彩色免疫金银染色法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究   总被引：4，自引：0，他引：4  

李新生  陈红英  崔沛  崔保安 《河南农业科学》2005,(9):94-98

试验首次建立了固相载体上的彩色免疫金银染色法(CIGSS)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),并获得成功。用提纯的PRRSV高免兔制备高免血清,按常规方法提取兔抗PRRSVIgG,建立了检测PRRSV抗原的彩色免疫金银染色法。经方阵试验确定最佳兔抗PRRSV IgG工作浓度为1∶400,金标羊抗兔IgG的工作浓度为1∶1 000,银染色的时间为15 min,彩染的时间为2 min。用该法对提纯的PRRSV病毒抗原的最低检出量为1.469μg/ml,其敏感性为DIGFA的5倍。以CIGSS法检测了52份疑似PRRSV感染的猪样本,阳性率为53.84%,而检测猪细小病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪巴氏杆菌以及正常的Marc-145细胞培养物,均为阴性反应。表明该法具有快速、准确、操作简便、敏感性高、易于判断、特异性强、重复性好等优点,可用于大量PRRSV抗原样本的检测。  相似文献   

猪流感病毒毒株感染对猪外周血淋巴细胞炎性因子转录时相的影响     

张云  张龙现  王亚宾  李金磊  陈雅君  崔保安  胡慧 《兽医大学学报》2014,(1):6-9,16

试验用猪流感病毒（Swine influenza virus,SIV）（毒株）体外感染猪外周血淋巴细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,利用real—timePCR方法对病毒感染不同时间细胞中的病毒量和炎性细胞因子mRNA表达量进行检测。结果显示,感染后1h就可检测到病毒,但病毒量相对较小;在24h时病毒开始大量增殖;在72h病毒量达到最高峰,为1h时20倍以上。IL-1βmRNA的表达量在48h增加到最高;IL-6mRNA的表达量在感染后1h内显著增加;IL-8mRNA的表达量在12h时达到最大量;IL-12P35mRNA的表达量在72h迅速上升,为对照的56．1倍;IL-12P40mRNA的表达量在1～2h表达量较高;IL-13在72h达到最大值,为对照的30．7倍;IL-17mR—NA的表达量在72h达到最大值,为对照的4．9倍;IL-18mRNA的表达量在12h达到对照的1．9倍。结果表明,SIV感染PBMC后,随着病毒的大量复制,多种炎性细胞因子表达量显著增加。  相似文献   

鸡传染性支气管炎病毒HN99株N基因的克隆与序列分析     

张淑霞  贺秀媛  崔保安 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2006,34(11):42-46

根据GenBank中已发表的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)N基因序列,设计并合成1对特异性引物,用RT-PCR方法扩增IBVHN99株的N基因,并将其克隆入pMD18-T载体,转化感受态大肠杆菌Top10,提取pMD18-T-N重组质粒,进行酶切和PCR鉴定,并对阳性质粒进行测序,将测序结果与H52,Ark99,BJ等参考毒株进行序列分析。结果表明,N基因全长为1230bp,编码1条409个氨基酸组成的多肽;其核苷酸与H52,Ark99和BJ等毒株的同源性为88.4%~90.7%,氨基酸同源性为91.7%~94.4%;HN99株与H52,Ark99和BJ等其他各毒株的亲缘关系均较远,是1株新的IBV变异株。  相似文献   

感染PRRSV Nsp2基因部分缺失变异株的仔猪抗体变化规律   总被引：3，自引：0，他引：3  

张凤华  卢晓艳  徐红运  赵琳  刘玉松  范旭  夏平安  崔保安 《华北农学报》2011,26(3):68-71

为了解PRRSV Nsp2基因缺失变异株的致病性,采用2个Nsp2基因分别连续缺失3个和89个碱基的PRRSV变异株Hn-2(GenBank:FJ237419)和Hn-4(GenBank:FJ237421)的病毒液,人工滴鼻感染断奶仔猪,同时用Marc-145健康仔猪细胞培养液滴鼻作对照,在感染后0,7,14,24,3...  相似文献   

