豆粕发酵产蛋白酶功能菌株的筛选及鉴定     

贾笑颖  孙佳琪  高同国  雷白时  茹雪峰  朱宝成 《河南农业科学》2018,(4)

为提高豆粕饲用价值,筛选用于豆粕发酵的高产蛋白酶菌株,采用细菌培养与蛋白酶活性测定方法,结合接种后豆粕固体发酵中酸溶蛋白质的含量,筛选出蛋白酶产量高、发酵效果好的菌株进行鉴定。结果显示,筛选到9株蛋白酶活性较高的菌株,其透明圈半径大于4 mm,酸性蛋白酶活性大于10 U/m L,中性蛋白酶活性大于50 U/m L。豆粕固体发酵结果显示,接种N-12菌株发酵30 d后,酸溶蛋白质含量最高达13.47%。结合菌落菌体形态、16S r DNA序列及生理生化性质鉴定,N-12菌株为芽孢杆菌Bacillus siamensis。  相似文献   

启动子及信号肽筛选提高普鲁兰酶在地衣芽孢杆菌中的表达     

王倩  初晓宇  朱宝成  伍宁丰 《中国农业科技导报》2019,21(6):61-69

普鲁兰酶(pullulanase)是一种淀粉脱支酶,在淀粉糖化加工等工业生产中具有重要的应用价值。选用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis) BL10作为表达宿主,为了提高其中的普鲁兰酶产量,对来自枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 168和地衣芽孢杆菌BL10中的15种不同信号肽以及4种不同启动子进行筛选,构建了不同的重组工程菌株,最终发现在以P43为启动子、apr为信号肽的条件下,上清液中普鲁兰酶的表达量最高,酶活可达12 U/m L,且测得其最适反应温度为60℃,最适p H为4.5。结果表明通过对启动子及信号肽进行筛选是提高重组工程菌株中目的蛋白表达量的一种有效手段。  相似文献   

产芽孢纤维素降解细菌XN-13菌株的筛选及酶活力测定     

王全  李术娜  李红亚  雷白时  陈妍  张立静  朱宝成 《中国农学通报》2009,25(11):180-185

为筛选对纤维素具有降解作用的产芽孢细菌,以牛粪为原料分离到217株降解细菌,采用刚果红平板法对其进行初筛,对其发酵液测定酶活进行复筛,其中XN-13有显著的降解活性,酶活力达1700 U/mL。对这株菌进行了菌体形态、菌落特征的观察及一系列生理生化试验和16S rDNA的序列测定,结合XN-13菌株的形态特征和生理生化特征综合考察,初步判断XN-13为一株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。产纤维素酶芽孢杆菌的获得对菌剂的大工业生产及菌剂的商品化具有重要意义。  相似文献   

一个棉花黄萎病抗菌肽基因25a2的克隆与表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

张冬冬  王世英  郭晓军  姜军坡  刘慧娟  朱宝成 《棉花学报》2009,21(5):346-350

 将棉花黄萎病抗菌肽A2的N端15个氨基酸序列在NCBI进行同源序列比较,根据同源蛋白的DNA序列设计引物,以解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）RS-25菌株基因组为模板,应用PCR扩增出一条约300 bp的DNA片段。序列分析表明,DNA片段长354 bp,编码117个氨基酸,将该基因命名为25a2。构建表达载体pET-28a-25a2,转化大肠杆菌（Eschrichia coli）BL21,37℃培养,应用终浓度为1 mmol·L^-1的IPTG诱导,表达产物经SDS PAGE分析,得到分子量约15 kDa表达蛋白条带,与理论蛋白分子量相符。  相似文献   

草莓灰霉菌毒素的分离及硅胶薄层层析   总被引：4，自引：1，他引：4  

周毓君  朱宝成 《植物病理学报》1995,25(4):373-377

 草莓灰霉菌毒素对热较稳定,长时间光照可使毒素活性降低,提高pH值能使毒素钝化。培养液中的毒素可用乙酸乙酯和氯仿萃取出来。其萃取液呈现特征性吸收峰。毒素萃取液经硅胶薄层层析的结果表明,毒素具有三个组分,Rf值分别为0.59(Ⅰ)、0.75(Ⅱ)和0.96(Ⅲ),经毒力测定,组分Ⅰ和Ⅲ是毒素的主要活性成分。灰霉菌毒素对草莓愈伤组织细胞的线粒体和内质网的结构造成严重破坏,从而使细胞致死。  相似文献   

小麦四种镰刀菌毒素的ELISA检测及毒素污染分析   总被引：3，自引：1，他引：2  

吴杰  刘太国  高利  朱宝成  陈万权 《植物保护学报》2009,36(2):106-112

为明确镰刀菌毒素在小麦中的污染与分布状况,选取以四种镰刀菌毒素的特异性抗体制备的ELISA试剂盒,检测了来自全国范围内的183个冬小麦、46个春小麦品种(系)样品中的镰刀菌毒素含量,并对不同麦区小麦样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、伏马(fumonisin)、单端孢霉烯醇(T-2)和玉米赤霉烯酮(ZON)四种毒素含量及污染率进行比较分析.结果表明,我国小麦品种(系)中镰刀菌毒素污染比较普遍,但污染水平较低,均符合国家规定标准.四种镰刀菌毒素中以DON毒素为主,其平均含量为73.87μg/kg.不同麦区间DON、fumonisin和T-2毒素的含量存在显著差异(P<0.01),而ZON毒素的含量在麦区间差异不显著(P>0.05),东北春麦晚熟组、长江中下游冬麦组和黄淮冬麦区南片冬水组镰刀菌毒素总体含量较高.DON与ZON毒素污染率在麦区间存在显著差异(P<0.01),而fumonisin与T-2毒素污染率差异不显著(P>0.05).在不同麦区间,东北春麦晚熟组的DON毒素的含量和污染率均为最高.  相似文献   

