接免疫荧光检测到了特异性的荧光抗体,蚀斑试验结果表明蚀斑形成单位为3×103PFU/mL。 相似文献
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以新疆吐鲁番野生刺山柑果实为原料,分别比较了不同乙醇浓度、料液比、超声时间对刺山柑总黄酮的提取率的影响,以正交试验进行筛选分析,选择最佳的提取条件;利用静态及动态吸附-洗脱试验筛选出提取效果较好的大孔树脂对刺山柑总黄酮进行分离。结果表明,在室温下以乙醇浓度为70%、超声时间为60min、料液比1:20时提取效果最佳。静态吸附-洗脱试验筛选出H103、X-5和AB-8树脂对总黄酮的分离效果较好,从动态分离黄酮的实验表明H103型大孔树脂分离效果最佳,总黄酮含量达到63.98%。 相似文献
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将不同浓度的6种新疆地产植物提取物:枸杞多糖、紫草素、番茄红素、辣椒红素、红花红素和红花黄素,以及紫杉醇和香菇多糖加入Hela细胞培养液中,研究其对人Hela细胞增殖的影响。结果表明,在低于250μg/mL浓度时,只有紫杉醇和紫草素对体外Hela细胞的增殖有显著的抑制作用。加入紫杉醇(3.9μg/mL)或紫草素(62.5μg/mL)培养72 h后,细胞全部消失。而枸杞多糖、番茄红素、辣椒红素、红花红素、红花黄素、香菇多糖对Hela细胞的增殖无明显影响。 相似文献
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核桃青皮提取物具有较好的抑菌作用,本试验以核桃青皮及叶片中含量较高的7种植物次生代谢物为研究对象,评价其抑菌活性,为解析核桃青皮提取物的抑菌活性及开发新的饲用抗生素替代品提供参考。以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌为受试菌,将7种植物次生代谢物——绿原酸、鞣花酸、丁香酸、芦丁、单宁酸、对羟基苯甲酸和胡桃醌分别稀释至1.000 0、0.500 0、0.250 0、0.125 0和0.062 5 mg/m L,采用滤纸片扩散法,以培养24 h后抑菌圈直径大小反映植物次生代谢物的抑菌活性。结果显示:除大肠杆菌对羟基苯甲酸和单宁酸不敏感外,其他植物次生代谢物对3种受试菌均有不同程度的抑制作用。对大肠杆菌抑制作用的顺序为鞣花酸胡桃醌芦丁=丁香酸绿原酸对羟基苯甲酸=单宁酸;对枯草芽孢杆菌抑制作用的顺序为鞣花酸绿原酸=对羟基苯甲酸丁香酸单宁酸芦丁胡桃醌;对金黄色葡萄球菌抑制作用的顺序为胡桃醌丁香酸芦丁单宁酸鞣花酸对羟基苯甲酸绿原酸。由此得出,绿原酸、鞣花酸、丁香酸、芦丁、单宁酸、对羟基苯甲酸和胡桃醌对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌具有不同程度的抑制作用,其中鞣花酸对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌有较强的抑制作用,胡桃醌对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用。 相似文献
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本试验研究了饲喂盐地碱蓬对阿勒泰羊屠宰性能的影响。将18只90日龄,平均体重为(22.90±0.4)kg的阿勒泰羊公羊,随机分为3组(n=6)。在全舍饲、日粮精料为70%条件下,分别饲喂玉米秸秆,小麦秸秆,盐地碱蓬,饲喂至180日龄后屠宰。结果表明:盐地碱蓬组平均日增重最高,较玉米秸秆组与小麦秸秆组分别高了9.08%(P0.05)和10.46%(P0.05);盐地碱蓬组屠宰胴体重最高,比玉米秸秆组显著增加了8.94%(P0.05),而与小麦秸秆组无明显差异(P0.05),并且盐地碱蓬组净肉率分别较玉米秸秆组和小麦秸秆组高了13.28%(P0.05)和14.11%(P0.05),脂肪率分别比玉米秸秆组和小麦秸秆组低了21.85%(P0.05)和22.86%(P0.05)。说明盐地碱蓬可以提高阿勒泰羊的日增重,降低料肉比,提高净肉率,降低胴体脂肪率。 相似文献
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核桃外果皮棕色素的提取纯化及其稳定性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
提取、纯化核桃外果皮棕色素,并研究其稳定性。采用溶剂提取法提取得到棕色素粗品,利用盐酸沉淀法和乙醇沉淀法纯化棕色素粗品,并且研究了pH、氧化剂、还原剂、温度、金属离子、食品添加剂对纯化色素稳定性的影响。结果表明,核桃外果皮棕色素的最佳提取溶剂为水,不溶于非极性溶剂,通过盐酸沉淀法和乙醇沉淀法纯化后分别制得色素Ⅰ和色素Ⅱ,色素Ⅰ提取率为6.2%;色素Ⅱ提取率为5.3%。色素Ⅰ和色素Ⅱ性质相近,最大吸收波长均为570 nm和670 nm,两种色素在酸性条件下均有沉淀产生,碱性条件下颜色加深。双氧水使其褪色,而亚硫酸钠不影响其稳定性;色素Ⅰ耐高温,色素Ⅱ在80℃下较稳定;金属离子Na^+、Ca^2+、Cu^2+、Zn^2+、Mg^2+对色素色泽无明显影响,而Fe^3+、Al^3+、Pb^2+对其稳定性影响较大;食品添加剂柠檬酸、维生素C、山梨酸钾、氯化钠、苯甲酸钠对色素无不良影响,而蔗糖会影响两种色素的稳定性。首次提取纯化制得核桃外果皮棕色素,并确定其最大吸收波长,因原料易得,生产工艺简单,并可用于工业化生产,所以核桃外果皮棕色素是一种很有推广价值的天然色素。 相似文献