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马铃薯卷叶病毒Potato leafroll virus(PLRV)是目前严重影响马铃薯产量与品质的主要病毒之一,给马铃薯产业造成巨大损失。本研究采用环介导等温核酸扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术建立PLRV的RT-LAMP检测方法。采取单因素变化试验,对RT-LAMP反应体系中多个因素包括引物组合、温度条件及Mg~(2+)、betaine、Bst 3.0 DNA聚合酶、dNTPs、UNG、SYBR GreenⅠ和引物组合的浓度进行一系列试验和优化。采用RT-PCR检测方法进行平行比对试验,对优化后的RT-LAMP反应体系进行了验证。结果表明,最佳引物组合为P3,最适反应温度62℃,25μL反应体系中,Mg~(2+)、betaine、Bst 3.0 DNA聚合酶和UNG的最佳终浓度分别为4 mmol/L、0 mmol/L、0.64 U/μL和0.08 U/μL,dNTPs的最佳用量为1μL(dATP、dGTP、dCTP各0.4 mmol/L,dUTP 1.2 mmol/L),SYBR GreenⅠ(20×)的最佳用量1μL,primer mix的最佳用量2.5μL(PLRV-FIP/BIP、PLRV-F3/B3和PLRV-LF/LB的浓度分别为0.8、0.2μmol/L和0.6μmol/L),RNA模板1μL(2 ng/μL),加DEPC-H_2O至25μL,反应时间50 min。优化后的RT-LAMP检测结果与RT-PCR一致,且可视化判读结果。因此,建立的PLRV RT-LAMP检测方法为进一步开发RT-LAMP检测试剂盒及其实际应用奠定了基础。 相似文献
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以黄土高原旱作区马铃薯不同连作年限土壤为研究对象,采用空间代替时间序列方法,对撂荒(CK1)、小麦/豌豆/马铃薯轮作(CK2)、连作2 a、连作4 a和连作6 a等不同连作年限的土壤容重、结构分维、总有机碳、酶活性与微生物数量及变化规律进行研究。结果表明:(1)不同处理土壤容重差异显著,连作6 a土壤容重最小;(2)连作可以改变土壤中不同粒级团聚体的比例,各处理中>4 mm粒径的土壤含量最高;(3)马铃薯长期连作显著降低土壤有机碳含量,连作6 a土壤总有机碳含量较撂荒降低14.27%; (4)马铃薯主要生育期内土壤转化酶、过氧化氢酶变化动态呈“S”型曲线,脲酶呈“M”型变化趋势,3种酶活性与土壤肥力因子均呈极显著正相关,与土壤容重呈极显著负相关;(5)细菌是连作土壤中优势菌,真菌和放线菌也占一定比重;细菌、真菌和放线菌数量在0~10 cm土层显著高于10~20 cm土层;马铃薯长期连作显著降低土壤微生物数量,群落结构随连作年限明显改变。 相似文献
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"带警犬就像带孩子,要熟悉他们的脾性,要有耐心,慢慢地磨合"提起自己带的警犬,贡洪斌的眼中都带着光.
1996年,怀着对公安事业的无限憧憬和对警犬事业的热爱,贡洪斌成为武汉市警犬基地的一名警犬训导员.
或许在旁人眼里牵着警犬执勤是一件"威风"的事,但只有警犬训导员才知道这"威风"背后的苦与泪.正所谓"台上一分钟,台下十年功",每一个小科目的训练,都需要成百上千次的重复.为了培养与警犬的默契,贡洪斌与犬朝夕相处,通过游戏、"聊天"和饲喂,摸清犬的脾性,与犬培养感情,建立良好的亲和关系."'策利'活泼,'小黑'温顺,'发仔'沉稳,'夏瑞'机敏……"每一个"无言"伙伴的特点,贡洪斌都能一一道来. 相似文献
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我市竹峰乡赛力村蔡某饲养 84只山羊 ,常年在荒山放牧。2 0 0 2年 8月底羊群开始陆续发病 ,先后有 13只山羊 (其中羔羊 11只 ,成年羊 2只 )出现严重下痢症状。曾使用氟哌酸针剂、杀痢霸、三七二等抗菌消炎止痢药物治疗 ,均无效。病程3~ 7d不等 ,死亡 1只成年羊、 7只羔羊。 9月 11~ 19日我们经过实地临床观察、剖检、药物试治和实验室检查 ,诊断为莫尼茨绦虫病。现报告如下。1 临床症状病羊贫血、消瘦 ,被毛粗糙无光泽 ,食欲降低 ,饮欲增加 ,严重腹泻 ,喜躺卧 ,体温正常 (3 9℃左右 )。主诉病羊后期出现肠膨胀和腹痛表现 ,有的病羊还出现… 相似文献
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