产芽孢纤维素降解细菌XN-13菌株筛选及酶活力测定     

王全  李术娜  李红亚  雷白时  陈妍  张立静  朱宝成 《勤云标准版测试》2009,29(11)

为筛选对纤维素具有降解作用的产芽孢细菌,以牛粪为原料分离到217株降解细菌,采用刚果红平板法对其进行初筛,对其发酵液测定酶活进行复筛,其中XN-13具有显著的降解活性,酶活力达1700U/ml.对XN-13进行了菌体形态、菌落特征的观察及一系列生理生化试验和16S rDNA的序列测定,结合XN-13菌株的形态特征和生理生化特征综合考察,初步判断XN-13为一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).产纤维素酶芽孢杆菌的获得对菌剂的大工业生产及菌剂的商品化具有重要意义.  相似文献   

木薯醇腈酶在枯草芽孢杆菌中的表达及活性检测     

张冬冬  郭晓军  刘慧娟  雷白时  牛振东  朱宝成 《河北农业大学学报》2009,32(3)

醇腈酶(α-hydroxynitrile lyase,HNL)能够催化羰基化合物和HCN立体选择性的加工形成手性醇腈化合物。以含有木薯醇腈酶基因的重组质粒pET28a-HNL为模板,应用PCR扩增得到HNL基因,将其连接到pMD18-T载体中进行测序分析,然后通过Nde I和Xba I2个酶切位点将其连接到枯草芽孢杆菌表达载体pMA5Z2中,获得了含有HNL基因的重组质粒pMA5Z2-HNL,转化蛋白质三缺陷的枯草芽孢杆菌DB1342。SDS-PAGE显示HNL在枯草芽孢杆菌DB1342中获得表达,产物分泌到细胞外,每毫升发酵液中获得了2.108 U的醇腈酶。  相似文献   

大丽轮枝菌拮抗细菌枯草芽孢杆菌12-34菌株发酵产抗菌蛋白的条件优化   总被引：4，自引：0，他引：4  

李术娜  姜军坡  朱莹  李佳  李红亚  王树香  朱宝成 《植物保护》2009,35(3):51-56

采用单因素试验及正交试验结合的方法,优化大丽轮枝菌拮抗细菌枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）12-34菌株产抗菌蛋白的发酵条件。通过单因素试验和正交试验,确定了B. subtilis 12-34菌株产抗菌蛋白的适宜碳源、氮源和无机离子,优化了培养基的组成;并对B. subtilis 12-34菌株产抗菌蛋白的发酵时间、装瓶量、接种量、培养基初始pH、摇床转速和发酵温度进行了优化。结果显示,B. subtilis 12-34菌株产抗菌蛋白的最佳培养基组成为玉米粉5%,牛肉浸膏3%,CaCl 2 0.10%,KCl 0.05%;B. subtilis 12-34菌株产抗菌蛋白的最佳发酵条件为培养基初始pH9.0,种子液按10%接种量接种至50 mL/250 mL三角瓶中,200 r/min,37 ℃培养48 h。优化后表征抑菌蛋白产量的抑菌圈直径增大了115.5%。  相似文献   

接种微生物对土壤中Cd、Pb、Zn生物有效性的影响   总被引：4，自引：0，他引：4  

杨卓  李术娜  李博文  朱宝成  袁洪水  郭艳杰 《土壤学报》2009,46(4):670-675

针对提高植物修复土壤重金属污染的效果,以印度芥菜作为重金属富集植物,通过盆栽试验研究了巨大芽胞杆菌和胶质芽胞杆菌的混合微生物制剂(A处理)和黑曲霉发酵液(B处理)对植物修复Cd、Pb、Zn污染土壤的作用效果。结果表明:巨大芽胞杆菌和胶质芽胞杆菌的混合微生物制剂,不仅可以促进富集植物的生长,使其印度芥菜的生物量提高24.73%,并且可促进土壤Cd、Pb、Zn的活化,使土壤Cd、Pb、Zn有效态含量分别提高15.02%、7.65%和2.23%,增强富集植物对土壤的Cd、Pb、Zn富集吸收,使印度芥菜对土壤Cd、Pb、Zn的提取量分别提高52%、121%和23%,显著提高其植物修复效果。从对植物生理生化指标的影响来看,A处理对植株的伤害程度要低于B处理,它是一种有助于植物修复Cd、Pb、Zn污染土壤的微生物制剂,在植物修复领域有较高的利用价值。然而,黑曲霉混合发酵液不适于促进植物修复应用。  相似文献