鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因在杆状病毒表达系统中的表达     

鄢明华  赵晓岩  刘长军  王笑梅  王端  李刚  秦运安  邓国华 《中国预防兽医学报》2003,25(6):426-429

将鸡传染性贫血病毒M9905株VP1、VP2基因分别或同时克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDUAL中，然后转化到DHIOBAC感受态细胞中与Bacmid杆状病毒穿梭载体进行转座重组，最后将重组子转染Sf9昆虫细胞，得到分别或同时含VP1、VP2基因的重组杆状病毒rBacVP1、rBacVP2及rBacVP1—2。PCR扩增结果证实VP1、VP2基因重组到杆状病毒基因组中；SDS-PAGE电泳分析和间接免疫荧光试验结果表明VP1、VP2基因在重组病毒中得到了表达。  相似文献   

非特异性抑制病毒因子的理化特性及作用机理     

王笑梅  张颖 《黑龙江畜牧兽医》1994,(6):30-32

为探讨牛血清中非特异性抑制病毒因子的理化特性，作用机制及存在形式，本研究以鸡传染性法氏囊病毒Ｄ７８（ＩＢＤＶ－Ｄ７８），貉细小病毒（ＲＥＶ）为指标病毒，应用蚀斑形成抑制试验，核内包涵体形成抑制试验等证明，成牛血清对病毒有较强的非特异性抑制作用（平均抑制率为８０％以上）而胎牛血清的这种作用很弱；成牛血清经乙醚，高岭土，受体破坏酶（ＲＤＥ）处理后，抑制作用显著降低。  相似文献   

雪山草鸡感染传染性法氏囊病病毒新型变异株的鉴定     

姜楠  王雨龙  张文英  牛鑫鑫  刘长军  高玉龙  高立  崔红玉  李凯  潘青  张艳萍  刘爱晶  王笑梅  祁小乐 《中国动物检疫》2021,38(5):119-125

传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)新型变异株正在我国广泛蔓延,给商品肉鸡群和蛋鸡群带来了新的威胁。本研究对一个疑似发生非典型传染性法氏囊病的地方品种雪山草鸡群进行了RT-PCR检测,并对分离的3株毒株进行了基因测序及序列分析。结果显示,引起该鸡群发病的病原是IBDV新型变异株,属于A2dB1基因型;这3个毒株的VP2高变区编码蛋白上含有IBDV变异株的特征性氨基酸,也具有IBDV新型变异株的独特氨基酸。结果提示,我国地方品种鸡群中也有IBDV新型变异株的流行,现有的部分商品化IBDV疫苗已不能有效预防IBDV新型变异株的流行。  相似文献   

表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组火鸡疱疹病毒的构建及生物学特性分析     

李晓涵  杨伏春  刘芮  高立  崔红玉  张艳萍  刘长军  祁小乐  王笑梅  高玉龙  李凯 《畜牧兽医学报》2023,54(2):656-662

鸡传染性法氏囊病（IBD）是一种严重危害养禽业的高度致死性和免疫抑制性传染病。为研制IBD重组火鸡疱疹病毒（HVT）活载体疫苗,本研究构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）保护性抗原VP2基因的重组HVT并对其体外生物学特性进行了分析。通过RT-PCR扩增IBDV超强毒株VP2基因并克隆入pCI载体,获得重组真核表达质粒pCI-VP2。用限制性内切酶将携带CMV启动子的VP2基因表达框架切下,连接于入门质粒pENTR,构建获得重组入门质粒pENTR-VP2。将pENTR-VP2与HVT重组黏粒H3-Kan/ccdB进行LR重组反应,构建重组表达黏粒H3-VP2。用H3-VP2与其他4个相互重叠并覆盖HVT全基因组的黏粒共同转染鸡胚成纤维细胞（CEF）,拯救获得重组病毒rHVT-VP2。将重组病毒在CEF中连续传至20代后用PCR、间接免疫荧光试验和免疫印迹试验进行检测,并绘制重组病毒体外生长曲线,分析其体外复制特性。结果表明,重组病毒rHVT-VP2能够稳定表达VP2蛋白,rHVT-VP2在CEF中的复制能力与亲本病毒无明显差异。重组病毒rHVT-VP2免疫鸡后能够诱导产生IBDV中和抗体,并对IBDV强毒株攻击引起的死亡提供90%免疫保护。重组病毒rHVT-VP2的构建为研制IBD重组HVT活载体疫苗奠定了基础,对IBD的防控具有重要意义。  相似文献   

禽白血病的防治     

高玉龙  王笑梅 《畜牧兽医科技信息》2010,(1):94-96

禽免疫抑制病研究组,主要从事免疫抑制病(鸡传染性法氏囊病、禽白血病、鸡传染性贫血病等)的流行病学、致病机理、诊断方法及疫苗开发等研究。欢迎广大基层养鸡场及临床兽医技术人员来电、来函进行技术咨询。  相似文献   