猪白细胞介素-2基因的克隆及其重组禽痘病毒载体的构建     

王淑娟  陈红英  魏战勇  刘金朋  耿静微  崔保安 《华北农学报》2011,(5):71-75

采用RT-PCR技术自豫南黑猪脾淋巴细胞中扩增猪IL-2基因(pIL-2),RT-PCR产物进行T-A克隆并测序,获得了猪IL-2基因序列.将BamH Ⅰ酶切的猪IL-2基因非定向克隆到BamH Ⅰ酶切并去磷酸化的pSY538载体上,通过PCR、酶切和测序鉴定,筛选正向插入的重组质粒pSY538/pIL-2.NotⅠ酶...  相似文献   

猪细小病毒感染PK-15细胞抗病毒相关因子转录变化的分析     

李厚伟  魏战勇  尹海燕  陈红英  李金磊  韩志涛  崔保安 《畜牧兽医学报》2011,42(1)

为了解猪细小病毒(PPV)感染后引起干扰素及其相关细胞因子的反应,探讨宿主一病毒之间的作用关系,作者运用荧光定量PCR技术,测定和分析PPV感染PK-15细胞引起的病毒DNA量的变化和细胞因子IFN-β、IFN-γ、IFNAR-1、IFNAR 2、MHC-I、MHC一Ⅱ、MX1、iNOS、2-5AS、RNase L和IRF-3的转录水平.结果显示,PPV感染PK-15细胞12h病毒开始大量迅速增殖,48 h达到最高峰;PPV感染后可引起PK-15细胞中IFN-β、IFN-γ、IFNAR-1、IFNAR-2、MHC-I、MHC-Ⅱ、Mxl、iNOS、2-5AS、RNase I.和IRF-3的转录量显著增加,其中Mχ1基因在24 h转录量达到8 423倍.猪细小病毒感染可引起PK-15细胞抗病毒相关因子转录增加.  相似文献   

猪源粪肠球菌和屎肠球菌多重PCR快速鉴定方法的建立     

王亚宾  陈丽颖  胡慧  段志刚  崔保安 《中国兽医学报》2011,31(8):1123-1127

粪肠球菌和屎肠球菌是引起猪感染发病的优势肠球菌种,以肠球菌的16S rRNA基因设计属特异性引物,利用SodA基因多态性设计种特异性引物,同时优化反应条件,建立了能同时测定猪源粪肠球菌和屎肠球菌多重PCR方法。通过特异性和敏感性分析,该方法能扩增出肠球菌属特异性片段及粪肠球菌和屎肠球菌种特异性片段;对粪肠球菌敏感性为0...  相似文献   

做好准备 迎接丰收     

崔保安 《农村养殖技术》2006,(9):6-6

我国畜牧业历史悠久，它是一个民族产业，其发展空间很大。我国畜牧业的生产产值占农业的生产总值的比例还不到40％，而在发达国家这个比例已经达到了50％，有的甚至达到70％～80％，因此我国畜牧业发展潜力还很大；党和政府非常重视畜牧业发展，制定了一些利于畜牧业发展的相关政策；消费者一定得消费鸡蛋、肉和奶；因此，我们有理由相信我国畜牧业前景非常好，我们应该为我们是畜牧人而自豪！  相似文献   

伪狂犬病病毒Min—A株gE基因的克隆及序列分析     

胡涛崔保安  王学斌杨明凡  张素梅王岩 《中国兽医科技》2003,33(8):15-19

参考GenBank中伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的序列设计了1对引物，对PRVMin—A株进行了PCR扩增，扩增产物克隆于pGEM—TEasy载体。对重组质粒进行限制性内切酶分析和基因测序，证实了克隆片段的可靠性。测序结果表明，目的片段包含1个1740bp的开放性阅读框(ORF)，编码由579个氨基酸组成的多肽。同源性分析表明，PRVMin—A株与PRVEa株、SH株PE基因的核菩酸同源性分别为99．2％、98．7％；推导氨基酸的同源性分别为98．6％、97．2％。  相似文献   

内毒素诱导牛乳腺炎时乳房淋巴和奶中细胞因子的变化     

金喜新  陈红英  崔保安  王川庆 《上海畜牧兽医通讯》2004,(3):30-31

牛乳腺中适度的炎症反应是乳腺感染预后良好所必需的。前细胞因子，包括白介素和TNF-α等，启动乳腺组织炎症反应并诱导白细胞迁入乳房内。  相似文献