杆状病毒表达SARS冠状病毒纤突蛋白及其抗原性分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

王喜军  胡森  王清华  邓国华  王笑梅  吴东来  申之义  步志高 《中国预防兽医学报》2005,27(6):549-552

本研究构建了SARS冠状病毒纤突蛋白(S)重组杆状病毒(rBac-SS).SDS-PAGE及Western-Blot分析表明约190Ku左右的重组SARS纤突蛋白(rSS)在rBac-SS感染圆昆虫细胞获得表达,并具有特异免疫反应原性.以rBac-SS感染的昆虫细胞裂解物稀释后直接包被ELISA板,与Vero细胞培养的全病毒裂解物比较,检测SARS-CoV康复病人血清特异抗体,表现出同样的敏感性和特异性;rBac-SS感染的昆虫细胞用于间接免疫荧光,快速检测血清特异抗体反应,具有良好的敏感性和特异性.结果显示,杆状病毒表达的rSS有望替代SARS-CoV全病毒,作为安全、敏感和特异的重组诊断抗原,并为探索重组亚单位疫苗的可行性奠定基础.  相似文献   

肉种鸡群中J亚群禽白血病的危害和净化     

付朝阳  高友兰  王笑梅 《畜牧兽医科技信息》2003,19(3):7-9

1.病原及临床症状 J亚群禽白血病(subgroup J Avian Leukosis)是由J亚群禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus Subgroup J,ALV-J)引起的一类禽类传染性肿瘤疾病,病原属于反转录病毒,与过去已经发现的ALV亚群A、B、C、D、E中的任何一种都不相同,ALV-J核衣壳的蛋白质由gag基因编码,包括主要的群特异性抗原;包膜由env基因编码;逆转录酶由pol基因编  相似文献   

传染性法氏囊病超强毒Gx株VP3基因在病毒致弱过程中的变异研究     

张厚双  王笑梅  高宏雷  付朝阳  包晓玮  彭志伟  鞠玉琳 《中国预防兽医学报》2006,28(2):128-132

利用SPF鸡胚对鸡传染性法氏囊病超强毒vvIBDV Gx株进行培育，通过鸡胚成纤维细胞对病毒进行传代致弱，对其结构蛋白VP3基因核苷酸及推导的氨基酸序列进行分析，从而揭示vvIBDV Gx从超强毒力向弱毒力转化过程中基因的序列变化规律。对不同代次细胞毒序列分析的结果表明，细胞毒在第8代以前，VP3基因序列没有改变，与标准超强毒HK46株氨基酸同源性达99％以上；细胞毒第9代核苷酸和氨基酸序列发生了改变；10代毒VP3基因与标准弱毒P2株氨基酸序列同源性达100％；细胞适应毒传至20代，其VP3基因序列不再改变。从而说明，vvIBDV Gx株在致弱过程中，VP3基因也随之改变。  相似文献   

鸭肠炎病毒UL41基因缺失株的构建及其体外增殖能力分析     

杨伏春  刘芮  李晓涵  高立  刘长军  祁小乐  崔红玉  王笑梅  高玉龙  李凯 《畜牧兽医学报》2022,53(8):2689-2696

旨在构建鸭肠炎病毒（DEV）UL41基因缺失毒株,并对其生物学特性进行分析,本研究以克隆有DEV UL41基因的重组黏粒D1为骨架,利用Red/ET重组技术构建缺失UL41基因的重组黏粒D1 dUL41;将UL41基因缺失重组黏粒D1 dUL41与其他4个克隆有DEV基因组片段的亲本黏粒共转染鸭胚成纤维细胞（DEF）,拯救获得UL41基因缺失毒株rDEV-SD19/dUL41。将该基因缺失病毒感染DEF后,提取病毒基因组进行PCR鉴定及测序,并利用间接免疫荧光试验检测该病毒感染细胞中UL41基因表达情况;绘制拯救的基因缺失病毒的生长曲线,分析其体外复制特性。PCR及测序结果显示,本研究成功构建了缺失UL41基因的重组黏粒D1 dUL41。将该基因缺失黏粒与其他含有DEV基因组的亲本黏粒共转染DEF后能够产生典型的蚀斑病变。PCR及测序结果显示,UL41基因成功从DEV基因组中缺失;间接免疫荧光试验发现,基因缺失病毒rDEV-SD19/dUL41感染DEF后,未见UL41蛋白表达。综上表明,本研究成功构建了DEV UL41基因缺失病毒。体外生长曲线显示,rDEV-SD19/dUL41在DEF中的复制能力明显低于亲本病毒,提示UL41蛋白在DEV复制中发挥重要作用。UL41基因缺失DEV的构建为进一步研究UL41基因在DEV感染和致病中的作用机制奠定了基础。  相似文献   

不同毒力传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定简     

陈玉明  张礼洲  任宪刚  高立  秦立廷  高玉龙  王永强  高宏雷  王笑梅  祁小乐 《中国畜牧兽医》2014,41(1):30-34

传染性法氏囊病病毒（infectious bursal disease virus,IBDV）毒株Gx（超强毒株）、F9（中等毒力毒株）、Gt（弱毒株）遗传背景高度相似,但生物学性状差异显著。为研究不同毒力毒株与宿主细胞相互作用的分子细节,本研究将IBDV Gx、F9、Gt毒株的衣壳蛋白VP2基因克隆入pGBKT7载体,分别构建了诱饵载体pGBGxVP2、pGBF9VP2和pGBGtVP2。经Matchmaker Gold Yeast Two-hybrid System验证,结果显示所构建的3个诱饵载体均无自激活作用,对酵母细胞无毒性作用。本研究为利用酵母双杂交系统深入研究IBDV与宿主相互作用奠定了基础。  相似文献